First report of putative Leishmania RNA virus 2 (LRV2) in Leishmania infantum strains from canine and human visceral leishmaniasis cases in the southeast of Brazil

BACKGROUND Leishmania RNA virus 1 (LRV1) is commonly found in South American Leishmania parasites belonging to the subgenus Viannia, whereas Leishmania RNA virus 2 (LRV2) was previously thought to be restricted to the Old-World pathogens of the subgenus Leishmania. OBJECTIVES In this study, we investigated the presence of LRV2 in strains of Leishmania (L.) infantum, the causative agent of visceral leishmaniasis (VL), originating from different hosts, clinical forms, and geographical regions. METHODS A total of seventy-one isolates were screened for LRV2 using semi-nested reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) targeting the RNA-dependent RNA polymerase (RdRp) gene. FINDINGS We detected LRV2 in two L. infantum isolates (CUR268 and HP-EMO) from canine and human cases, respectively. MAIN CONCLUSIONS To the best of our knowledge, this is the first detection of LRV2 in the New World.

Seroepidemiological survey of canine visceral leishmaniasis in a continental island of northeast Brazil / Investigação soroepidemiológica da leishmaniose visceral canina em uma ilha continental do Nordeste do Brasil

Introduction: Visceral leishmaniasis (VL) is endemic disease in the neighboring municipalities of the continental island Ilha de Maré, Salvador, Bahia, Brazil. Nevertheless, VL has not been reported in the island itself. Objective: the present study aimed to investigate the seroprevalence and clinical signs of Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) and to identify the sand fly population present in the village of Botelho, Ilha de Maré. Methodology: sera of local dogs were tested for anti-Leishmania IgG by immunoassays (screening with TR DPP ™ rapid test and confirmatory with indirect ELISA, Bio-Manguinhos/Fiocruz) and an entomological survey was conducted to estimate and identify the phlebotomine fauna of the region. Results: seven out of 106 samples (6.6%) were positive using rapid test. These positive samples were sent to the Central Laboratory of Bahia for confirmation by indirect ELISA. However, all samples presentednegative results. Nine specimens of Pressatia choti, subfamily Phlebotominae were identified, being this species frequently found in areas with cutaneous leishmaniasis transmission in Brazil. Conclusion: although this work did not confirm the presence of CVL in Ilha de Maré, new serological and entomological studies in a larger area are required for the maintenance of the epidemiological surveillance in the emphasized insular area.

Introdução: Leishmaniose Visceral (LV) é uma doença endêmica em municípios vizinhos à Ilha de Maré, situada na plataforma continental do município de Salvador, Bahia, Brasil. Entretanto, casos de LV não tem sido notificados nesta Ilha. Objetivo: O presente trabalho objetivou investigar a soroprevalência e sinais clínicos de Leishmaniose Visceral Canina (LVC) e identificar a população de flebótomos presentes no povoado de Botelho, Ilha de Maré. Metodologia: soro de cães locais foram testados para IgG anti-Leishmania por imunoensaios (triagem com teste rápido TR DPP™ e confirmatório com Elisa Indireto, Bio-Manguinhos/Fiocruz) e uma investigação entomológica foi conduzida para estimar e identificar a fauna flebotomínea da região. Resultados: sete de 106 amostras (6,6%) foram positivas usando o teste rápido. As amostras positivas foram encaminhadas ao Laboratório Central da Bahia para a confirmação por ELISA indireto. Entretanto, essas amostras apresentaram resultado negativo. Foram encontrados nove exemplares da espécie Pressatia choti, subfamília Phlebotominae, espécie frequentemente encontrada em áreas de transmissão de leishmaniose cutânea no Brasil. Conclusão: apesar deste trabalho não ter confirmado a presença de LVC na Ilha de Maré, novos inquéritos sorológicos e analises entomológicas em uma maior área são necessários para a manutenção de uma vigilância epidemiológica na região insular em destaque.

