Ensayo de citotoxicidad de extractos de Pleurotusostreatus en diferentes líneas celulares para aplicaciones inmunonutricionales

Introducción: Los bioderivados propuestos como candidatos a ingredientes alimentarios suelen requerir ciertas evaluaciones para las aplicaciones inmunonutricionales Los hongos comestibles-medicinales son un surtidor de compuestos con estas potencialidades. Entre ellos, las setas Pleurotus ostreatus contienen metabolitos bioactivos, con importantes usos en la industria alimenticia y en la práctica terapéutica de la industria médico-farmacéutica. Los ensayos de citotoxicidad in vitro constituyen métodos valiosos para evaluarproductos de origen natural, como los extractos fúngicos. Objetivo: Evaluar la citotoxicidad de dos extractos obtenidos de la seta Pleurotus ostreatus en diferentes líneas celulares. Método: Se obtuvieron extractos hidrosolubles a partir del micelio y de los cuerpos fructíferos de Pleurotus ostreatus en laboratorios del Centro de Estudios de Biotecnología Industrial de la Universidad de Oriente. Se evaluó la citotoxicidad de los bioproductos por el ensayo de reducción del colorante resazurina sobre tres líneas celulares en el Laboratorio de Microbiología, Parasitología e Higiene (LMPH) de la Universidad de Amberes, Bélgica. Se utilizaron células no adherentes THP-1 (pre-monocitos de leucemia humana), células adherentes Caco-2 (epitelio de adenocarcinoma de colon humano) y células adherentes RAW 264.7 (macrófagos murinos). Resultados: Los extractos de Pleurotus ostreatus no resultaron citotóxicos para ninguna de las líneas celulares estudiadas humanas o murina, ya que no ocasionaron daños sobre la viabilidad de las célulasepiteliales del sistema gastrointestinal, nisobrelas células del sistema inmune empleadas. Conclusiones: Este resultado demuestra que ambos bioderivados fúngicos pueden ser aplicados con seguridad en estudios inmunonutricionales.

Introduction: Bioderivatives proposed as candidates for food ingredients usually require certain evaluations for immunonutritional applications. Edible-medicinal mushrooms are a source of compounds with these potentials. Among them, Pleurotus ostreatus mushrooms contain bioactive metabolites, with important uses in the food industry and in the therapeutic practice of the medical-pharmaceutical industry. In vitro cytotoxicity assays are valuable methods to evaluate products of natural origin, such as fungal extracts. Objective: To evaluate the cytotoxicity of two extracts obtained from the Pleurotus ostreatus mushroom in different cell lines. Method: Water-soluble extracts were obtained from the mycelium and fruiting bodies of Pleurotus ostreatus in laboratories of the Center for Industrial Biotechnology Studies of the Universidad de Oriente. The cytotoxicity of the bioproducts was evaluated by the resazurin dye reduction assay on three cell lines at the Laboratory of Microbiology, Parasitology and Hygiene (LMPH) of the University of Antwerp, Belgium. Non-adherent THP-1 cells (human leukemia pre-monocytes), Caco-2 adherent cells (human colon adenocarcinoma epithelium) and RAW 264.7 adherent cells (murine macrophages) were used. Results: Pleurotus ostreatus extracts were not cytotoxic for any of the human or murine cell lines studied, since they did not cause damage to the viability of the epithelial cells of the gastrointestinal system, nor to the immune system cells used. Conclusions: This result demonstrates that both fungal bioderivatives can be safely applied in immunonutritional studies.

Introdução: Bioderivados propostos como candidatos a ingredientes alimentícios geralmente requerem determinadas avaliações para aplicações imunonutricionais. Pleurotus ostreatus contêm metabólitos bioativos, com importantes utilizações na indústria alimentícia e na prática terapêutica da indústria médico-farmacêutica. Ensaios de citotoxicidade in vitro são métodos valiosos para avaliar produtos de origem natural, como extratos de fungos. Objetivo: Avaliar a citotoxicidade de dois extratos obtidos do cogumelo Pleurotus ostreatus em diferentes linhagens celulares. Método: Extratos hidrossolúveis foram obtidos do micélio e dos corpos frutíferos de Pleurotus ostreatus nos laboratórios do Centro de Estudos de Biotecnologia Industrial da Universidade de Oriente. A citotoxicidade dos bioprodutos foi avaliada pelo ensaio de redução do corante resazurina em três linhagens celulares no Laboratório de Microbiologia, Parasitologia e Higiene (LMPH) da Universidade de Antuérpia, Bélgica. Foram utilizadas células THP-1 não aderentes (pré-monócitos de leucemia humana), células aderentes Caco-2 (epitélio de adenocarcinoma do cólon humano) e células aderentes RAW 264.7 (macrófagos murinos). Resultados: Os extratos de Pleurotus ostreatus não foram citotóxicos para nenhuma das linhagens celulares humanas ou murinas estudadas, pois não causaram danos à viabilidade das células epiteliais do sistema gastrointestinal, nem às células do sistema imunológico utilizadas. Conclusões: Este resultado demonstra que ambos os bioderivados fúngicos podem ser aplicados com segurança em estudos imunonutricionais.

