Survey of verotoxin-producing Escherichia coli and faecal coliforms in beef carcasses destined for export at slaughterhouses in Brazil

Abstract This study investigated the presence of generic and verotoxin-producing E. coli as well as enumerated faecal coliforms in 30 beef carcasses in different parts of the slaughter process (after skinning, washing and cooling) at each of three slaughterhouses of the state of Mato Grosso do Sul, Brazil. Among the total number of carcasses examined (n = 90), 39 (43.3%) had generic E. coli. Among the 270 samples analysed, 25 (9.3%) were positive after skinning, 14 (5.2%) were positive after washing and nine (3.3%) were positive after cooling. The majority of isolates of E. coli was collected from samples after skinning, which is considered a critical point of the microbial contamination of carcasses. However, the highest concentration of faecal coliforms was found after the washing step. The cooling step proved to be important to reducing the amount of hygiene-indicator microorganisms. The E. coli isolates had no stx1 or stx2 genes associated with virulence.

Correlation between chronic inflammation, immunostaining and parasite load in the genital system of female dogs naturally infected with Leishmania infantum / Correlação entre inflamação crônica, imunomarcação e carga parasitária no sistema genital de cadelas naturalmente infectadas com Leishmania infantum

ABSTRACT: The aim of the present study was to investigate the correlations among chronic inflammatory reaction, immunostaining and parasite load in the genital system of female dogs naturally infected with Leishmania infantum . Animals (n = 10) used in this study were from the Department of Vector Control and Animal Surveillance of the municipality of Caruaru, state of Pernambuco, Brazil. Fragments of the vulva, vagina, cervix, uterine body, uterine horns and ovaries were submitted to histopathological analysis, immunohistochemistry (IHC) and DNA detection of amastigotes by qPCR. Correlations were found between the IHC findings and chronic inflammatory infiltrate related to L. Infantum only in the vulva and vagina; whereas, the same inflammatory reactions without immunostaining were observed in all organs, except the ovaries. L. Infantum DNA was detected in all organs of genital system, with no difference in parasite load observed among the different organs. No correlation was reported between parasite load and inflammatory lesions in the organs evaluated, except for the uterine body, in which an inverse correlation was detected. In conclusion, the vulva and vagina were the major sites of lesions and immunostaining for L. Infantum amastigotes in the genital system of female dogs. Moreover, parasite load exerted no influence on the intensity of the lesions in the organs evaluated.

RESUMO: Considerando a falta de estudos sobre lesões nos órgãos genitais de cadelas naturalmente infectadas por Leishmania infantum , o objetivo do presente estudo foi investigar a correlação entre reação inflamatória crônica, imunomarcação e carga parasitária, no sistema genital. Dez animais foram fornecidos pelo Departamento de Controle de Vetores e Vigilância Animal do município de Caruaru, Estado de Pernambuco, Brasil. Fragmentos de vulva, vagina, cérvix, corpo do útero, corno do útero e ovários foram avaliados por descrição histopatológica, imuno-histoquímica (IHQ) e detecção de DNA de formas amastigotas por qPCR. A relação entre IHQ e infiltrado inflamatório crônico relacionado com L. infantum foi observada apenas na vulva e vagina, enquanto as mesmas reações sem imunomarcação foram observadas em todos os órgãos, exceto nos ovários. DNA de L. infantum foi detectado em todos os órgãos do sistema genital, porém, sem diferença de carga parasitária entre eles. Não houve correlação entre a carga parasitária e lesões inflamatórias nos órgãos avaliados, com exceção do corpo do útero, em que foi encontrada uma correlação inversa. Em conclusão, a vulva e a vagina foram os principais locais de lesões e imunomarcação para formas amastigotas L. infantum no sistema genital de cadelas. A carga parasitária não influenciou a intensidade das lesões nos órgãos avaliados.