Avaliação da infectividade parasitária a Lutzomyia longipalpis por xenodiagnóstico em cães tratados para leishmaniose visceral naturalmente adquirida / Evaluation of parasite infectivity for Lutzomyia longipalpis by xenodiagnosis in dogs treated for natural visceral leishmaniasis

O efeito de um protocolo quimioterápico multidrogas contra a leishmaniose visceral (LV) canina, sobre a capacidade de transmissão de Leishmania infantum ao vetor, foi analisado por meio de xenodiagnóstico. Trinta e cinco cães naturalmente infectados foram avaliados antes e durante o tratamento com a combinação de metronidazol, cetoconazol e alopurinol a cada três meses por até um ano. Em cada avaliação, os cães foram individualmente submetidos ao xenodiagnóstico e quantificação da carga parasitária por PCR quantitativa. O tratamento foi eficaz em bloquear a transmissibilidade parasitária do cão para o flebotomíneo (p= 0,011) nos cães avaliados. Houve significante correlação entre recuperação clínica e infectividade: cães com melhora clínica mais evidente apresentaram menores chances de transferir L. infantum ao Lutzomyia longipalpis via xenodiagnóstico (r=0,528, p= 0,002). Esses resultados demonstram que o tratamento canino com o protocolo proposto pode representar uma alternativa ao sacrifício de cães no Brasil como medida de controle da doença, uma vez que as drogas utilizadas não são aplicadas ao tratamento da LV humana em áreas endêmicas.(AU)

The outcome of a multidrug chemotherapeutic protocol against canine visceral leishmaniasis (VL) has been evaluated for its effect on dogs' capacity of transferring Leishmania infantum to sand flies by xenodiagnosis. Thirty-five naturally infected dogs were examined before and during treatment with a combination of metronidazole, ketoconazole, and allopurinol, at every three months up to one year. For each evaluation, treated dogs were individually submitted to xenodiagnosis and quantitative PCR to quantify parasite load in sand flies. The treatment was effective in blocking parasite transmission from host to sand flies (p=0.011) in the assessed dogs. There was a significant correlation between clinical improvement and sand fly infectivity: dogs that achieved better clinical conditions showed a lower chance of L. infantum transference to vector by xenodiagnosis (r=0.528, p=0.002). These results demonstrate that the treatment of dogs with the proposed protocol may represent an alternative to dog culling in Brazil for disease control, since these drugs are not used for treating human VL in endemic areas.(AU)

Eletrocardiografia computadorizada em cães: estudo comparativo / Computerized electrocardiography in dogs: a comparative study

Computerized electrocardiography (C-EKG) has been more frequently used in Veterinary Medicine. Many equipment models are available for this purpose. Due to possible device sensitivity and reproducibility differences during examination, the main goal of this study was to compare electrocardiographic parameters of dogs using two different C-EKG systems: Wincardio Micromed® (WIN) and TEB ECGPC® (TEB). Forty two healthy male and female dogs of different breeds (Cocker Spaniel, Dachshund, Labrador, Pinscher, Pitbull Terrier, Poodle, Schnauzer, Shih Tzu, Yorkshire and mongrel dogs), with age between 4 months and 16 years old were grouped according to weight and evaluated by both systems. The electrocardiographic measurements were performed on DII lead for both systems. The study showed that the TEB system was more sensitive for measurement of P wave and QRS complex duration, while the WIN system showed more sensitivity for the measurements of amplitude of the same parameters. The larger animals (26-37kg) showed greater variance in the measurements of P wave and QRS complex amplitude and duration than the groups of medium (14-25kg) or smaller (3-13kg) dogs. These differences must be considered when using diverse computerized electrocardiography systems to perform measurements due to the possibility of erratic interpretation of the results between veterinary medicine services.

O método de eletrocardiografia computadorizada (ECG-C) vem sendo crescentemente difundido na medicina veterinária, havendo atualmente diversas marcas e modelos de eletrocardiógrafos disponíveis no mercado. Diante da possibilidade de diferenças na sensibilidade e na reprodutibilidade das medidas obtidas nos traçados, o presente estudo teve como objetivo comparar os parâmetros eletrocardiográficos de cães, obtidos por dois sistemas. Foram avaliados dois diferentes softwares computadorizados, o Wincardio Micromed® (WIN) e o modelo TEB ECGPC® (TEB). Quarenta e dois cães hígidos, de diferentes raças (Cocker Spaniel, Daschund, Labrador, Pinscher, Pit Bull Terrier Poodle, Schnauzer, Shit Tzu, Yorkshire e sem raça definida), machos e fêmeas e com idade entre 4 meses e 16 anos foram agrupados segundo o peso e examinados pelos dois sistemas. As medidas eletrocardiográficas dos diferentes traçados foram analisadas na derivação DII. Os resultados indicaram que o sistema TEB apresentou maior sensibilidade na obtenção das medidas de duração da onda P e do complexo QRS, enquanto o sistema WIN foi mais sensível para determinar as medidas de amplitude dos mesmos parâmetros. Os animais de maior porte (26-37kg) apresentaram maior variância nas medidas de duração e amplitude de onda P e duração do complexo QRS em comparação aos cães de médio (14-25kg) e pequeno (1-13kg) porte. O achado de diferenças entre os sistemas testados deve ser levado em consideração ao se empregar os diversos equipamentos para diagnóstico por meio de ECG-C na rotina clínica, de modo a evitarem-se divergências na interpretação dos exames entre diferentes prestadores de serviços veterinários.

