Morfología y respuesta de anticuerpos IgM e IgG anti-Blastocystis sp. en pacientes con síntomas gastrointestinales / Morphology and response of IgM and IgG anti-Blastocystis sp. in patients with gastrointestinal symptoms

Es importante definir criterios diagnósticos que permitan dilucidar el papel patógeno de Blastocystis sp. Se evaluó morfología y se estimó el diámetro de las formas, número de parásitos por campo y por gramo de heces y los anticuerpos IgM e IgG anti- Blastocystis sp. mediante ELISA, en sujetos con sintomatología general y portadores sanos. Se encontró 77% de muestras positivas para Blasctocystis sp, 52% provenientes de pacientes con síntomas como flatulencia 6 (24%), dolor abdominal 5 (20%), náuseas 2 (8%), diarrea 6 (24%) y estreñimiento 6 (24%). Los rangos de parásitos por campo más frecuente en sintomáticos fueron 0-3 (74%) y 10-12 (26%), mientras que 100% de los pacientes asintomáticos presentaron Blastocystis sp. en el rango 0-3. Los pacientes asintomáticos presentaron menor número de parásitos por gramo de heces, en el rango de 0-3 y el rango 7-10 con altas cargas parasitarias solo fue observado en sintomáticos. Se encontró menor cantidad de formas granulares en ambos grupos, en el rango 0-3 en sintomáticos: 85% vacuolares y 15% granulares; 76% vacuolares y 24% granulares, en asintomáticos. En el rango 10-12, 98% vacuolares y 2% de granulares, en sintomáticos. El diámetro promedio de las formas vacuolares fue 11,9±2 μm en los pacientes sintomáticos y 7,9±3,7 μm en asintomáticos. En los granulares fue 9,3±2,3 μm en sintomáticos y 8,2±0,1 μm en asintomáticos. Observándose diferencias significativas entre las formas vacuolares de ambos grupos (P=0,000026), pero no en los granulares (P=0,346). El 3,5% de los pacientes sintomáticos presentaron anticuerpos IgG anti-Blastocystis sp. El estudio morfológico empleado contribuyó en la optimización del diagnóstico, mientras que las técnicas inmunoenzimáticas resultaron de baja sensibilidad.

It is important to define diagnostic criteria to elucidate the pathogenic role of Blastocystis sp. Morphology was assessed and diameter of the shapes, number of parasites per field and per gram of faeces and Blastocystis sp. IgM and IgG antibodies was estimated by ELISA in subjects with constitutional symptoms and healthy carriers. Seventy percent Blasctocystis sp positive samples were found, 52% from patients with symptoms such as flatulence 6 (24%), abdominal pain 5 (20 %), nausea 2 (8%), diarrhea 6 (24%) and constipation 6 (24%). Ranges of parasites per field found more frequently in symptomatic patients were 0-3 (74%) and 10-12 (26%), while 100% of asymptomatic patients had Blastocystis sp. in the range 0-3. Asymptomatic patients showed lower number of parasites per gram feces in the range of 0-3 and the 7-10 range with high parasitic load was only observed in symptomatic. Less granular forms in both groups was found, in the range 0-3 in symptomatic patients: 85% vacuolar and 15% granular; 76% vacuolar and 24% granular in asymptomatics. In the range 10-12, 98% vacuolar and 2% granular in symptomatic patients. The average diameter of the vacuolar forms was 11.9 ± 2 μm in symptomatic patients and 7.9 ± 3.7 μm in asymptomatics . In the granular form was 9.3 ± 2.3 μm in symptomatic and 8.2 ± 0.1 μm in asymptomatics. Significant difference was found among vacuolar forms of both groups (P= 0.000026), but not in the granular form (P= 0.346). Only 3.5 % of symptomatic patients had IgG antibodies to Blastocystis sp. The morphological study employed contributed to the diagnosis optimization while immunoenzymatic techniques were of low sensitivity.

El factor de crecimiento del endotelio vascular hepático en la infección murina por Schistosoma mansoni / The endothelial growth factor vascular infection in murine liver by Schistosoma mansoni

Los antígenos secretados por los huevos de S. mansoni inducen la proliferación de células endoteliales in vivo, así como la producción del Factor de Crecimiento del Endotelio Vascular (VEGF), sugiriendo que la patogénesis en la esquistosomiasis se relaciona con eventos angiogénicos. Se evaluó la expresión del VEGF, como una medida de angiogénesis estimulada por los huevos y los gusanos de S. mansoni, en la infección Bisexual (BIS) y los gusanos adulto (infección UNI) en el hígado de ratones Balb/c, antes y después del tratamiento con PZQ. Los resultados indican que tanto la infección UNI como BIS son capaces de estimular la producción de VEGF en tejido hepático, lo que explica la vascularizacón anómala durante este cuadro infeccioso. Este proceso se acompaña con la presencia de un elevado número de infiltrados leucocitarios en los sitios donde se observa lesión tisular; la producción de VEFG remite tras 48 de tratamiento con PZQ. Estos resultados indican que la producción anómala de VEGF junto con la intensa respuesta pro-inflamatoria asociada no solo a la actividad de VEGF sino también a los infiltrados leucocitarios observados en el tejido hepático, causada tanto por los huevos secretados como por las formas adultas de S. mansoni son los mecanismos que subyacen a las lesiones granulomatosas observadas durante el curso de la esquistosomiasis, pudiendo al menos revertirse el incremento en la vascularización mediante el uso de PZQ.

