Sensitivity of an immunoenzymatic test for detection of ant-L. brasiliensis antibodies compared to other tests used for the diagnosis of American cutaneous leishmaniasis / Sensibilidade de teste imunoenzimático anti-L. braziliensis em relação a outros testes utilizados no diagnóstico da leishmaniose tegumentar americana

The diagnosis of American cutaneous leishmaniasis (ACL) is frequently based on clinical and epidemiological data associated with the results of laboratory tests. Some laboratory methods are currently being applied for the diagnosis of ACL, among them the indirect immunofluorescence reaction (IIFR), the Montenegro skin test (MST), histopathological examination, and the polymerase chain reaction (PCR). The performance of these methods varies in a considerable proportion of patients. After the standardization of an immunoenzymatic test (ELISA) for the detection of IgG in the serum of patients with ACL using a crude Leishmania braziliensis antigen, the results obtained were compared to those of other tests routinely used for the diagnosis. The tests revealed the following sensitivity, when analyzed separately: 85 percent for ELISA IgG, 81 percent for PCR, 64.4 percent for MST, 58.1 percent for IIFR, and 34 percent for the presence of parasites in the biopsy. ELISA was positive in 75 percent of patients with ACL presenting a negative MST, in 84.8 percent of ACL patients with negative skin or mucous biopsies for the presence of the parasite, and in 100 percent of cases with a negative PCR. Thus, ELISA presented a higher sensitivity than the other tests and was useful as a complementary method for the diagnosis of ACL.

O diagnóstico da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é feito com base nos dados clínicos e epidemiológicos e é confirmado por meio de diferentes métodos laboratoriais. Dentre estes, são utilizados, com desempenhos variáveis, a reação de imunofluorescência indireta (IFI), a reação intradérmica de Montenegro (IRM), a pesquisa de Leishmania em material de biópsia de pele ou mucosa e a reação em cadeia da polimerase (PCR). O objetivo do presente trabalho foi avaliar o desempenho de teste imunoenzimático (ELISA) como método alternativo de diagnóstico da LTA, comparando seus resultados com os obtidos por outros métodos tradicionais de diagnóstico dessa doença. Foi utilizado teste para pesquisa de IgG anti-Leishmania no soro, utilizando antígeno bruto de Leishmania braziliensis, com os seguintes resultados de sensibilidade: ELISA = 85 por cento; PCR = 81 por cento; IRM = 64.4 por cento; IFI = 58,1 por cento; presença de parasitas na biópsia = 34 por cento. Além disso, o teste ELISA foi positivo em parcela expressiva dos pacientes que apresentavam outros testes diagnósticos negativos (foi positivo em 100 por cento dos pacientes com PCR negativo; em 84,8 por cento dos casos com biópsias mostrando ausência de parasitas e em 75 por cento dos não reativos a IRM) mostrando-se útil como método alternativo de diagnóstico da LTA.

Maxadilan (MAX) - Proteína salivar de Lutzomyia longipalpis: detecção de anticorpos antiMAX em leishmaniose tegumentar americana (LTA) e expressão gênica e protéica de MAX em Lutzomyia neivai / Maxidilan (MAX) - Salivary protein of Lutzomyia longipalpis: detection of antibodies anti-MAX in American tegumentar leishmaniasis (ATL), and genetic and protein expression of MAX in Lutzomyia neivai

FUNDAMENTOS: AA proteína MAX, componente salivar de Lutzomyia longipalpis, vetor do calazar ou leishmaniose sistêmica, tem sido empregada como vacina para leishmaniose tegumentar experimental, com funções de vasodilatação e imunomodulação. OBJETIVOS: Detectar anticorpos séricos antiMAX em pacientes com LTA e verificar a expressão de MAX em L. neivai, vetor da LTA na região em estudo. MÉTODOS: Anticorpos antiMAX foram detectados por Elisa em soro de 42 pacientes com LTA e 63 controles. A extração de proteínas e de DNA de L. longipalpis (controle positivo) e de L. neivai foi realizada pelo método Trizol e seguida pela detecção de proteínas por eletroforese e pela expressão gênica de MAX por PCR-RFLP (polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism) com as enzimas Hha I e Rsa I. RESULTADOS: Títulos maiores de anticorpos antiMAX foram observados na LTA (p=0,0132). A eletroforese de proteínas mostrou frações semelhantes para L. longipalpis e L. neivai, tendo-se observado para ambos fração protéica de peso molecular similar à proteína MAX. A expressão gênica de MAX em L. longipalpis e L. neivai foi confirmada por PCR-RFLP. CONCLUSÕES: A presença de antiMAX nos grupos em estudo tornou imprescindível a pesquisa de MAX no vetor de LTA da região, tendo sido registrada pela primeira vez expressão protéica e gênica de MAX em L. neivai. Detecção de antiMAX em controles confirma exposição a picadas de flebótomos. Títulos de anticorpos antiMAX maiores na LTA sugerem exposição prévia e natural à picada e, conseqüentemente, à proteína MAX, não protegendo da doença e desfavorecendo seu emprego em vacinação.

BACKGROUND: The protein MAX, salivary component of Lutzomyia longipalpis, vector of calazar or systemic leishmaniasis, has been used as vaccine for experimental tegumentar leishmaniasis, which vasodilatory and immunomodulatory functions are described. OBJECTIVES: Our purpose was to detect antibodies antiMAX in sera samples from patients with ATL and to verify the genetic and protein expression of MAX in L. neivai, phlebotomy vector of ATL in the area of study. METHODS: Antibodies antiMAX were detected by ELISA in sera from 42 patients with ATL and 63 controls. The extraction of proteins and of DNA from L. longipalpis (positive control) and L. neivai was accomplished by the method Trizol, following for the detection of proteins by electrophoresis, and genetic expression of MAX by PCR-RFLP (polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism) with the enzymes Hha I and Rsa I. RESULTS: Increased titles of antibodies antiMAX were observed in ATL, compared to controls (p=0,0132). Electrophoreses of proteins showed similar fractions for L. longipalpis and L. neivai, and for both a protein fraction with molecular weight similarity to MAX was observed. The genetic expression of MAX in L. longipalpis and L. neivai was confirmed by PCR-RFLP. CONCLUSIONS: The description of antibodies antiMAX in ATL patients and controls turned indispensable the research of MAX in the phlebotomy vector of ATL in the area of study. For the first time, it was registered protein and genetic expression of MAX in L. neivai. The antiMAX detection in controls confirms the previous exposition to prick of phlebotomies. Increased titles of antibodies antiMAX in ATL patients suggest previous and natural exposition to the bite and, consequently, to the protein MAX, not protecting them of disease and discouraging its employment in vaccination.