Reservorios de leptospirosis en Camagüey: dos resultados y una misma base de datos / Leptospirosis reservoirs in Camagüey: two results and a same database

El objetivo del trabajo fue establecer la fiabilidad de las variables número de muestras y proporción de reactores positivos por especie para el estudio de los animales domésticos como reservorios de leptospirosis en Camagüey. Se hizo una base de datos con los reactores a Leptospira a partir de los sueros sanguíneos de 2 659 bovinos, 2 617 equinos, 814 porcinos, 75 ovinos-caprinos y 69 caninos de la provincia. Los resultados, atendiendo al número de muestras, dieron a bovinos (43 por ciento) y equinos (41 por ciento) como reactores hegemónicos; porcinos (13 por ciento), caninos (1 por ciento) y ovino-caprinos (1 por ciento) mostraron un comportamiento muy inferior. En función de la proporción de reactores por especie, bovinos, porcinos, caninos y caballares prevalecieron homogéneamente (P<0,05) a diferencia de ovino-caprino. Los caballos destinados a la transportación urbana constituyeron un riesgo potencial para el ser humano

The objective of the work was to establish the reliability of the variable number of samples and proportion of positive reactors by species for the study of the domestic animals as leptospirosis reservoirs in Camagüey. A database was made with the reactors to Leptospira from the sanguine serums of 2 659 bovine, 2 617 equine, 814 swinish, 75 ovines-caprines and 69 canines of the province. According to the number of samples, the results gave to bovine (43 percent) and equine (41 percen) as hegemonic reactors; swinish (13 percen), canine (1 percent) and ovine-caprines (1 percen) showed a very inferior behavior. In function of the proportion of reactors by species, bovine, swinish, canine and horses prevailed homogeneously (P<0,05) contrary to ovine-caprine. Horses dedicated to the urban transportation constituted a potential risk for the human being.

Especies bacterianas asociadas a infecciones del tracto urinario / Bacterial species associated with urinary tract infections

Fundamento: las infecciones del tracto urinario constituyen una de las causas más frecuentes de enfermedad infecciosa en la práctica médica; a las especies bacterianas habituales se suman otras, poco frecuentes, potenciadas en los ambientes hospitalarios, que dificultan la respuesta del paciente a los tratamientos. Objetivo: establecer la participación de especies bacterianas en infecciones urinarias diagnosticadas a pacientes atendidos en el Hospital Universitario Provincial Amalia Simoni de la ciudad de Camagüey. Métodos: se realizó un estudio observacional, transversal, en el laboratorio de Microbiología de esa institución, donde se seleccionó la información concerniente a urocultivos realizados durante siete años (enero de 2008 hasta diciembre de 2014). Sólo se tuvieron en cuenta los que propiciaron aislamientos bacterianos con identificación de la especie o el género; no se consideró ni la edad ni el sexo de los pacientes. Se realizó un análisis de frecuencia para establecer el porcentaje de participación de cada especie. Resultados: se manifestó la participación 11 géneros a través de 2 510 urocultivos, que respondían a urosepsis monobacterianas, siete de los cuales incluían a 19 especies avaladas como uropatógenas. E. coli prevaleció (53,46 %), seguida de Citrobacter freundii (13,54 %), Pantoea agglomerans (12,86 %), Acinetobacter spp. (4,02 %), Staphylococcus haemolyticus (3,66 %), y otras en menos cuantía entre las que figuran Stenotrophomonas maltophilia y Myroides spp., no reportadas en Cuba en este tipo de infección. Hubo un predominio de bacterias gramnegativas (92,47 %); las únicas especies grampositivas correspondieron a Staphylococcus (7,53 %). Conclusiones: aunque E. coli predomina en la infección analizada, un gran número de especies gramnegativas se suman al problema. La elevada presentación de P. agglomerans y la presencia de Acinetobacter spp. Stenotrophomonas maltophilia y Myroides spp. podría estar asociada a procesos de selección inducidos por una amplia e intensa antibioterapia hospitalaria, aspecto a tener en cuenta en ulteriores investigaciones.

