Residence of liquids in the infra-junctional portion of the proximal stomach in patients with gastroesophageal reflux disease

Patients with gastroesophageal reflux disease may have disturbances of gastric motility, which could play a role in the pathophysiology of the disease. Recent studies have suggested that the gastric region just below the gastroesophageal junction may have a distinct physiological behavior. We determined whether patients with gastroesophageal reflux disease have abnormal residence of food in the infra-junctional portion of the stomach after ingesting a liquid nutrient meal. Fasted adult patients with reflux disease (N = 11) and healthy volunteers (N = 10) ingested a liquid meal (320 ml; 437 kcal) labeled with 99m technetium-phytate and their total gastric emptying half-time and regional emptying from the stomach infra-junctional region were determined. In 8 patients, episodes of postprandial acidic reflux to the esophagus were measured for 2 h using pH monitoring. There were no differences between reflux patients and controls regarding total gastric emptying time (median: 68 min; range: 39-123 min vs 65 min and 60-99 min, respectively; P > 0.50). Food residence in the infra-junctional area was similar for patients and controls: 23 percent (range: 20-30) vs 27 percent (range: 19-30 percent; P = 0.28) and emptying from this area paralleled total gastric emptying (Rs = 0.79; P = 0.04). There was no correlation between residence of food in the infra-junctional area and episodes of gastroesophageal reflux (Rs = 0.06; P = 0.88). We conclude that it is unlikely that regional motor disturbances involving the infra-junctional region of the stomach play a relevant role in the pathogenesis of acidic gastroesophageal reflux.

Inhibition of mouse and rat lymphoproliferation by gangliosides

Our previous study have demonstrated that Glycosphingolipids (GSLs) have an immunosuppressive effect on murine lymphoproliferation and IL-2 production. In the present study we examined the effect of a pool of Gangliosides (Gang) on spleen lymphocyte proliferation from either isogeneic strains of Wistar rats or BALB/c mice. Two hundred-fifty grams adult female isogeneic Wistar rats and 8-week-old BALB/c mice were used. The animals were sacrificed and the spleen harvested aseptically for cellular assays. Spleen cells suspensions were obtained by homogenization in RPMI 1640 with a loose tissue grinder. After washing, the cells were suspended in RPMI 1640 supplemented. Cell viability was measured by Trypan blue exclusion. Cells were cultured in triplicate using increasing concentrations of Gang (1; 2; 5; 10; 15; 20 mg/well) and in the presence of Concanavalin A. The cells were incubated for 48 hours and were pulsed with [3H] thymidine 18 hours prior to harvesting on glass fiber paper for counting in a beta-counter. Data were presented as rate of inhibition, as previously described. At concentrations 1 and 2 mug/well, Gang stimulated lymphoproliferation (30 percent and 50 percent, rats and mice respectively), while at concentration from 5 to 20 mg/well an increasing inhibition was observed for spleen cells from both mouse and rat (from 40 percent up to 80 percent). In preliminary studies we observed inhibition of mixed lymphocyte reaction on spleen cells from rats treated with Gang for 10 days (data not shown). Our data suggest that Gang may be investigated as a immunosuppressive drug in organ transplantation.

Gangliosideos e a resposta de hipersensibilidade retardada em camundongos / Gangliosides and the delayed hypersensitivity response in mice

Em trabalhos anteriores mostrou-se que os gangliosídeos (GSLs) têm um efeito inibitório sobre a proliferação linfocitária e a síntese de IL-2, assim como sobre a reação mista de linfócitos. Neste estudo objetivou-se avaliar o efeito dos GSLs sobre a resposta de hipersensibilidade retardada. Foram utilizados 12 camundongos BALB/c, machos, pesando em média 30 gramas, provenientes do biotério setorial da Disciplina de Parasitologia e mantidos por 5 dias para adaptação no biotério setorial da Disciplina de Técnica Operatória e Cirurgia Experimental da UNIFESP-EPM, recebendo água e ração própria para a espécie. Os animais foram distribuídos em três grupos, de acordo com as doses de GSLs, da seguinte forma: grupo 3mg. kg-1, grupo 9mg. kg-1 e grupo simulado (veículo). Os animais foram tratados, por via intramuscular, nos dias 0 e 4. O parâmetro avaliado foi o edema da pata traseira esquerda no local da inoculação do antígeno. Os animais foram anestesiados com Cetamina (60mg.kg-1) e Xilazina (10mg.kg-1), por via intramuscular, sendo em seguida submetidos à dissecção da veia jugular direita, por onde foram inoculadas 10(6) hemácias de Carneiro no dia 0, para sensibilização. No dia 4 subsequente, os animais foram novamente anestesiados e receberam, por via subcutânea, 10(8) hemácias de Carneiro, num volume de 0,02ml. Foram realizadas medidas do edema da pata traseira com paquímetro 24, 48, 72 e 96 horas após o desafio. Os dados mostraram que após 48h houve um aumento do edema em animais dos grupos simulado e 3mg (médias=2,3 and 2,1mm, respectivamente), e os camundongos do grupo 9mg não apresentaram aumento importante (média=0,1mm). Entretanto, após 72h, o grupo 9mg apresentou aumento de 1,7mm enquanto, os outros grupos não apresentaram mudança significativa no edema da pata (médias=0,2 e 0,8mm), grupos simulado e 3mg, respectivamente) comparados aos dados do dia antecedente. Após 96h, todos os grupos apresentaram desaparecimento do edema. Com base nos dados obtidos pode-se concluir que a resposta de hipersensibilidade retardada alterou-se na vigência de alta dose de GSLs.

