Relación clonal y detección del gen blaKPC en cepas de Klebsiella pneumoniae resistentes a carbapenémicos, en un hospital de Venezuela / Clonal relationship and detection of blaKPC gene in strains of Klebsiella pneumoniae resistant to carbapenems, at a hospital in Venezuela

In order to study the clonal relationship and blaKPC gene detection in clinical isolates of Klebsiella pneumoniae resistant to carbapenems, we analyzed 22 clinical isolates of K. pneumoniae with resistance to imipenem and/ or meropenem, isolated in the laboratory of bacteriology at the University Hospital "Antonio Patricio de Alcalá" (HUAPA) from the Cumana city, Sucre state, Venezuela, for a period of five consecutive years. Susceptibility to different antimicrobials was determined, and the presence of carbapenemases was detected by modified Hodge method, phenyl boronic acid synergy and combination discs. blaKPC gene detection was conducted by polymerase chain reaction and the clonal relationship was determined by pulsed field electrophoresis. High rates of antimicrobial resistance were found, five strains were negative, at least one phenotypic method, and all carried the blaKPC gene. Clonal spread was observed only in the intensive care unit (ICU), while in other services, polyclonality was found. We concluded that blaKPC gene is present in K. pneumoniae strains resistant to carbapenems isolated in the HUAPA and clonal spread it was only in the ICU.

Con el objetivo de estudiar la relación clonal y detección del gen blaKPC en aislados clínicos de Klebsiella pneumoniae resistentes a carbapenémicos, se analizaron 22 cepas clínicas de K. pneumoniae con resistencia a imipenem y/o meropenem, aisladas en el laboratorio de bacteriología del Hospital Universitario "Antonio patricio de Alcalá" (HUAPA) de la ciudad de cumaná, Estado Sucre, Venezuela, durante un período de cinco años continuos. Se determinó la susceptibilidad a diversos antimicrobianos, y se detectó la presencia de carbapenemasas por los métodos de Hodge modificado, sinergia con ácido fenil borónico y combinación de discos. La detección del gen blaKPC se llevó a cabo mediante la técnica de reacción de polimerasa en cadena y la determinación de la relación clonal se realizó por electroforesis de campo pulsado. Se encontraron elevados porcentajes de resistencia antimicrobiana, cinco cepas resultaron negativas, al menos, a un método fenotípico y todas portaban el gen blaKPC. Se observó diseminación de clones únicamente en la Unidad de cuidados Intensivos (UCI), mientras que, en otros servicios, se halló policlonalidad. Se concluye que el gen blaKPC se encuentra presente en cepas de K. pneumoniae resistentes a carbapenémicos aisladas en el HUAPA y que hubo diseminación clonal sólo en UCI.

Bacterias patógenas aisladas en la nasofaringe de niños indígenas warao: Estado Sucre,Venezuela / Pathogenic bacteria isolated from the nasopharynx of indigenous Warao children: Sucre state, Venezuela

Para determinar la frecuencia de bacterias patógenas y su susceptibilidad antimicrobiana en muestras nasofaringeas de niños indígenas waraos de la comunidad María López, municipio Benítez del estado Sucre, con edades comprendidas entre 0 y 10 años, se procesaron 49 muestras recolectadas durante el período enero-marzo de 2008. La identificación bacteriana se realizó aplicando estudios bacteriológicos convencionales y la susceptibilidad antimicrobiana mediante el método de difusión en disco, siguiendo lineamientos del Instituto de Estándares de Laboratorios Clínicos (CLSI). Los resultados indicaron la presencia de Moraxella catarrhalis (28,6%), Streptococcus pneumoniae (26,5%), Staphylococcus aureus (14,3%) y Haemophilus influenzae (6,1%) en niños con y sin sintomatología. Las bacterias patógenas aisladas del tracto respiratorio superior fueron más frecuentes en el grupo de 0 a 5 años de edad, identificándose, principalmente, S. pneumoniae. Con respecto a la susceptibilidad antimicrobiana, S. pneumoniae mostró resistencia a tetraciclina (46,2%), trimetoprim-sulfametoxazol (38,5%), clindamicina (33,3%) y penicilina (23,1%). Los aislados de S. aureus expresaron sensibilidad a todos los antimicrobianos ensayados. El total de aislados de M. catarrhalis mostró resistencia a ampicilina y penicilina, además, resultaron productores de β-lactamasas. La presencia de bacterias patógenas a nivel nasofaríngeo en la población infantil, representa un riesgo para el desarrollo de infecciones severas del tracto respiratorio.

