Comportamento de isolados de Colletotrichum gloeosporioides inoculados em mudas micropropagadas de café / Behavior of isolated of Colletotrichum gloeosporioides inoculated micropropagated in seedlings of coffee

Muitos são os danos ocasionados por Colletotrichum gloeosporioides em plantas de cafeeiro, porém pouco são os conhecimentos sobre o estabelecimento do processo infectivo e sobre a evolução dos sintomas apresentados pelas plantas hospedeiras. Deste modo, o objetivo do estudo foi avaliar o comportamento de isolados de C. gloeosporioides obtidos de Cafeeiro em mudas produzidas a partir de sementes de plantas com sintomas de mancha manteigosa e sem sintomas de mancha manteigosa, estimar a agressividade do patógeno através da incidência e severidade da doença, comparando-os com um isolado oriundo de outra espécie vegetal. A partir da estimativa da incidência e severidade, observou-se que mudas oriundas de plantas com sintomas de mancha manteigosa são mais suscetíveis ao ataque de C. gloeosporioides. O isolado IS-II mostrou-se totalmente agressivo, apresentando um potencial crescente de doença em relação ao tempo.

Many are the damages caused by Colletotrichum gloeosporioides in coffee plants, but little is knowledge about the establishment of the infective process and the evolution of the symptoms presented by host plants. This study evaluated the behavior of isolates of C. gloeosporioides obtained from Coffee on seedlings grown from seeds with buttery spot symptoms and without symptoms of blister spot, estimate the aggressiveness of the pathogen through the incidence and severity of disease, comparing them with one isolate from other plant species. The estimation of the incidence and severity was observed that seedlings from plants with symptoms of blister spot are more susceptible to attack by C. gloeosporioides. The isolated IS-II shown to be fully aggressive, presenting a high potential for disease.

Genetic transformation with the gfp gene of Colletotrichum gloeosporioides isolates from coffee with blister spot

Blister spot (Colletotrichum gloeosporioides) is now widespread in most coffee producing states of Brazil, becoming a limiting factor for production. The lack of data relating to the reproduction of typical symptoms (light green, oily patches) leaves a gap within the pathosystem, forcing the search for new methodologies for monitoring the disease. Monitoring of genetically modified organisms has proven to be an effective tool in understanding the host x pathogen interactions. Thus, the present study was carried out to evaluate the effectiveness of two systems of genetic transformation in obtaining mutants using the gfp reporter gene. Using the two transformation systems (PEG and electroporation) revealed the efficiency of both, confirmed by fluorescence microscopy and resistance to the antibiotic hygromycin-B, when incorporated into the culture medium. The fungus maintained its cultural and morphological characteristics when compared to wild strains. When inoculated on coffee seedlings, it was found that the pathogenicity of the processed isolates had not changed.

Exsudatos radiculares de plantas de cobertura no desenvolvimento de Sclerotinia sclerotiorum / Exudates of cover crops in the development of Sclerotinia sclerotiorum

O objetivo do trabalho foi avaliar a influência dos exsudatos radiculares das plantas de cobertura: crotalária (Crotalaria juncea L.), braquiária (Urochloa ruziziensis R. Germ. & Evrard), capim-mombaça (Panicum maximum cv. Mombaça Jacq.), milheto (Pennisetum glaucum (L.) R. Brown), feijão-guandu-anão (Cajanus cajan (L.) Millsp.) e estilosantes (Stylosantes capitata Vog.; Stylosanthes macrocephala Ferr. Et Costa) no desenvolvimento de Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary. Para a liberação dos exsudatos, as raízes de plantas cultivadas durante 24 dias foram submetidas à centrifugação. Obtido os exsudatos, estes foram esterilizados por processos de filtragem com a utilização de membrana com poro de 0,22µm armazenados em tubos e acondicionados a -20ºC. O efeito dos exsudatos foi estudado em relação ao crescimento micelial, germinação micelial, desenvolvimento carpogênico do escleródio e germinação dos ascósporos de S. sclerotiorum. As concentrações utilizadas foram 1%, 10% e 25%, obtidas por meio da diluição em água destilada esterilizada. Os resultados mostraram que o índice de velocidade de crescimento micelial foi menor quando utilizado o exsudato de U. ruziziensis nas concentrações de 1% e 10%. Os exsudatos não influenciaram a germinação micelial dos escleródios. Quanto aos ascósporos, os exsudatos radiculares de Cajanus cajan e Styloshantes sp. inibiram a germinação quando não foi adicionado sulfato de streptomicina.