Histopathological evaluation and parasite quantification (qPCR) in the male dog's genital system after natural infection with Leishmania infantum / Avaliação histopatológica e quantificação parasitária (qPCR) no sistema genital de cães machos após infecção natural com Leishmania infantum

ABSTRACT: Canine visceral leishmaniasisis an important disease caused by the protozoon Leishmania infantum which affects several organs and systems, including the genital tract. The L. infantum tropism to the male genital system and correlation among parasite load, immunohistochemistry detection and structural changes in these organs is controversy. Therefore, the aim of this study was to evaluate this correlation in the genital organs of the male dogs naturally infected with L. infantum. Samples from testicles, epididymis, prostate, glans penis, prepuce and scrotum were collected from 19 positive adult dogs. Structural changes were observed in the testicles (5.2%), epididymis (2.6%), prepuce (5.2%) and scrotum (5.2%) of the samples positive at immunohistochemistry examination. Conversely, similar structural changes were observed in all tissues negative at immunohistochemistry analysis. Moreover, L. infantum DNA was detected in all organs with the highest parasite load found in testicles, epididymis, and prostate gland. , Testicles had the highest parasite load but the lowest number of inflammatory lesions. These inflammatory lesions were observed in all organs of reproductive system of dogs; however, no correlation was observed between the parasite load and inflammatory lesions of dogs naturally infected with L. infantum.

RESUMO: A Leishmaniose Visceral Canina é uma importante enfermidade causada pelo protozoário Leishmania infantum que afeta diversos órgãos e sistemas, incluindo o trato genital. No entanto, o tropismo da L. infantum pelo sistema genital masculino e a correlação entre carga parasitária, detecção imunohistoquímica e alterações estruturais nesses órgãos ainda é uma questão controversa. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi avaliar essa correlação em órgãos genitais de cães naturalmente infectados por L. infantum. Para tal, amostras de testículos, epidídimos, próstata, glande, prepúcio e escroto foram coletadas de 19 cães adultos positivos. Lesões microscópicas associadas com imunomarcação de formas amastigotas do parasito foram observadas nos testículos (5,2%), epidídimos (2,6%), prepúcio (5,2%) e escroto (5,2%). Por outro lado, alterações estruturais sem imunomarcação foram observadas em todos os órgãos. Além disso, o DNA de L. infantum foi encontrado em todos os órgãos com maior carga parasitária nos testículos, epidídimos e próstata. Curiosamente, os testículos apresentaram a maior carga parasitária, porém apresentaram o menor grau de lesões inflamatórias. Essas lesões inflamatórias foram observadas em todos os órgãos do sistema reprodutor de cães com L. infantum. Entretanto, não houve correlação entre carga parasitária e lesões inflamatórias nestes órgãos.

Molecular identification of Hepatozoon canis in dogs from Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Brazil / Identificação molecular de Hepatozoon canis em cães de Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Brasil

The aim of this study was to investigate the occurrence of Hepatozoon species infecting dogs in the municipality of Campo Grande, Mato Grosso do Sul (MS), Brazil, using blood samples (n = 165) drawn from dogs. The species Hepatozoon caniswas identified in 3.63% of the tested animals using molecular tools. Further studies are needed to determine the clinical relevance of this infection and the main arthropod vectors involved in its transmission.

O objetivo deste estudo foi identificar a frequência e espécies de Hepatozoon infectando cães no município de Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Brasil. Uma amostragem de 165 animais foi utilizada e, por meio do uso de ferramentas moleculares, a espécie Hepatozoon canis foi identificada em 3,63% dos animais. Mais estudos são necessários para identificar a relevância clínica e os principais vetores envolvidos na transmissão desse protozoário na região.

