ABSTRACT
In this study, we used red cell glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) activity to screen for G6PD-deficient individuals in 373 unrelated asymptomatic adult men who were working with insecticides (organophosphorus and carbamate) in dengue prevention programs in 27 cities in São Paulo State, Brazil. Twenty-one unrelated male children suspected of having erythroenzymopathy who were attended at hospitals in São Paulo city were also studied. Fifteen of the 373 adults and 12 of the 21 children were G6PD deficient. G6PD gene mutations were investigated in these G6PD-deficient individuals by using PCR-RFLP, PCR-SSCP analysis and DNA sequencing. Twelve G6PD A-202A/376G and two G6PD Seattle844C, as well as a new variant identified as G6PD São Paulo, were detected among adults, and 11 G6PD A-202A/376G and one G6PD Seattle844C were found among children. The novel mutation c.660C > G caused the replacement of isoleucine by methionine (I220M) in a region near the dimer interface of the molecule. The conservative nature of this mutation (substitution of a nonpolar aliphatic amino acid for another one) could explain why there was no corresponding change in the loss of G6PD activity (64.5 percent of normal activity in both cases).
ABSTRACT
A dosagem de hemoglobina A2 (HbA2) é comumente feita utilizando-se como amostra solução de hemoglobina (hemolisado clássico com clorofórmio ou tetracloreto de carbono) ou hemolisados com saponina, apesar de os valores de referência para tal determinação terem sido estabelecidos a partir de dados tendo apenas solução de hemoglobina como amostra. Assim, para verificar se há ou näo coerência na utilização indiscriminada daqueles valores de referência para dosagem de HbA2 em amostras de hemolisado com saponina, foi feita a dosagem desta proteína utilizando quatro tipos de hemolisados. Na 1ª etapa da avaliação foram procedidas trinta determinações para fração de HbA2 a partir de hemolisado com saponina e hemolisado clássico com tetracloreto de carbono; na 2ª etapa mais 40 determinações foram analisadas utilizando hemolisado com saponina e com clorofórmio, porém acrescidos de cianeto de potássio (KCN). A análise estatística feita através de teste t pareado na 1ª etapa, revelou uma tendência de que os resultados obtidos a partir de saponina para amostras com níveis normais de HbA2 sejam maiores cerca de 0,42 por cento que aqueles obtidos a partir da solução de hemoglobina (p<0,001). Porém, quando adiciona-se KCN no hemolisado não houve diferença significativa entre o hemolisado clássico (soluçäo de hemoglobina) e o hemolisado com saponina. Deste modo, a utilização de diferentes tipos de hemolisados como amostra (saponina sem KCN ou solução de hemoglobina) podem gerar resultados distintos para a dosagem de HbA2. Determinações de HbA2 feitas especificamente com hemolisado com saponina tendem a superestimar os resultados, quando comparados a valores de referência estabelecidos a partir de hemolisado clássico. Assim, a utilização do hemolisado clássico ou de saponina com KCN são indicados para a dosagem de HbA2 pelo método de eluiçäo eletroforética. O uso de hemolisado apenas com saponina requereria a utilizaçäo de valores de referência específicos. (AU)
It was made the evalution of the hemoglobin A2(Hb A2) determination using four hemolysatetypes. In the 1st. stage of the evalution thirty determinations were proceeded for fraction of Hb A2 startingfrom hemolysate with saponine and starting from carbon tetrachloride, in the 2nd stage more 40determinations were analyzed using hemolysate obtained through saponine and with cloroform, howeveradded with potassium cyanide (KCN). The statistical analysis done through test t in the 1st , it revealed atendency of the results obtained starting from saponine are larger about 0,42% that those obtained startingfrom carbon tetrachloride (p<0,001). However, when KCN is added in the hemolysate there is no significantdifference among the classic hemolisado and with the saponine. Like this, the use of the classic hemolysateor of the saponine with KCN are indicative for Hb A2 quantitative determination for the method of elution. (AU)