Existencia de dos sitios de fosforilación oxidativa en Trypanosoma cruzi / Isolation of phosphorylating mitochondrial membranes from Trypanosoma cruzi

Preparaciones mitocondriales de epimastigotes de T. cruzi (cepa Tulahuen), obtenidas por ruptura de las células con perlas de vidrio y centrifugación diferencial, exhibieron control respiratorio (C.R.) con ADP como aceptor de fosfato y los siguientes sustratos oxidables: succinato, L-malato o ascorbato+TMPD. Los valores de C.R. fueron (promedio + ou - E.S.; n=4; entre paréntesis, el sustrato): 2,8 + ou - 0,10 (succinato), 2,3 + ou - 0,13 (L-malato) y 2,0 + ou - 0,12 (ascorbato + TMPD). La relación ADP: O fué 1,68 + ou - 0,08, 1,42 + ou - 0,08 y 0,66 + ou - 0,12, respectivamente. El desacoplante CCCP estimuló la oxidación de los sustratos algo mas que el ADP. La oxidación del succinato fué inhibida en forma significativa por malonato y también por oxalacetato pero con este último, la mayor inhibición se obtuvo con las membranas sonicadas. Las membranas mitocondriales de T. cruzi oxidaron también NADH, pero esta oxidación no fue-controlada por el ADP. Los resultados reseñados indican la presencia de dos sitios de fosforilación oxidativa en el sistema respiratorio mitocondrial de T. cruzi (sitos 2 y 3) y confirman observaciones anteriores con epimastigotes enteros

Citocromos en diferentes estadíos, cepas y poblaciones de Trypanosoma cruzi / Cytochromes in different stages, strains and populations of Trypanosoma cruzi

Los espectros diferenciales de muestras "reducida menos oxidada" (Red-Ox) y "reducida. CO menos reducida" (Re. CO-Red) de tripomastigotes metacíclicos del Trypanosoma cruzi (cepa Tulahuen) revelaron la presencia de los citocrómos aa3, b, c555 y o. Espectros concordantes se obtuvieron con la fracción mitocondrial de la forma epimastigote de la misma cepa, después de filtrar las membranas por Sephadex G-50 para excluir hemoproteínas espúreas provenientes del medio de cultivo o hemoproteínas solubles (hemoglobina, peroxidasa, catalasa, etc.), o citocrómos P-420 y P-450. El tratamiento de la fracción mitocondrial cruda con guanidina y colato de Na y la formación de complejos con cianuro, revelaron que el citocrómo o es un constituyente integral de esas membranas. El análisis de los piridinahemocrómos provenientes de los citocrómos mitocondriales demostró la presencia de los hemos A, B y C. Una banda espectral a 625 nm en los espectros de los tripomastigotes, en las membranas mitocondriales, y en los piridina-hemocrómos indicó la presencia de un citocrómo d. Un examen comparativo del contenido en citocrómos o y b de una serie de poblaciones de T. cruzi, provenientes originariamente en su mayoría de pacientes con formas agudas o crónicas de la enfermedad de Chagas, demostró variabilidad en el contenido en citocrómos y falta de correlación de este parámetro con las propiedades biológicas del parásito, en particular con la letalidad para el ratón