Detecção sorológica e molecular de Anaplasma marginale em búfalos na Ilha de Marajó, Pará / Serological and molecular detection of Anaplasma marginale in water buffaloes on Marajó Island, State of Pará, Brazil

O objetivo do estudo foi testar a prevalência sorológica e molecular de Anaplasma marginale em búfalos do municipio de Soure, Ilha de Marajó, estado do Pará, Brasil. Para a pesquisa sorologica foram selecionados randomicamente 800 animais e para a pesquisa molecular 50 destes animais foram aleatoriamente escolhidos. Para quantificar a prevalência sorológica utilizou-se o ensaio de imunoadsorção enzimático indireto (iELISA) com antígeno total contendo proteínas de superfície externa e para quantificar a prevalência molecular utilizou-se a reação em cadeia da polimerase (PCR), envolvendo a amplificação de fragmento gênico da proteína de superfície maior 5 (MSP5). A prevalência de animais positivos no ELISA para A. marginale foi de 25% (200/800). Na PCR foi detectada a presença de A. marginale em 2% (1/50) dos animais. Embora apenas um animal tenha sido positivo na PCR, observou-se que o mesmo foi negativo no ELISA. A presença do agente, mesmo em baixa prevalência, mostra que os bubalinos podem funcionar como um importante reservatório desse patógeno para os rebanhos bovinos da região norte do Brasil.

The aim of the study was to test the molecular and serological prevalence of Anaplasma marginale in water buffaloes of the Marajó Island, State of Pará, Brazil. For serologic research were randomly selected 800 buffaloes and for molecular research 50 of these animals were randomly chosen. To quantify the serological prevalence we used the indirect enzyme linked immunosorbent assay (iELISA) with total antigen containing proteins outer surface. To quantify the prevalence molecular was used the polymerase chain reaction (PCR) involving gene amplification fragment larger surface protein 5 (MSP5). The prevalence of positive animals in iELISA was 25% (200/800). In the PCR we detected the presence of A. marginale in 2% (1/50) of animals. Although only one animal was positive in PCR, we found that it was negative in ELISA. The presence of the agent, even in low prevalence, shows that buffaloes can act as an important reservoir for transmission of the pathogen to cattle in northern Brazil.

Polymerase chain reaction and real-time PCR for diagnosing of Leishmania infantum chagasi in dogs / Reação em Cadeia da Polimerase e PCR em tempo real para diagnóstico de Leishmania infantum chagasi em cães

The importance of dogs as a reservoir for Leishmania infantumchagasi in urban environments has stimulated numerous studies assessing diagnostic techniques. When performed properly, such procedures are an important step in preventing leishmaniasis in humans. Molecular methods have become prominent for this purpose. The aim of the present study was to determine the performance of the polymerase chain reaction (PCR) and real-time PCR (qPCR) for diagnosing of canine visceral leishmaniasis (CVL) using different biological samples. For this, 35 dogs from an area endemic for CVL were used. Bone marrow aspirate and lymph node and spleen fragments from these dogs were used for the molecular diagnosis. In the present study, qPCR was able to detect a greater number of positive animals than seen with PCR. Among the different biological samples used, there was no significant difference in L. infantumchagasi DNA detection between PCR and qPCR. However, considering that lymph nodes are easy to acquire, these can be considered to be the best samples for making molecular diagnoses of L. infantum chagasi infection.

A importância do cão como reservatório de L. infantum chagasi no meio urbano tem estimulado a realização de inúmeros trabalhos de avaliação de técnicas de diagnóstico, uma vez que este procedimento, quando realizado corretamente, torna-se um importante passo na prevenção da doença em humanos. Dentre os métodos de diagnóstico, as técnicas moleculares têm adquirido destaque. Objetivou-se neste trabalho verificar o desempenho da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e da PCR em tempo real (qPCR) para diagnóstico da Leishmaniose Visceral Canina (LVC) utilizando diferentes amostras biológicas. Para tanto foram utilizados 35 cães provenientes de uma área endêmica para LVC, onde foram utilizados para o diagnóstico molecular, aspirado de medula óssea, fragmentos de linfonodo e baço. Neste estudo a qPCR foi capaz de detectar um maior número de animais positivos quando comparada com a PCR. Já entre as diferentes amostras biológicas utilizadas não foi observada diferença significativa na detecção de DNA de L. infantumchagasi por meio da PCR e qPCR. Mesmo assim, considerando a facilidade de obtenção, o linfonodo pode ser considerada como a melhor amostra para diagnóstico molecular da infecção por L. infantum chagasi.

