ABSTRACT
Se investigó la actividad hemolítica de Klebsiella pneumoniae, empleando cepas de referencia y cepas aisladas de infecciones. Todas las bacterias estudiadas resultaron hemolíticas en forma selectiva sobre eritrocitos de conejo. El frío intensificó el efecto lítico sobre los glóbulos rojos. Se estimó la capacidad hemolítica de las cepas mediante el diámetro de los halos producidos alrededor de orificios inoculados con 5 micron**l de suspensiones bacterianas. Cuando se realizó la detección de hemolisis en medios líquidos, sólo fue posible evidenciar lisis franca al tratar los cultivos con ciertos agentes reductores; de los cuales el más efectivo resultó el 2 mercaptoetanol. A la misma concentración los demás agentes químicos utilizados dieron menor porcentaje de eritrocitos lisados. La actividad hemolítica apareció en los cultivos durante la fase exponencial del crecimiento bacteriano y al cabo de 24 horas disminuyó al 33% del valor máximo alcanzado. Tanto la hemolisina cruda como la purificada reqirieron SH-activación y fueron inhibidas por suero
Subject(s)
Rabbits , Animals , Erythrocytes/microbiology , Hemolysin Proteins/metabolism , Hemolysis , Klebsiella pneumoniae/metabolismABSTRACT
Se investigó la incidencia de hemolisinas en Klebsiella pneumoniae procedentes de cipas mantenidas en colección y de aislamientos a partir de materiales biológicos, encontrándose en el 100% de las cepas estudiadas actividad hemolítica selectiva sobre eritrocitos de conejo. Fue posible purificar dos fracciones hemolíticas a partir de los sobrenadantes de cultivo. Ambas result ron sulhidrilactivadas dependientes del tratamiento con agentes reductores y presentaron similitud con otras hemolisinas oxígeno-lábiles, en cuanto al mecanismo de acción e inhibidores. Mediante precipitación salina, filtración en gel Sephadex G-100, electroforesis en poliacrilamida y cromatografía en DEAE-Sephadex, se lograron separar dichas hemolisinas de proteínas contaminantes, una de las cuales tienen un efecto inhibitorio sobre la actividad hemolítica. Se alcanzaron porcentajes ejevados de recuperación, sobre todo en los pasos del proceso de purificación fundamentados en diferencias de densidad de carga eléctrica de las macromoléculas. Si bien la separación de las dos fracciones hemolíticas induce a pensar en estructuras químicas distintas por tener tamaño y carga eléctrica diferente, resulta sugestivo el hecho que comparten varias propiedades: activación de grupos sulfhidrilos, selectividad sobre eritrocitos de conejo, comport amiento frente al tratamiento térmico, pH óptimo, mecanismo de acción, inhidición por colesterol y cationes divalentes. En función de ello no se sugiere una denominación individual por el momento. Las hemolisinas purificadas constituyen el primer ejemplo de lisinas tiol-activadas en bacilos Gramnegativos