ABSTRACT
Diseñamos un genoma con dos regiones reguladoras (no codificantes) del virus del polima, para estudiar secuencias específicas que tengan alguna función en la expresión genética. Uno de los elementos funciona como "cassette", puede ser escindido de la molécula recombinante, mutado y reinsertado, permitiendo evaluar el efecto de las mutaciones. El fragmento clonado contiene las secuencias correspondientes del nucleótido 5090 al 85 y contiene el ORI, la mayoría de los sitios 5' de iniciación de la transcipción y las secuencias que se sospecha deben conformar el promotor tardío (careciendo del líder). En este estudio demostramos que el sistema funciona si ambas regiones se sitúan en repetición directa, ya que si se localizan en orientación opuesta el virus no es viable en células de ratón. También demostramos que cuando se presenta una mutación en el tramo rico en timinas, se logra la replicación, pero el genoma es inestable ya que elimina la porción de DNA reinsertada. Concluimos de estos estudios que se puden insertar secuencias no codificadoras de Py por duplicado en la región del potenciador sin que se altere la viabilidad viral; esto es, las clonas que presentan ambas regiones reguladoras dispuestas en tándem son infectivas, por lo que consideramos que este sistema puede ser útil en la evaluación de secuencias mutadas detectando si dicha unidad alterada es eliminada