Caracterização da imunogenicidade das proteínas recombinantes Virb9, Virb10 e fator termo instável de Elongação de Peptídeos de Anaplasma marginale em camundongos / Characterization of the immunogenicity of recombinant proteins VirB9, VirB10 and Elongation Factor Tu of Anaplasma marginale in mice

Considerando as limitações dos atuais métodos de controle contra a anaplasmose bovina, o desenvolvimento de uma vacina efetiva se faz necessário. A partir do advento da análise genômica e proteômica, novas proteínas de membrana de Anaplasma marginale foram identificadas como possíveis candidatas a componentes de uma vacina, tais como, VirB9, VirB10 e Fator Termo Instavél de Elongação de Peptídeos (EF-Tu). Embora estas proteínas ainda não estejam bem caracterizadas na membrana de A. marginale, a produção destas na forma recombinante (rVirB 9, rVirB10 e rEF-Tu) tem sido realizada, mas as mesmas ainda não foram exploradas em formulações vacinais. Neste trabalho, avaliou-se o uso de rVirB9, rVirB10 e rEF-Tu emulsionadas em adjuvante Montanide em camundongos. Nas condições testadas, verificou-se a indução de forte resposta imune humoral com a produção de IgG1 e IgG2a, sendo que as proporções dos níveis de produção destas subclasses indicam predomínio de IgG1. Entretanto, esplenócitos de animais, que foram injetados com rVirB9 ou rVirB10, produziram interferon-gama acima do limite de detecção do ensaio após estimulação in vitro, sinalizando assim resposta celular específica. Assim, novas avaliações serão realizadas com a finalidade de modular o perfil de resposta imune obtido em bovinos e avaliar a proteção contra A. marginale.

Considering the limitations of current methods of anaplasmosis control, the development of a more effective vaccine is required. Previous studies, using proteomic and genomic approaches, have identified new membrane proteins in Anaplasma marginale that may be vaccine candidates. These include VirB9, VirB10 and elongation factor-Tu (EFTu). Although the role of these proteins in the membrane of A. marginale has not been properly characterized, production of the recombinant proteins rVirB9, rVirB10, and rEF-Tu has been achieved. However, these recombinant proteins have not yet been exploited in vaccine formulations. The present study describes the use of rVirB9, rVirB10 and rEF-Tu, emulsificated in adjuvant Montanide, in mice. A strong humoral immune response was induced under these conditions, with both IgG1 and IgG2a production. The IgG2a/IgG1 ratios revealed a predominance of IgG1. However, splenocytes of the animals that received rVirB9 or rVirB10 produced high levels of gamma interferon after in vitro stimulation, indicating a specific cellular immune response to these proteins. Therefore, further studies are required to adjust the profile of the immune response in order to perform tests of protection against A. marginale in cattle.

Survey of Leptospira spp in pampas deer (Ozotoceros bezoarticus) in the Pantanal wetlands of the state of Mato Grosso do Sul, Brazil by serology and polymerase chain reaction

This work reports a survey of Leptospira spp in pampas deer (Ozotoceros bezoarticus) in the Pantanal wetlands of the state of Mato Grosso do Sul, Brazil by serology and polymerase chain reaction (PCR). Seventy pampas deer were captured in the dry season and surveyed using PCR, microscopic agglutination test (MAT) (n = 51) and by both techniques (n = 47). PCR detected infections in two pampas deer and MAT detected infections in three. Through sequencing and phylogenetic analyses, the PCR-amplified fragment detected in deer was identified as Leptospira interrogans. Serovars Pomona and Butembo were detected using MAT and the highest titre was 200 for serovar Pomona. Epidemiological aspects of the findings are discussed.