Efeito imunossupressor dos gangliosídeos: estudo in vivo / Immunosupressive effect of gangliosides: in vivo study

Imunomodulação mais específica e eficaz é uma meta importante a ser atingida na área de órgão. Neste sentido, foi estudado previamente o papel imunomodulador dos gangliosídeos "in vitro". No presente trabalho objetivou-se avaliar este efeito agora "in vivo", mimetizando a situação do transplante alogênico. Foram utilizados 26 ratos Wistar 1 EPM, machos, com 3 meses de idade, pesando cerca de 250g, procedentes do Centro de Desenvolvimento de Pesquisa Experimental em Medicina e Biologia. Os animais fora mantidos por 5 dias, para adaptação, no biotério setorial da Disciplina de Técnica Operatória e Cirurgia Experimental da UNIFESP-EPM, recebendo água e ração própria para a espécie. Os animais foram distribuídos em grupos conforme segue: grupos experimento (que receberam 1, 3 e 6 mg/kg/dia de gangliosídeos) e um grupo controle que recebeu veículo, todos por via intramuscular durante 7 dias consecutivos. No 8º dia, com os animais anestesiados com éter etílico foi feita a remoção cirúrgica do baço de todos os animais, os quais foram sacrificados por exsanguinação, ainda sob efeito anestésico. Os baços removidos foram processados para a obtenção de linfócitos os quais foram cultivados em placa de cultura com 96 poços, distribuídos da seguinte forma: 1,5x10(5) linfócitos viáveis de cada animal dos grupos experimento e controle foram cultivados com 1,5x10(5) linfócitos viáveis de um rato não tratado, sendo assim realizada a reação mista de linfócitos. Os linfócitos provenientes dos animais dos grupos controle e 1 mg apresentaram aumento da proliferação sem nenhuma alteração. Por outro lado, foi observada uma taxa de inibição ao redor de 70 por cento sobre a proliferação linfocitária dos animais dos grupos 3 e 6 mg comparados aos animais dos grupos controle e 1 mg. O resultado desta investigação estimula a utilização dos gangliosídeos no tratamento da rejeição alogênica.

Glycosphingolipid antigens from Leishmania (L.) amazonensis amastigotes. Binding of antiglycosphingolipid monoclonal antibodies in vitro and in vivo

Specific glycosphingolipid antigens of Leishmania (L.) amazonensis amastigotes reactive with the monoclonal antibodies (MoAbs) ST-3, ST-4 and ST-5 were isolated, and their structure was partially elucidated by negative ion fast atom bombardment mass spectrometry. The glycan moieties of five antigens presented linear sequences of hexoses and N-acetylhexosamines ranging from four to six sugar residues, and the ceramide moieties were found to be composed by a sphingosine d18:1 and fatty acids 24:1 or 16:0. Affinities of the three monoclonal antibodies to amastigote glycosphingolipid antigens were also analyzed by ELISA. MoAb ST-3 reacted equally well with all glycosphingolipid antigens tested, whereas ST-4 and ST-5 presented higher affinities to glycosphingolipids with longer carbohydrate chains, with five or more sugar units (slow migrating bands on HPTLC). Macrophages isolated from footpad lesions of BALB/c mice infected with Leishmania (L.) amazonensis were incubated with MoAb ST-3 and, by indirect immunofluorescence, labeling was only detected on the parasite, whereas no fluorescence was observed on the surface of the infected macrophages, indicating that these glycosphingolipid antigens are not acquired from the host cell but synthesized by the amastigote. Intravenous administration of 125I-labeled ST-3 antibody to infected BALB/c mice showed that MoAb ST-3 accumulated significantly in the footpad lesions in comparison to blood and other tissues.