The antigens secreted by eggs of S. mansoni induce the proliferation of endothelial cells in vivo, as well as the production of Factor Vascular Endothelial Growth factor (VEGF), suggesting that the pathogenesis of schistosomiasis relations with angiogenic events. We evaluated the expression of VEGF, as a measure of angiogenesis stimulated by the eggs and worms S. mansoni in infection bisexual (BIS) and adult worms ( UNI infection ) in the liver of BALB / c mice before and after treatment with PZQ. These results indicate that abnormal production of VEGF with intense pro-inflammatory response not only associated with the activity of VEGF but also leukocyte infiltrates observed in the liver tissue caused by both secreted and eggs by adult forms S. mansoni are the mechanisms underlying granulomatous lesions observed during the course of schistosomiasis, and can be reversed at least the increased vascularization by using PZQ .

Efecto de los microorganismos acuáticos (rotífera y ciliata) sobre la emisión de cercarias de Schistosoma mansoni, por Biomphalaria glabrata en el laboratorio / Effect of aquatic organisms (rotifers and ciliate) on the issuance of Schistosoma mansoni larvae by Biomphalaria glabrata maintained in laboratory

Los rotíferos y ciliados son microorganismos que cohabitan con B. glabrata, y en el caracol infectado comparten espacio con el parásito S. mansoni, agente causal de la esquistosomosis. La experiencia con crías en cautiverio sugiere que la presencia de tales microorganismos puede afectar la evolución del parásito en el caracol, debido a competencia por espacio y nutrientes. En base a esto se evaluó el efecto de los rotíferos y ciliados, sobre la emisión de cercarias de S. mansoni por el molusco B. glabrata mantenida en cautiverio. En los experimentos se emplearon cinco grupos de 10 caracoles infectados con 10 miracidios de S. mansoni, los cuales, se colocaron en recipientes plásticos, con: (a) 87500 rotíferos y 25000 Paramecium sp, (b) 27000 rotíferos y 54000 Paramecium sp, (c) 800000 rotíferos, (d) 4500 Paramecium sp y rotíferos, respectivamente y (e) el grupo control de infección se mantuvo sin rotíferos y ciliados. Se demostró un efecto de inhibición en la emisión de las cercarias de S. mansoni en presencia de rotíferos y Paramecium sp, dependiente de la cantidad de organismos presentes. El porcentaje de inhibición en la emisión de las cercarias de S. mansoni se relacionó con la presencia de un gran número de rotíferos. El presente trabajo constituye el primer hallazgo que sugiere que organismos de los phyllum Rotifera y Ciliophora podrían ser empleados como control biológico de la infección por S. mansoni.

The rotifers and ciliates are microorganisms that coexist with B. glabrata, Inside tissues normally infected by S. mansoni in the snails. the causative agent of schistosomiasis. The captive breeding experience suggests that the presence of such microorganisms can affect the evolution of the parasite in the snail, because competition for space and nutrients. The effect of rotifers and ciliates in the release of cercariae of S. mansoni by the mollusc B. glabrata maintained in captivity. The experimental setting was constituted by five groups of snails (n=10) infected with 10 miracidia from S. mansoni, which were placed in plastic containers with (a) 87500 25000 rotifers and Paramecium sp, (b) 27000 54000 rotifers and Paramecium sp, (c) 800000 rotifers, (d) Paramecium sp 4500 and the same number of rotifers and (e) infection control group remained rotifers and ciliates. It was possible to observe an number-dependent inverse correlation between the release of cercaria from S. mansoni and the number of rotifers and Paramecium sp. Used in this study. Particularly, the percentage of inhibition was strongly associated with the presence of large numbers of rotifers. To date, these are the first findings suggesting that microorganisms from the genus ciliata, subphylum Crustacea, are capable of regulating S. mansoni lyfe cycle progression in the snail stage, therefore could be potentially used as biological controls for the infection caused by S. mansoni.