Infecção experimental com Escherichia coli enteropatogênicas, identificadas por PCR utilizando cápsulas com revestimento entérico em filhotes da raça boxer / Experimental infection with enteropathogenic Escherichia coli identified by PCR using enteric-coated capsules in boxer pups

PURPOSE: To verify the possibility of an experimental infection with enteropathogenic Escherichia coli and to confirm by PCR that the symptoms manifested after infection were due to the virulence factors of the studied bacteria. METHODS: Experimental units were 14 healthy pups of Boxer breed, aged 60 days. The animals were divided into three groups. One animal from each litter was included in a control group and the remaining animals were divided into two groups: one inoculated with strain 4083, and another one inoculated with strain SPA14. Gelatinous capsules coated with enteric-coating solution were used for the inoculation of strains. E. coli isolation from feces was performed for all tested animals, and the extracted DNA was subjected to Polymerase Chain Reaction (PCR). RESULTS: All infected animals presented diarrhea and had the gene eae amplified by PCR. CONCLUSION: The efficiency of PCR for the studied strains indicates that this technique can be recommended for the diagnosis of enteropathogenic Escherichia coli as a differential from other pathogens causing diarrhea. It may also be used in the future to verify whether other virulence factors (bfpA gene and EAF plasmid) persist after infection and to assess the pathogenicity of these bacteria.

OBJETIVO: Verificar a possibilidade de uma infecção experimental com Escherichia coli enteropatogênicas e confirmar por PCR que os sintomas manifestados após a infecção foram decorrentes dos fatores de virulência da bactéria estudada. MÉTODOS: As unidades experimentais foram 14 filhotes saudáveis com idade de 60 dias da raça Boxer. Os animais foram divididos em três grupos, sendo um controle de cada ninhada e o restante dividido em dois grupos, um de animais inoculados com a cepa 4083 e o outro de animais inoculados com a cepa SPA14. Para inoculação das cepas, utilizaram-se cápsulas gelatinosas revestidas com solução de revestimento entérico. O isolamento de E. coli das fezes foi realizado em todos os animais testados, e o DNA extraído foi submetido à técnica de PCR. RESULTADOS: Todos os animais infectados apresentaram diarréia e tiveram a gene eae amplificado por meio de PCR. CONCLUSÃO: Através da eficiência da PCR das amostras, a técnica seria recomendada para diagnóstico da Escherichia coli enteropatogênicas como diferencial de outros patógenos que causam diarréia, e, no futuro, verificar se outros fatores de virulência (gene bfpA e plasmídeo EAF) permaneceriam após a infecção, podendo avaliar a patogenicidade das EPEC.

Anticorpos contra Toxoplasma gondii em estudantes de Medicina Veterinária de Campo Grande, MS, Brasil / Antibodies to Toxoplasma gondii in veterinary medicine students of Campo Grande, MS, Brazil

Amostras de soro obtidas de estudantes do curso de Medicina Veterinária da Universidade para o desenvolvimento do Estado e da Regiäo do Pantanal, Campo Grande, MS, Brasil, foram examinadas para a presença de anticorpos contra Toxoplasma gondii. Dos 145 soros testados, 44 (30,34 por cento) foram positivos na hemaglutinaçäo, com título igual ou superior a 1:16. Näo foram observadas associaçöes entre as características epidemiológicas examinadas tais como hábitos alimentares (ingestäo de carne bovina crua ou malpassada, vegetais crus/näo lavados, produtos lácteos näo pasteurizados) ou contato constante com cäes e a presença de anticorpos contra T. gondii, exceto pelo percentual significativamente maior de estudantes soropositivos que relataram ter contato freqüente com gatos (P=0,03).

Contaminaçäo de praças públicas de Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Brasil, por ovos de Toxocara e Ancylostoma em fezes de cäes / Contamination of public squares of Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Brazil, by eggs of Toxocara and Ancylostoma in dog feces

De fevereiro a outubro de 1998, avaliou-se a contaminaçäo de praças públicas de Campo Grande, MS, Brasil, por ovos de Toxocora e Ancylostoma, em amostras de fezes de cäes. Das 74 praças examinadas, 42 (56,8 por cento) estavam contaminadas por ovos de Ancylostoma, 8 (10,8 por cento) com ovos de Toxocara e 7 (9,5 por cento) com ambos