Producción de biofilm y presencia de genes icaABCD en cepas de Staphylococcus aureus aisladas de leche cruda / Biofilm production and presence of genes icaABCD in Staphylococcus aureus strains isolated from raw milk

En la patogénesis de la mastitis estafilocócica, el biofilm se considera un marcador de virulencia que permite la adherencia del microorganismo al epitelio mamario. Con la finalidad de determinar la producción de biofilm y detectar la presencia de genes icaABCD, se analizaron 30 cepas de S. aureus aisladas de leche cruda obtenida de vacas con mastitis subclínica. El biofilm se determinó por el método cuantitativo sobre microplacas de cultivo celular y los genes icaABCD por reacción en cadena de la polimerasa. En 96,67% de las cepas de S. aureus se observó producción de biofilm. De éstas 43,34% fueron fuertes productoras, 30,00% moderadas productoras, 23,33% débiles productoras y 3,33% no productoras de biofilm. La totalidad de los genes icaADCD se obtuvo en 6,66% de los aislamientos. Todas las cepas, excepto una, presentaron icaA o icaD. En 56,66% de los aislamientos se identificaron genes icaA/icaD. En todas las cepas productoras de biofilm se identificaron genes del operón icaABCD, lo cual evidencia que poseen un factor de virulencia que facilita su persistencia en el tejido mamario. Además, el biofilm constituye una fuente de contaminación microbiana que puede conducir a fallas en los procesos de producción que generen problemas de inocuidad de los alimentos.

In the pathogenesis of staphylococcal mastitis the biofilm is considered a marker of virulence that allows the adhesion of the microorganism to the mammary epithelium. In order to determine the production of biofilm and the presence of icaABCD gene, 30 S. aureus strains isolated from raw milk obtained from cows with subclinical mastitis were analyzed. Biofilm production was determined by the quantitative method on microplates for cell culture and the presence of genes icaABCD by polymerase chain reaction. Biofilm production was observed in 96.67% of strains of S. aureus. These 43.34% were strong producers, 30.00% producing moderate, 23.33% weak producers and 3.33% non producing biofilm. All of the icaABCD genes was obtained at 6.66% of the isolates. All strains, except one, presented icaA or icaD. 56,66% of isolates identified genes icaA/icaD. The icaABCD operon genes were identified in all biofilm-producing strains, which demonstrates that they possess a virulence factor that facilitates its persistence in the breast tissue. In addition, the biofilm is a source of microbial contamination which can lead to failures in production processes that generate problems of food safety.

Producción de Enterotoxina y Biofilm en Aislamientos Clínicos de Staphylococcus aureus Resistente a Meticilina / Enterotoxin and Biofilm Production in Clinical Isolates of Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus

S. aureus se ha convertido en un problema de salud pública, debido a la dificultad que representa el tratamiento de las infecciones causadas por SARM. El propósito de esta investigación fue determinar la producción de enterotoxinas A, B, C y D y la producción de biofilm en aislamientos de SARM. Se estudiaron 50 cepas aisladas de diferentes tipos de muestras clínicas. La detección de enterotoxinas se realizó por la técnica de aglutinación en fase reversa y la producción de biofilm mediante: agar rojo congo y el método en microplacas de cultivos celulares. La producción de enterotoxina se observó en 9 cepas (18%), siendo la enterotoxina D (64%) la más prevalente, seguida de la B (27%) y la A (9%). Se demostró una asociación significativa entre la producción de enterotoxina y el tipo de muestra de la que provenía la cepa. La producción de biofilm se constató en 30% y 98% de las cepas por los métodos de agar rojo congo y microplacas de cultivos celulares, respectivamente; sólo en 15 cepas (30%) se observó correlación de ambos ensayos, se demostró que el método en microplacas de cultivo celular es más eficaz para detectar la producción de biofilm en S. aureus.

S. aureus has become a public health problem, due to the difficulty of treating infections caused by methicillin-resistant S. aureus (MRSA). The purpose of this research was to determine the production of enterotoxins A, B, C and D and the production of biofilm in clinical isolates of MRSA. Fifty MRSA strains isolated from different types of clinical samples were studied. Detection of enterotoxins was carried out using the technique of reversed phase agglutination, while biofilm production was studied through two tests: Congo red agar and the microplate cell culture method. Enterotoxin production was observed in 9 strains (18%); enterotoxin D (64%) was the most prevalent, followed by B (27%) and A (9%). A significant association was shown between enterotoxin production capacity and the type of sample that came from the strain. Biofilm production was found in 30% and 98% of the strains using the Congo red Agar and microplate cell culture methods, respectively. A correlation of both trials was observed in only 15 strains (30%). It was shown that the microplate cell culture method is more effective for detecting biofilm production in S. aureus strains.

Calidad microbiológica y bacterias enteropatógenas en vegetales tipo hoja / Microbiological quality and enteropathogenic bacteria in leaf vegetables

Para analizar la calidad microbiológica en vegetales tipo hoja y la incidencia de bacterias enteropatógenas se analizaron 150 muestras (50 lechugas, 50 cilantros y 50 perejiles) recolectadas en dos supermercados de Maracaibo. Se determinó Coliformes Totales (CT) y Escherichia coli (EC) según la norma COVENIN Nº3276:1997; para la determinación de bacterias enteropatógenas (Salmonella, Aeromonas y Vibrio) se utilizaron medios de enriquecimiento y selectivos. La identificación de especies se realizó empleando pruebas bioquímicas. En 81,33% (122/150) de las muestras se obtuvieron contajes de CT entre 10³-10 5 UFC/g. La recuperación de EC fue de 10,00%. La frecuencia de enteropatógenos fue de 28%, siendo Aeromonas el género más aislado con un 95,91%. La mayor recuperación de enteropatógenos se obtuvo en las muestras de cilantro (40,00%), seguida de perejil (34,00%) y lechuga (20,00%); A. caviae fue la especie más recuperada (59,18%) seguida de A. hydrophila (30,62%). Salmonella spp se recuperó en 2 (4,08%) muestras. La presencia de indicadores entéricos (CT y EC) y de bacterias enteropatógenas sugiere que los vegetales tipo hoja presentan una inadecuada calidad sanitaria y pueden ser fuente de gastroenteritis

To analyze the microbiological quality of leaf vegetables and the incidence of enteropathogenic bacteria, 150 samples (50 lettuce, 50 coriander and 50 parsley) collected in two supermarkets in Maracaibo, were studied. Total coliforms (TC) and Escherichia coli (EC) according to COVENIN guideline N° 3276: 1997, were determined; for the identification of enteropathogenic bacteria (Salmonella, Aeromonas, Vibrio), enrichment and selective media were used. Species identification was made using biochemical tests. In 81.33% (122/150) of the samples obtained, TC counts were between 10³-10 5 CFU/g. EC recovery was 10.00%. The frequency of enteropathogens was 28%, with Aeromonas the most isolated genus (95.91%). Greater recovery of enteropathogens was obtained from coriander (40.00%), followed by the parsley (34.00%) and lettuce samples (20.00%); A. caviae was the most recovered specie (59.18%) followed by A. hydrophila (30,62%). Salmonella spp were recovered in 2 samples (4.08%). The presence of enteric indicators (TC and EC) and enteropathogenic bacteria suggests that the sanitary condition of the leafy vegetables is inadequate and can be a source of gastroenteritis