We collected and `processed 49 nasopharynx samples taken from indigenous Warao children 0-10 years old who lived at the María Lopez community of the Benitez Municipalit at Sucre State, with the purpose of determining the frequency of pathogenic bacteria and their antimicrobial sensitivity in samples collected from these children during the January-March 2008 period. The bacterial identification was obtained by applying conventional bacteriological methods and the antimicrobial sensitivity was determined by the disc diffusion method, following the guidelines of the Clinical Laboratory Standards Institute. The results showed presence of Moraxella catarrhalis (28.6%), Streptococcus pneumoniae (26.5%), Staphylococcus aureus (14.3%) and Haemophilus influenza (6.1%) in children with and without symptoms. The pathogenic bacteria isolated from the upper respiratory tract were more frequent in the 0-5 year old group and the most frequent identification was S. pneumoniae. Regarding antimicrobial sensitivity, S. pneumoniae was resistant to tetracycline (46.2%), trimetoprim-sulphametoxazol (38.5%), clindamicyn (33.3%) and penicillin (23.1%). The S. aureus isolates were sensitive to all the antimicrobials studied. All the M. catarrhalis isolates were resistant to ampicillin and penicillin and were also β-lactamase producers. The presence of pathogenic bacteria at the nasopharynx level in child populations signifies a risk for the development of severe respiratory tract infections.

Susceptibilidad antimicrobiana in vitro de enterobacterias nosocomiales productoras de betalactamasas de espectro expandido: Cumaná, Estado Sucre / In vitro antimicrobial susceptibility of nosocomial enterobacteria producers of extended-spectrum beta-lactamase: Cumaná, Sucre State

Para evaluar la susceptibilidad antimicrobiana in vitro de enterobacterias nosocomiales productoras de BLEE en pacientes recluidos en el Servicio Autónomo Hospital Universitario “Antonio Patricio de Alcalá”, se recolectaron 27 cepas bacterianas procedentes de las salas de UCI, retén, medicina y pediatría, en el periodo septiembre-noviembre de 2005. La susceptibilidad antimicrobiana se determinó por el método de difusión del disco. El mayor número de infecciones nosocomiales se presentó en UCI y retén con 10 (37,03 por ciento) y 7 (25,93 por ciento) casos; 44,44 por ciento de cultivos positivos fueron aislados en secreciones. K. pneumoniae resultó la especie mayormente aislada (51,85 por ciento), seguida de Enterobacter aerogenes con 18,52 por ciento. La mayor resistencia antimicrobiana en el grupo de los ß-lactámicos, se obtuvo para ceftazidima (77,77 por ciento), cefotaxima (70,37 por ciento) y cefepima (40,74 por ciento); en el grupo de los aminoglucósidos, a tobramicina y gentamicina (44,44 por ciento y 40,74 por ciento); asimismo, cloranfenicol (70,37 por ciento), tetraciclinas (51,85 por ciento) y trimetoprim-sulfametoxazol (44,44 por ciento). Estos resultados pudieran ser útiles a la comunidad médica, al tomar en cuenta las pautas de tratamiento y modificar las conductas de riesgo, las cuales facilitan la inducción de resistencia, como el abuso al prescribir antimicrobianos y las hospitalizaciones innecesarias

In order to assess in vitro antimicrobial susceptibility for nosocomial enterobacteria ESBL producers for patients in the Autonomous University Hospital Service ‘Antonio Patricio de Alcalá,’ 27 bacterial strains were collected in the ICU, neonatology, medicine and pediatric facilities during September-November 2005. Antimicrobial susceptibility was determined by the disk diffusion method. The highest number of nosocomial infections was found in ICU and neonatology with 10 (37.03 percent) and 7 (25.93 percent) cases, respectively; 44.44 percent of the positive cultures were isolated from secretions. K. pneumoniae was the most frequently isolated species (51.85 percent), followed by Enterobacter aerogenes with 18.52 percent. The greatest antimicrobial resistance in the betalactam group was obtained for ceftazidime (77.77 percent), cefotaxime (70.37 percent) and cefepime (40.74 percent); in the aminoglycosides group, for tobramycin and gentamycin, (44.44 percent and 40.74 percent, respectively); also, chloramphenicol (70.37 percent), tetracycline (51.85 percent) and trimethoprim-sulfamethoxazole (44.44 percent). These results could be useful to the medical community when taking into account guidelines for treatment and risk behavior modification, which facilitate the induction of resistance, such as abuse in prescribing antibiotics and unnecessary hospitalizations

Identificación bioquímica y PCR especie-específica de cepas de Burkholderia cepacia de origen hospitalario y ambiental en Venezuela / Biochemical and specie-specific PCR identification of Burkholderia cepacia strains from hospital and environmental sources in Venezuela