Tipos morfológicos, número de parásitos por campo y carga parasitaria de Blastocystis sp proveniente de pacientes sintomáticos y asintomáticos

El papel patógeno de Blastocystis sp es controversial, por lo que es importante definir criterios diagnósticos que permitan dilucidar tal rol. Se evaluó la morfología de Blastocystis sp, número de parásitos por campo y por gramo de heces, en sujetos con sintomatología general y portadores sanos. El estudio fue descriptivo y el diseño no-experimental. La observación y contaje al microscopio se hizo en diez campos consecutivos de 40X y en relación al peso de las heces en gramos, en parásitos teñidos con lugol. Se encontró 77% de muestras positivas para Blastocystis sp, 52% provenientes de pacientes con síntomas como flatulencia 6 (24%), dolor abdominal 5 (20%), náuseas 2 (8 %), diarrea 6 (24%) y estreñimiento 6 (24%). Los rangos de parásitos por campo más frecuente en sintomáticos fueron 0-3 (74%) y 10-12 (26%), mientras que 100% de los pacientes asintomáticos presentaron Blastocystis sp en el rango 0-3. Los pacientes asintomáticos presentaron menor número de parásitos por gramo de heces, en el rango de 0-3 y el rango 7-10 con altas cargas parasitarias sólo fue observado en sintomáticos. Se encontró menor cantidad de formas granulares en ambos grupos, en el rango 0-3 en sintomáticos: 85% vacuolares y 15% granulares; 76% vacuolares y 24% granulares, en asintomáticos. En el rango 10-12, 98% vacuolares y 2% de granulares, en sintomáticos. En conclusión, el estudio de las morfologías, el reporte de la cuantificación diferencial de formas por campo y la cuantificación del número de parásitos por campo pueden contribuir a optimizar el diagnóstico y el manejo quimioterapeútico del paciente.

Morphological types, number of parasites per field and parasite load of Blastocystis sp from symptomatic and asymptomatic patients The pathogenicity of Blastocystis sp is controversial, therefore, it is important to define diagnostic criteria for its determination. We evaluated the morphology of Blastocystis sp, number of parasites per field and per gram of faeces in patients with general symptoms and in healthy carriers. The study was a descriptive and nonexperimental design. The microscopic observation and counting was done in ten consecutive fields in relation to 40X and stool weight in grams. We found 77% of samples positive for Blastocystis sp, 52% from patients with symptoms such as flatulence 6 (24%), abdominal pain 5 (20%), nausea 2 (8 %), diarrhea 6 (24%) and constipation 6 (24%) . The ranges of parasites per field more frequent in symptomatic patients were 0-3 (74%) and 7-10 (26%); and in the asymptomatic group 100% of the patients were in the 0-3 range. In the 0-3 range asymptomatic patients had a lower number of parasites per gram of feces, while in the 7-10 range high parasite loads were observed only in symptomatic patients. Less granular forms in relation to vacuolar ones were found in both groups, in the 0-3 range of the symptomatic group, 85% vacuolar and 15% granular, and 76% vacuolar, and 24% granular in the asymptomatic. In conclusion, the study of the morphologies, the quantification of differential forms by field and the quantification of the number of parasites per field contributes to the technical optimization of routine coproparasitology.

Bioética y el empleo de animales de experimentación en investigación

Los adelantos científicos y biotecnológicos propios de la postmodernidad, han planteado nuevos paradigmas en relación a la ética. Las implicaciones bioéticas del empleo de animales de experimentación en investigación son analizadas en la presente revisión. La investigación con humanos se rige desde el punto de vista ético por el código de Nürenberg, las Declaraciones de Helsinki y normas del Consejo de Organizaciones Internacionales de Ciencias Médicas. Estas normativas aún cuando contemplan algunos aspectos relacionados con el empleo de animales de experimentación, presentan el dilema entre el beneficio para el humano, el daño potencial para el animal y el no obstaculizar la investigación. Por esta razón, es importante la creación de comités institucionales para el cuidado y uso de los animales, en especial en las Facultades de Ciencias de la Salud, que se encarguen de concebir y asesorar en la aplicación de códigos de bioética que contemplen pautas para el uso de animales de laboratorio acordes con la normativa internacional y con las particularidades del ámbito nacional que rodea la investigación.

Postmodern advances in science and biotechnology have raised new paradigms in relation to bioethics. The bioethical implications of the use of animals in research are discussed in this review. Nürnberg Code, Helsinki´s Declarations and Norms of the Council for International Organizations of Medical Sciences supply international ethical guidelines for research involving human subjects. These regulations provide some aspects related to the use of experimental animals but rise some dilemmas such as the benefit to humans, the potential harm to the animal, and not obstructing the research. For this reason, it is important the creation of an Animal Care and Use Committee in each research institution, especially in the faculties of health science, which will be responsible for designing and advising bioethics codes implementations that provide guidelines for the use of laboratory animals in accordance with international standards and the particularities of the research rules of each country.