The objective was to explore the influence of root exudates of some cover plants known as Crotalaria juncea, Urochloa ruziziensis, Panicum maximum cv. mombaça, Pennisetum glaucum, Cajanus cajan e Stylosantes sp. For the release of exudates roots plants were grown for 24 days, were subjected to centrifugation. Retrieved these exudates were sterilized by filtering processes using a membrane with pore size of 0.22 micrometers. The filtrates were stored in tubes and stored at -20°C. The effect of the exudates were studied in relation to mycelial growth, mycelial and carpogenic germination of sclerotia and germination of ascospores of S. sclerotiorum. The concentrations used were 1%, 10% and 25% obtained by dilution in sterile water. The results showed mycelial growth rate was lower when using the exudate of U. ruziziensis concentrations of 1% and 10%. The exudates did not affect mycelial germination of sclerotia. Concerning the ascospores of Cajanus cajan and Stylosanthes spp. root exudates inhibited germination when it was added streptomycin.

Produção e regeneração de protoplastos de Colletotrichum gloeosporioides em diferentes condições de cultivo / Production and regeneration of protoplasts from Colletotrichum gloeosporioides in different conditions

A obtenção de protoplastos de fungos, utilizando-se enzimas degradadoras de parede celular, tem sido o método mais utilizado em processos de transformação genética. Foram testados dois tipos de estruturas fúngicas (micélio e conídios), diferentes concentrações enzimáticas (5, 10, 20 mg), estabilizadores osmóticos (NaCl 0,7 mol.L-1 pH 5,7; (NH4)2SO4 1,2 mol.L-1 pH 5,8; KCl 0,7 mol.L-1 pH 5,8; MgSO4 0,7 mol.L-1 pH 5,5; Sacarose 0,5 mol.L-1 pH 5,7; SorbitoL 0,6 mol.L-1 pH 5,7) e seis tempos de exposição dos protoplastos ao sistema lítico, para estabelecer condições otimizadas de obtenção e regeneração de protoplastos de Colletotrichum gloeosporioides, agente relacionado a mancha manteigosa em cafeeiros. Protoplastos de C. gloeosporiodes foram obtidos em maior quantidade quando o micélio foi exposto durante 4 horas, com 10 mg.mL-1 de Lysing Enzime em KCl 0,7 mol.L-1 que se apresentou como melhor estabilizador osmótico, com frequência de regeneração de 11,64%.

The isolation and regeneration of protoplasts from fungal cells, using several cell wall degrading enzymes, has been the most common method to prepare competent cells for genetic studies of filamentous fungi. In this work two types of fungal structures, different enzyme concentrations (5, 10, 20 mg), osmotic stabilizers (NaCl 0,7 mol.L-1 pH 5,7; (NH4)2SO4 1,2 mol.L-1 pH 5,8; KCl 0,7 mol.L-1 pH 5,8; MgSO4 0,7 mol.L-1 pH 5,5; Sacarose 0,5 mol.L-1 pH 5,7; Sorbitol 0,6 mol.L-1 pH 5,7), and six exposure times to establish optimum conditions of isolation and regeneration of protoplasts of Colletotrichum gloeosporioides, agent of blister spot on coffee, were tested. Protoplast of C. gloeosporioides were obtained in greater quantities when the mycelium was exposed for 5 hours with 15mg.mL-1 of Lysing Enzyme in 0.7 mol.L -1 of KCl as osmotic stabilizer, presenting a regeneration rate of 11.64%.

Efeito da temperatura no crescimento micelial, produção e germinação de conídios de Colletotrichum spp. isolados de mangueira com sintomas de antracnose / Effect of temperature on mycelial growth, production and germination Colletotrichum spp. isolated from mango with symptoms of anthracnose

Muitos são os problemas fitossanitários encontrados na cultura da mangueira (Mangifera indica L), dentre eles destaca-se o fungo Colletotrichum gloeosporioides causador da antracnose, doença que atinge todos os órgãos da planta. O presente trabalho teve como objetivo analisar a influência da temperatura no desenvolvimento das colônias de três isolados de Colletotrichum spp. obtidos de diferentes órgãos da mangueira. Os três isolados apresentaram melhor crescimento micelial na faixa de temperatura de 20 a 25 °C. A faixa de temperatura de 25 a 30 °C demonstrou se mais eficiente em relação à germinação de conídios e esporulação para os isolados de Colletotrichum spp.

Many disease problems are found in the culture of mango (Mangifera indica L), among them stands out Colletotrichum gloeosporioides causing anthracnose disease, which affects all plant organs. This study aimed to analyze the influence of temperature on the development of colonies of three isolates of Colletotrichum spp. obtained from different organs of the hose. The three isolates showed better mycelial growth in the temperature range 20-25 ° C. The track temperature 25-30 ° C showed more efficient in relation to the germination of conidia and sporulation for Colletotrichum spp.