Burkholderia cepacia es un bacilo gramnegativo no fermentador (BGNNF) reconocido como un patógeno oportunista para humanos y como agente causante de daño en cultivos vegetales. Su identificación es difícil y laboriosa confundiéndose a menudo con taxones relacionados. En este trabajo se examina, mediante técnicas bioquímicas y PCR especie-específica, una colección de 74 cepas de BGNNF de origen hospitalario y ambiental, con el objetivo de evaluar las condiciones para la identificación de rutina de B. cepacia en el medio hospitalario. El empleo de métodos comerciales automatizados, pruebas bioquímicas convencionales y una selección de pruebas complementarias permitió la identificación satisfactoria de 28 (37,8%) como B. cepacia, 15 (20,3%) S. maltophilia, 9 (12.2 %) A. xylosoxidans, 19 (25.6%) especies de Pseudomonas, 1 Ralstonia (1,4%) y 2 no identificadas. El empleo de PCR permitió confirmar la identificación del género Burkholderia y la caracterización de las especies o genomovares dentro del Complejo B. cepacia (CBc). La mayoría (12) pertenece al genomovar I (B. cepacia), 5 al II (B. multivorans); 3 al III (B. cenocepacia), 1 al IV (B. stabilis), y 7 al grupo V (B. vietnamiensis). El uso combinado de estas metodologías permitió la identificación precisa de miembros del CBc en muestras de origen hospitalario y ambiental.

Burkholderia cepacia is a non fermentative grannegative bacilli (NFGNB) known as an opportunists pathogen for human beings and associated with plant diseases. Its identification is a difficult task, being usually confused with related genera. In this work a collection of 74 NFGNB from environmental and hospital sources were examined by biochemical and PCR methods in order to evaluate the conditions for hospital identification of B. cepacia. The use of conventional biochemical methods, and a selection of complementary tests allowed a satisfactory identification of 28 (37,8%) as B. cepacia, 15 (20,3%) S. maltophilia, 9 (12.2 %) A. xylosoxidans, 19 (25,6%) other Pseudomonas, 1 Ralstonia (1,4%) and 2 non identified ((2.7%). By PCR B. cepacia identification was confirmed and the genomovars or species of the B. cepacia complex (BcC) were differenciated. The majority (12) belongs to the genomovar I (B. cepacia), 5 to II (B. multivorans), 3 to III (B. cenocepacia), 1 to IV (B. stabilis), and 7 to the B. vietnamiensis group. The use of biochemical and molecular methods allowed us the identification of BcC members from environmental and hospital sources.

Caracterización fenotípica y susceptibilidad antimicrobiana de cepas clínicas de Stenotrophomonas maltophilia / Phenotypic characterization and antimicrobial susceptibility in clinical strains of Stenotrophomonas maltophilia

Stenotrophomonas maltophilia, anteriormente conocida como Xanthomonas maltophilia y Pseudomonas maltophilia es un bacilo Gram negativo no fermentador de la glucosa, reconocido como agente causal de diversas infecciones nosocomiales, además de presentar resistencia a múltiples agentes antimicrobianos. El objetivo del presente estudio fué identificar y caracterizar fenotípicamente cepas clínicas de S. maltophilia así como también establecer un patrón de actividad in vitro a diferentes antimicrobianos. Los aislados bacterianos, fueron suministrados por el laboratorio de Bacteriología del Hospital de Cumaná para ser identificadas a través de pruebas bioquímicas convencionales y de un método comercial empleando las galerias API ID32GN. Se determinó la CMI de los antimicrobianos mediante la técnica de dilución en agar Mueller Hinton siguiendo las normas del CLSI. Se identificaron fenotípicamente 24 cepas de S. maltophilia. La identificación fue 100 por ciento coincidente con ambas técnicas. Se mantuvo un patrón uniforme entre las cepas excepto para oxidasa donde 17 (70,83 por ciento) fueron positivas y 7 (29,17 por ciento) negativas. Los resultados de las pruebas de identificación mostraron la presencia de 5 fenotipos prevaleciendo el patrón típico del microorganismo (fenotipo I, 14 aislados). Las cepas mostraron 10 por ciento de resistencia a Imipenem, cefepime, amikacina y ácido nalidixico, 95,83 por ciento a cefotaxima, ceftazidima y ampicilina sulbactam, 91,67 por ciento a ceftriaxona y ciprofloxacina y 75 por ciento a piperacilina tazobactam, siendo más susceptibles a trimetoprim sulfametoxazol (91,67 por ciento), levofloxacina (75 por ciento) y rifampicina (95,83 por ciento)