Capture immunoassay for LT detection produced by enterotoxigenic Escherichia coli in bacterial isolates

A capture enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), which detects LT-I toxin produced by enterotoxigenic Escherichia coli strains, has beendeveloped. This capture assay was performed using the IgG enriched fraction of anti-LT-I antiserum and IgG2b anti-LT-I monoclonal antibody and allowed a clear distinction between E. coli LT-I - producing and non-producing strains. The estimated accuracy of the assay is 78% for sensitivity, 94% for specificity and 92% for efficiency. Thus, the capture immunoassayis a sensitive tool for detection of E. coli, which produces heat-labile enterotoxin, and is suitable for use in clinical laboratories and epidemiological surveys in developing world.

O objetivo do presente trabalho foi a padronização de um imunoensaio de captura para detecção de amostras de E. coli produtoras da toxina LT-I. Este ensaio de captura foi desenvolvido utilizando-se a fração enriquecida em IgG do anticorpo policlonal anti-LT e um anticorpo monoclonal caracterizado como IgG2b. Através deste método verificou-se uma clara distinção entre cepas de E. coli produtoras e não produtoras da toxina (p 0,0001), sendo a sensibilidade do método de 78%, a especificidade de 94% e a eficiência de 92%. Assim, o imunoensaio de captura mostrou-se como uma ferramenta sensível para a detecção de amostras de E. coli que produzem a enterotoxina termo-lábil, podendo ser aplicado em laboratórios clínicos e inquéritos epidemiológicos em paises em desenvolvimento.

Urinary tract infection: detection of Escherichia coli antigens in human urine with an ELIEDA immunoenzymatic assay / Las infecciones urinarias: detección de antígenos de Escherichia coli en orina humana con un ensayo inmunoenzimático por electrodifusión (ELIEDA)

Escherichia coli is the most common causative agent of urinary tract infection (UTI), and diagnosing this infection usually relies on bacteriologic methods. Nevertheless, screening methods can be useful for a rapid presumptive diagnosis even though some of these screening methods have low sensitivity or are expensive. To investigate a possible new alternativa approach, an antigen-based immunoassay-enzyme-linked immunoelectrodiffusion assay (ELIEDA)- was standardized for screening for this bacterial infection. Combining counter-immunoelectrophoresis with an immunoenzymatic assay, the ELIEDA requires concentrated urine specimens, a cellulose acetate membrane, polyclonal antibodies to E. coli raised in rabbits, and peroxidase-labeled sheep antibodies to rabbit immunoglobulin G (IgG). This ELIEDA technique was evaluated using 244 urine specimens, 76 of them with E.coli, 47 with heterologous bacteria, and 121 without bacteria. In comparison to bacteriologic methods, the sensitivity, specificity, and positive and negative predictive values for the ELIEDA were 93.4 por ciento, 98.2 por ciento, 95.9 por ciento, and 97.1, respectively. The data obtained suggest that this assay is useful for routine diagnostic screening for UTI caused by E.coli. In addition, since the ELIEDA stained membranes can be stored, this assay makes retrospective studies possible

Escherichia coli es el agente causal más frecuente de las infecciones urinarias (IU), cuyo diagnóstico suele basarse en métodos bacteriológicos. No obstante, los métodos de tamizaje pueden ser útiles para hacer un diagnóstico preliminar con rapidez, pese a que algunos de ellos tienen poca sensibilidad y son caros. Con el fin de investigar la posibilidad de usar otra técnica de diagnóstico, se estandarizó un inmunoensayo de tipo antigénico­ensayo inmunoenzimático por electrodifusión (ELIEDA, por e n z y m e -linked immunoelectrodiffusion assay)­para hacer el tamizaje de este tipo de infección. El ELIEDA, que consiste en el uso combinado de contrainmunoelectroforesis y un ensayo inmunoenzimático, requiere muestras de orina concentrada, una membrana celulosa con acetato, anticuerpos policlonales contra E. coli formados en conejos, y anticuerpos de cordero marcados con peroxidasa contra inmunoglobulinas G (IgG) de conejo. Esta técnica de ELIEDA se evaluó con 244 especímenes urinarios: 76 tenían E. coli; 47 tenían bacterias heterólogas y 121 carecían de bacterias. Al compararlo con los métodos bacteriológicos, el ELIEDA mostró una sensibilidad, especificidad y valores predictivos positivo y negativo de 93,4%, 95,9% y 97,1%, respectivamente. Los resultados obtenidos indican que este ensayo es útil para el tamizaje diagnóstico de rutina de las IU causadas por E. coli. Además, el ensayo facilita la realización de estudios retrospectivos, ya que las membranas teñidas usadas para el ELIEDA son almacenables