Cuantificación de interferón alfa 2b humano recombinante mediante anticuerpos monoclonales / Quantitation of recombinant human alpha 2b interferon with monoclonal antibodies

Se obtuvieron hibridomas secretores de anticuerpos monoclonales (AcM) contra el IFN alfa-2 humano recombinante (rh*IFN) mediante la hibridación de linfocitos esplénicos de ratones inmunizados y el mieloma P3/x63.Ag8.653. En el tamizaje de las células secretoras de anticuerpos específicos se emplearon sistemas microELISA, con el antígeno unido directamente a la fase sólida, o mediante otro AcM anti rh*IFN. Se seleccionaron nueve clones de hibridomas específicos para rh*IFN, de los cuales se escogió el secretor de AcM denominado CB-IFNA2.4 para los experimentos de desarrollo de un sistema ELISA tipo sandwich. Empleando el AcM CB-IFNA2.3 como anticuerpo de captura y el CB-IFNA2.4 conjugado con peroxidasa, se construyó un sistema ELISA sandwich capaz de detectar 1 ng de antígeno por milimetro. Se realizó un estudio de optimización de los diferentes pasos del ELISA y del reconocimiento del antígeno, cuando este es sometido a distintos tratamientos desnaturalizantes. Este sistema se ha empleado exitosamente en el seguimiento del proceso de producción y purificación del rh*IFN. En experimentos preliminares con ratas inoculadas con esta molecula, se denostró que este ELISA puede detectar su presencia en suero

Anticuerpos monoclonales que reconocen los factores de crecimiento epidérmico humano y murino / Monoclonal antibodies that recognize human and murine epidermal growth factor

La utilidad potencial del factor de crecimiento epidérmico humano (EGFh) como medicamento para la cicatrización de heridas, posible agente antitumoral y para otras aplicaciones, ha conducido a que su estudio, producción y aplicación se hayan incrementado notablemente en los últimos años. Nosotros generamos ocho hibridomas secretores de anticuerpos monoclonales (AcM) contra el EGFh, e igualmente desarrollamos un radioinmunoensayo en fase sólida (RIA-FS) y un enzima-inmunoensayo (ELISA) para la cuantificación del EGFh en muestras de diverso origen, empleando en estos, dos de los AcM obtenidos (CB-EGF.1 y CB-EGF.2). La sensibilidad de estos ensayos fue de 2 ng/ml y 6 ng/ml, respectivamente. En este trabajo, además, se presentan resultados acerca del reconocimiento del EGF de ratón por dichos AcM, así como la obtención de fragmentos F(ab)'2 activos a partir de uno de ellos

Inmunización primaria in vitro de linfocitos de ratón para la obtención de hibridomas B / In vitro primary immunization of mouse lymphocytes for the obtention of B hybridomas

Las células esplénicas de ratones BALB/c se sometieron a un proceso de inmunización primaria en cultivo, empleando como antígeno el factor de crecimiento epidérmico humano recombinante, y el sobrenadante de cultivos mixtos de timocitos de ratón como fuente estimuladora de activación y progresión. En algunos experimentos se evaluó el efecto del sobrenadante de células endoteliales humanas (HECS) durante el período de inmunización. Las células inmunizadas se hibridizaron con el mieloma P3/x63-Ag8-653 para obtener hibridomas. Por microscopía electrónica de trasmisión se siguieron los cambios morfológicos de los linfocitos durante los cinco días de inmunización in vitro, siendo estos característicos de la transformación de células quiescentes en altamente secretoras. Se demostró que la secreción de anticuerpo específico durante el período de inmunización no podía ser evaluada mediante un sistema ELISA con el antígeno, a causa de la gran reactividad cruzada inespecífica de IgM policlonales. El HECS estimuló, tanto la frecuencia de hibridización como la formación de hibridomas específicos. Se incluyó una batería de antígenos no relacionados durante el ensayo de los sobrenadantes de los hibridomas, con vistas a descartar las células secretoras de IgM de amplia reactividad cruzada. Todos los hibridomas específicos producían anticuerpos del tipo IgM.