Teste de ELISA indireto para diagnóstico sorológico de leishmaniose visceral em canídeos silvestres / Indirect ELISA for the serological diagnosis of visceral leishmaniasis in wild canids

Na América do Sul, alguns canídeos silvestres são considerados reservatórios naturais da Leishmania chagasi. A resposta imunológica desses animais à Leishmania é pouco conhecida, havendo a necessidade de métodos diagnósticos adequados para esse fim. No presente estudo, é descrita a padronização do ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) para o diagnóstico sorológico de leishmaniose visceral em canídeos silvestres brasileiros. Foram estudadas amostras de soro e plasma de 12 canídeos cativos: sete lobos-guará (Chrysocyon brachyurus), três raposinhas (Lycalopex vetulus) e dois cachorros-do-mato (Cerdocyon thous). As amostras de um C. brachyurus e uma L. vetulus, cativos em área endêmica para LV, que apresentavam doença clínica e positividade em testes de Imunofluorescência Indireta e Reação em Cadeia de Polimerase, foram utilizadas como controles positivos. Foram comparados os conjugados anti-IgG de cão e proteína A, ambos ligados a peroxidase, cujos testes detectaram quatro (04/12) e três (03/12) C. brachyurus soropositivos para anticorpos anti-Leishmania sp., respectivamente. As médias das densidades ópticas (DOs) das amostras negativas foram nitidamente mais baixas do que as médias das DOs dos positivos tanto no ELISA com anti-IgG de cão (4,8 vezes) como com proteína A (15,5 vezes). Os soros de três C. brachyurus positivos no ELISA indireto foram avaliados por Western blotting e identificaram 22 bandas, sendo imunodominantes as de peso molecular de 19, 22, 24, 45 e 66 kDa. Os testes ELISA com a proteína A e o conjugado anti-IgG de cão apresentaram respectivamente concordância excelente (Kappa = 1; p<0,001) e moderada (Kappa = 0,8; p<0,0015), com o Western blotting. Ambos foram, portanto, considerados adequados a avaliações de triagem de animais cuja resposta humoral de anticorpos indica contato com o parasito, úteis para subsidiar estudos para adequação de metodologias específicas para os canídeos silvestres.

In South America, some wild canids are considered natural reservoirs of Leishmania chagasi. The immunological response of wild canids to Leishmania is not well understood, and the development of diagnostic methods is necessary for such purpose. In the present study, the standardization of an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the serodiagnosis of visceral leishmaniasis (VL) in Brazilian species of wild canids is described. Serum and plasma samples from 12 captive wild canids were studied: seven from maned wolves (Chrysocyon brachyurus), three from hoary foxes (Lycalopex vetulus), and two from crab-eating foxes (Cerdocyon thous). Samples from C. brachyurus and L. vetulus, both captive in an endemic area for VL, presenting clinical disease and positivity in Indirect Immunofluorescence Reaction and Polymerase Chain Reaction tests were used as positive controls. The antibody anti-dog IgG and Protein A, both conjugated with horseradish peroxidase, were compared in indirect ELISA tests which detected four (04/12) and three (03/12) seropositive C. brachyurus for anti-Leishmania antibodies, respectively. The ELISA tests were able to clearly distinguish negative from positive samples, as the mean optical density (OD) of the negative samples was 4.8 and 15.5 times lower than those of the positive ones either using anti-dog IgG and Protein A, respectively. Samples from three ELISA - positive C. brachyurus were analyzed by Western blotting and identified immunodominant bands of 19, 22, 24, 45 and 66 kDa, among 22 protein bands detected. The ELISAs with protein A and anti-dog IgG showed respectively excellent (Kappa = 1.0; p<0.001) and moderate (Kappa = 0.8; p<0.0015) agreement with the Western blotting assay. The ELISA tests showed to be adequate for screening studies to identify antibody responses, thus indicating contact with Leishmania infection by wild canids.