Background: urinary tract infections are one of the main causes of disease infections in the medical practice. There are other less common bacteria found in hospitals environment that join the usual ones, which make the patients' response to treatments more difficult. Objective: to establish the participation of bacterial species in urinary infections diagnosed to patients assisted at Amalia Simoni Hospital in Camagüey. Methods: a transversal, descriptive, observational study was conducted at a microbiology laboratory where the information concerning urine tests that had been made for seven years (January, 2008 until December, 2014) was selected. Those conducting to bacterial isolation with the identification of the species, or genera, were the only ones considered. Neither the age nor the sex of patients was taken into account. A frequency analysis for establishing the percentage of participation of each species was done. Results: 2 510 urine cultures, corresponding to single-bacterial urosepsis, demonstrate the participation of 11 genera; seven of them included 19 species whose uropathogenic value was confirmed. E. coli prevailed (53,46 %), followed by Citrobacter freundii (13,54 %), Pantoea agglomerans (12,86 %), Acinetobacter spp. (4,02 %), Staphylococcus haemolyticus (3,66 %), and others with smaller quantities including Stenotrophomonas maltophilia and Myroides spp., that were not reportedly in Cuba in this type of infection. There was a prevalence of gram-negative bacteria (92,47 %) while the unique gram-positive corresponded to Staphylococcus (7,53 %). Conclusions: even though E. coli still prevails in the analyzed infection, a great number of gram-negative species increases. The high presentation of P. agglomerans,and the presence of Acinetobacter spp. Stenotrophomonas maltophilia and even Myroides spp. could be associated with selective processes inducted by a wide and intense hospitality antibiotics therapy, something to be considered in future research.

Presencia de E. coli enteropatógenas en pacientes con diarrea aguda / Presence of enteropathoge E. coli in patientes with acute diarrhea

El estudio abarcó un total de 226 cepas de E. coli, procedentes de 144 pacientes menores de 5 años, afectados de esta enfermedad diarreica aguda. El aislamiento y caracterización de las categorías enteropatógenas se realizó acorde al esquema propuesto por Barreto. La frecuencia de presentación de las categorías enteropatógenas en los pacientes de EDA fue enteroinvasivas 11,8%; enterohemorrágicas 10,4%, enterotoxigénicas 0,69%. Por carencia de inmunosueros específicos no se estableció la frecuencia de presentación del tipo enteropatógenos clásicos. No obstante, los resultados obtenidos infieren su participación causal. Los porcentajes de aislamiento de E. coli enterohemorrágica y E. coli enteroinvasiva muestran la necesidad de instrumentar este tipo de diagnóstico.

The study covered a total of 226 strains of E. coli, coming from 144 patients younger than 5 years, affected by acute diarrheic disease .Isolation and characterization of the enteropathogenic categories was performed according to the shedule proposed by Barreto. The frequency of the presentation of the enteropathogenic categories in patients with ADD was enteroinvasive 11,8% enterohemorragic 10,4%; enterotoxigenic 0,69%. Due to the lack of specific inmune serum, it was not established the frequency of presentation of the classic entheropathogen type. However, results obtained infer its participation in this etiology. Porcentages of the isolation of E. enteroinvasive E. coli and enterohemorrhagic E. coli. show the need of instrumenting this type of diagnosis.

Esquema para el diagnóstico de Escherichia Coli Enterohemorrágica y otras categorías enteropatógenas en pacientes con enfermedad diarreica aguda / Scheme for the diagnosis of Enterohemorrhagic Escherischa Coli and other enteropathogenic categories of patients with EDA

Se propone un esquema para el diagnóstico de cuatro categorías enteropatógenas de E. coli en el que las muestras de heces fecales o hisopajes rectales se siembran en paralelo en los medios agarizados Mac Conkey y Mac Cokey Sorbitol. De los mismos se seleccionan de 3 a 5 colonias (rojas del primero; blancas del segundo). A partir de allí, el esquema propuesto incorpora armónicamente las técnicas propuestas por March, Ratnam y Blanco para E. coli enterohemorrágica O157: H7 con la variante de Barreto para E Coli enterohemorrágicas en general y, aprovechando las particularidades hemolíticas de las categorías enteropatógenas que afectan al humano, utiliza esta variante como punto de partida para su diferenciación y para descartar aquellas cepas carentes de valor enteropatógenos, caracterizadas por una hemólisis total. El tipo enteroinvasivo se diagnostica acorde a lo sugerido por Prats y Llovet, en tanto que las enterotoxigénicas y enteropatógenas clásicas se hacen según Blanco y Blanco. La aplicación de este esquema diagnóstico ha posibilitado el establecimiento de estas categorías enteropatógenas en pacientes con EDA menores de cinco años en investigaciones realizadas en el Centro Provincial de Higiene, Epidemiología y Microbiología de Camagüey.

A schemic is proposed for the diagnosis of 4 enteropathogenic categories of E. Coli in which feces samples were cultivated parallel in the agar solution, Mac Conkey and Mac Cokey Sorbitol; 3 to 5 colonis were selected (red of the first one; white of the second one). The preposed schemic uses harmonically the proposed techniques by March and Katman, and Blanco it al for E. Coli 0157: H7 with the variant of Barreto for enterohemorrhagic E. Coli and taking into account the hemolytic peculiarities of enteropathogenic categories that affect the human being, it uses this variant as departing point for its differentiation and for discarding those smears laking of entheropatogenic value, characterized by a total hemolysis. The enteroinvasive type is diagnosed according to what Prats and Llovet suggest, the classic enterotoxigenic and enteropathogenic are done as to Blanco and Blanco. The application of this diagnostic scheme has made possible the establishment of these enteropathogenic categories in patients with acute diarrhea younger than 5 years in researches performed in the Provincial Centre of Higiene, Epidemiology and Microbiology of Camagüey.