ABSTRACT
Os resultados desta tese apresentam o estudo de desenvolvimento de substratos peptídicos com supressao intramolecular de fluorescência para diferenciaçao da atividade dos domínios catalíticos a Enzima Conversora da Angiotensina 1 (ECA). Foram sintetizados e testados como substratos análogos da bradicinina do tipo Abz-peptidilEDDnp onde Abz é o grupo fluorescente, X sao os diversos aminoácidos e EDDnp é o grupo apagador. Apesar de terem a carboxila C-terminal bloqueada estes compostos foram hidrolisados pela ECA de plasma de cobaia, pulmao de coelho e pelas formas recombinantes da enzima. O composto Abz-GFSPFFQ-EDDnp foi hidrolisado com uma alta eficiência catalítica sendo uma alternativa interessante, pela facilidade do ensaio, para a detecçao e quantificaçao da enzima (Araújo e cols., 1999). Entretanto, nenhum destes substratos foi especifico para um dos domínio da ECA. Desenvolvemos a síntese de substratos com supressao intramolecular de fluorescência contendo a carboxila nao bloqueada. Para isso foi estabelecida uma nova estratégia de síntese usando como referência o peptídeo Ac-SDKP (substrato natural do domínio N) (Rousseau e cols., 1995). Foram sintetizados de análogos do tipo Abz-peptidil-K(Dnp)P-OH onde o apagador de fluorescência dinitrofenol (Dnp) está ligado ao grupo amino da cadeia lateral da lisina. Estes compostos além de serem excelentes substratos para a ECA permitiram definir os requisitos estruturais dos substratos para sejam específico para o domínio N. Resultados anteriores do nosso laboratório mostraram que seqüências ricas em histidina tinham o poder de inibir a ECA. Como o cininogênio de alto peso molecular...(au)