Primeiro relato da ocorrência de evandromyia sallesi e evandromyia cortelezzii (diptera: psychodidae) na região metropolitana de Salvador, Bahia, Brasil / First report of the occurrence of evandromyia sallesi e evandromyia cortelezzii (diptera: psychodidae) at the metropolitan area of the city of Salvador, Bahia state, Brazil / Primer reporte de ocurrencia de evandromyia sallesi y evandromyia cortelezzii (díptera Psychodidae) en la región metropolitana de la ciudad de Salvador, estado de Bahia, Brasil

Este é o primeiro relato da ocorrência de Evandromyia sallesi (Galvão e Coutinho) e Evandromyia cortelezzii (Brèthes) na região metropolitana de Salvador, Bahia. Os flebotomíneos foram capturados com armadilhas luminosas CDC, durante um estudo investigativo em 24 localidades. A vigilância entomológica foi realizada entre setembro/2009 e março/2010, sendo coletados 13 espécimes de cinco bairros diferentes e classificados dentro do gênero Evandromyia.

This is the first report of Evandromyia sallesi (Galvão e Coutinho) and Evandromyia cortelezzii (Brèthes) occurrence at the metropolitan area of Salvador, Bahia, Brazil. The sand flies were captured with CDC luminous traps, during an investigative study in 24 localities. The entomological survey was performed between September/2009 and March/2010, being thirteen specimens collected and classified into the genus Evandromyia, from five different neighborhoods.

Este es el primer relato de ocurrencia de Evandromyia sallesi (Galvão y Coutinho) y Evandromyia cortelezzii (Brèthes) en la región metropolitana de Salvador, Bahia. Los flebotominos fueron capturados con trampas de luz CDC durante un estudio de investigación en 24 localidades. El muestreo entomológico se realizó entre Septiembre/2009 y Marzo/2010, recolectando 13 ejemplares, de cinco barrios diferentes, clasificados en el género Evandromyia.

Positividade para leishmaniose visceral canina: existem fatores caninos que contribuem? / Positividad para la leishmaniasis visceral canina: ¿existen factores caninos que contribuyen? / Positivity for canine visceral leishmaniasis: are there canine factors contributing?

A leishmaniose visceral canina (LVC), doença endêmica no Litoral Norte do Estado da Bahia, vem sendo investigada em seus aspectos epidemiológicos, ambientais e sociais, buscando-se formas de minimizar a sua expansão. O presente estudo de caso-controle objetivou identificar características inerentes aos cães de área endêmica e correlacioná-las àpositividade para LVC. Foram avaliadas as fichas clínicas de 226 cães testados sorologicamente no Laboratório de Infectologia Veterinária da Universidade Federal da Bahia, por meio do teste ELISA para soropositividade para anticorpos antileishmania, nos anos de 2009 e 2010,sendo selecionados todos os casos positivos nesses dois anos, totalizando 23; foram escolhidos 27 controles negativos com base nas fichas dos animais testados sob as mesmas condições. A soropositividade foi correlacionada às variáveis sexo, idade, raça e procedência. Para a análise estatística, foi escolhido o Teste Exato de Fisher, realizado pelo software Stata versão 10, e calculados o p-valor, a odds ratio e o intervalo de confiança. Foi possível encontrar umarelação incipiente entre sexo masculino e soropositividade, bem como uma forte relação entre procedência e soropositividade para LVC. São necessários estudos com um maior número de cães, buscando-se relacionar estas características à positividade para LVC, como forma deconhecer características caninas que propiciem a infecção.

The Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) an endemic disease in the northern coast of Bahia has been investigated in its epidemiological, environmental and social aspects. The investigation seeks to find ways to minimize its spread. This study aimed to evaluate some characteristics of dogs and to correlate them to the positivity for CVL, using a casecontrolstudy. The medical records of 226 dogs tested serologically through the use of ELISA kit for CVL were evaluated at the Laboratory of Veterinary Infectious Diseases at the Federal University of Bahia, during the years 2009 and 2010.The total of positive cases were 23. There were chosen 27 dogs that had negative results based on forms of animals tested in the same conditions. Seropositivity was associated with gender, age, breed and origin. The Fisher's Exact Test was performed for statistical analysis, using the software Stata version 10.The p-value was calculated and the odds ratio and confidence intervals as well. It was possible to find evidence of association between the male sex and positivity as well as a strong association between origin and seropositivity for CVL. Larger studies with a greater number of dogs are needed to investigate the characteristics of positive animals for CVL as a way of knowing canine factors that are conducive to disease.

La leishmaniasis visceral canina (LVC), una enfermedad endémica en lacosta norte de la Bahía, ha sido investigada por sus aspectos epidemiológicos, ambientales y sociales, buscando formas que minimizen su propagación. Este estudio de caso-control tuvo como objetivo identificar características inherentes a los perros del área endémica ycorrelacionarlas con la positividad para LVC. Se evaluaron las historias clínicas de 226 perros testados serológicamente en el Laboratorio de Infectología Veterinaria de la Universidad Federal de la Bahía, por medio del test ELISA para seropositividad para anticuerpos antileishmania, en los años 2009 y 2010, siendo seleccionados todos los casos positivos en esos dos años, totalizando 23, fueron seleccionados 27 controles negativos basados en los registros de los animales testados bajo las mismas condiciones. La seropositividad fue correlacionada con las variables sexo, edad, raza y origen. Para el análisis estadísticofue elegido el Test Exacto de Fisher, realizado con el software Stata versión 10, y calculado el p-valor, la oddsratio, e el intervalo de confianza. Fue posible encontrar una incipiente relación entre el sexo masculino y seropositividad, así como, una fuerte relación entre origen y seropositividad para LVC. Se necesitan estudios con un mayor número de perros, buscando relacionar estas características con la positividad para LVC, como una manera de conocer las características caninas que propician la enfermedad

Prevalência e fatores de risco da infecção humana por Toxocara canis em Salvador, Estado da Bahia / Prevalence and risk factors of human infection by Toxocara canis in Salvador, State of Bahia, Brazil

INTRODUÇÃO: Larva migrans visceral é causada por Toxocara sp e nunca foi estudada na Bahia. Neste trabalho, investigou-se a prevalência e fatores de risco de infecção por Toxocara canis, em indivíduos de Salvador. MÉTODOS: Trezentos e trinta e oito indivíduos foram investigados para presença de anticorpos IgG séricos anti-T. canis. RESULTADOS: IgG anti-T. canis foi mais alta em indivíduos de classe social baixa com maior contato com cães e gatos, indicando que estas variáveis são fatores de risco para esta infecção. CONCLUSÕES: A prevalência de infecção por T. canis foi alta. Os fatores de risco desta infecção encontrados estão de acordo com a literatura.

INTRODUCTION: Larva migrans visceral is caused by Toxocara sp and has never been studied in Bahia. This work investigated the prevalence and risk factors for infection by Toxocara canis in individuals from Salvador, State of Bahia. METHODS: Three hundred and thirty-eight individuals were investigated for the presence of serum IgG anti-T. canis. RESULTS: IgG anti-T. canis was higher in individuals from lower social classes who had more contact with dogs and cats, indicating that these variables are factors risk for this infection. CONCLUSIONS: The prevalence of T. canis infection was high. The risk factors for this infection identified are in agreement with in the literature.

Comparison between splenic and lymph node aspirations as sampling methods for the parasitological detection of Leishmania chagasi infection in dogs

The sensitivities of spleen and lymph node cultures for the diagnosis of canine visceral leishmaniasis were compared in 64 anti-Leishmania antibody positive dogs from an endemic area in Brazil. The sensitivity of spleen cultures for Leishmania detection was 97.9 percent; in lymph node cultures it was 25 percent. Positive spleen culture was more frequent (p = 0.048, Fisher's exact probability test) in symptomatic (28 out of 33 animals) than in asymptomatic animals (19 out of 31 animals). These results support the use of spleen instead of lymph node aspiration as the choice method for the parasitological diagnosis of the infection.