Avaliação das técnicas de imunodifusão em gel de ágar, ensaio imunoenzimático indireto e reação em cadeia da polimerase no diagnóstico da brucelose ovina / Evaluation of technical, immunodiffusion agar gel, enzyme-linked immunosorbent assay and polymerase chain reaction in the diagnosis of ovine brucellosis

A brucelose na espécie ovina tem recebido destaque, uma vez que se trata de uma enfermidade que acomete o sistema reprodutivo dos animais, provocando sério comprometimento no setor produtivo. Dessa forma, objetivou-se a avaliação de três métodos para o diagnóstico da brucelose ovina: o ensaio imunoenzimático indireto (ELISAi), a técnica imunodifusão em gel de ágar (IDGA) e a reação em cadeia da polimerase (PCR). Para tanto, utilizaram-se 211 amostras de sangue de ovinos oriundos de propriedades de nove municípios da microrregião homogênea de Teresina, Piauí. As 211 amostras de sangue foram submetidas aos testes sorológicos e à PCR, visando detectar anticorpos anti-B. ovis e DNA de Brucella ovis, respectivamente. Foram obtidos resultados positivos nos testes sorológicos, sendo 36 (17,06%) positivos no teste IDGA e sete (3,31%) positivos no teste ELISAi, contudo não houve resultados positivos na técnica de PCR. Dos métodos de diagnóstico utilizados neste estudo, o teste IDGA foi o que apresentou melhor desempenho na detecção de animais reagentes, quando comparado ao teste ELISAi e à PCR em amostras de sangue, e o percentual de animais soropositivos sugere uma ampla distribuição de ovinos infectados por Brucella ovis na região em estudo, o que pode causar prejuízos aos produtores.(AU)

Brucellosis in sheep has received a major focus, since it is a disease that affects the reproductive system of animals, causing serious impairment in the productive sector. Thus, three methods for the diagnosis of ovine brucellosis were evaluated as goal, the indirect Linked Immunosorbent Assay (ELISAi) test, the Immunodiffusion Agar Gel (AGID) technique and the Polymerase Chain Reaction (PCR). Therefore, we used 211 sheep blood samples from properties of nine municipalities of the homogeneous micro-region of Teresina, Piaui. The 211 blood samples were subjected to serologic testing and PCR to detect anti-B. ovis antibodies, and Brucella ovis DNA, respectively. Positive results in serological tests were obtained, 36 (17%) positive in the AGID test and seven (3.3%) positive to the ELISAi test, however, there were no positive results in the PCR technique. Of the diagnostic methods used in this study, the AGID test was the one that presented the best performance in the detection of reactive animals, when compared to ELISAi and PCR in blood samples and, the percentage of seropositive animals suggests a wide distribution of Brucella ovis infected sheep in the study region and could cause loss to producers.(AU)

Dermatite piogranulomatosa ulcerativa em bovino por Corynebacterium pseudotuberculosis / Ulcerative pyogranulomatous dermatitis in bovine by Corynebacterium pseudotuberculosis

Relata-se um caso de lesão cutânea secundária à infecção por Corynebacterium pseudotuberculosis em bovino. Abscessos e múltiplas lesões cutâneas nodulares, variando de 8x10 para 20x25cm de diâmetro, firmes, sensíveis ao toque e sem mobilidade, algumas com superfície ulcerada, circundada por halo avermelhado e drenando secreção piossanguinolenta, e outras com superfícies alopécicas, foram identificados na região torácica lateral do animal. Exames histopatológicos e o isolamento do agente de fragmentos obtidos após remoção cirúrgica das lesões confirmaram tratar-se da forma cutânea da infecção pelo C. pseudotuberculosis. As lesões microscópicas caracterizaram-se por dermatite nodular piogranulomatosa e ulcerativa. A avaliação da susceptibilidade in vitro do C. pseudotuberculosis a antimicrobianos demonstrou que o agente era resistente à amicacina, kanamicina, neomicina e penicilina G, apresentando sensibilidade à ampicilina adicionada de subactam, amoxicilia com ácido clavulônico, cefalexina, cefalotina, cefotaxima, enrofloxacina, gentamicina e tetraciclina. A retirada cirúrgica das lesões e o tratamento com enrofloxacina resultaram na cura do animal. Lesões de pele observadas em casos de ptiose, carcinoma de células escamosas e na forma atípica da actinobacilose devem ser consideradas no diagnóstico diferencial da forma cutânea da infecção por C. pseudotuberculosis em bovinos. Os dados apresentados demonstram que a infecção pelo C. pseudotuberculosis deve ser considerada no diagnóstico diferencial das lesões de pele em bovinos no Brasil.(AU)

We report a case of secondary skin lesionby infection with Corynebacterium pseudotuberculosis in bovine. Abscesses and multiple nodular lesions, ranging from 8x10 to 20x25 cm in diameter, firm, sensitive to touch, and without mobility, some with ulcerated surface, surrounded by reddish halo and draining piosanguinolenta secretion, and other surfaces with alopecia, were identified in the skin of the animal`s thoracic area. Histopathology and isolation of the agent from fragments obtained after surgical removal of the lesions confirmed the cutaneous infection by C. pseudotuberculosis. Microscopic lesions were characterized by lumpy skin disease and ulcerative pyogranulomatous. Evaluation of in vitro susceptibility to antimicrobial demonstrated that the agent was resistant to amikacin, kanamycin, neomycin and penicillin G, and sensitive to ampicillin + subactam, amoxicilia with clavulonic acid, cephalexin, cephalothin, cefotaxime, enrofloxacin, gentamicin, and tetracycline. The surgical removal of the lesions, and treatment with enrofloxacin resulted in animal cure. Skin lesions observed in case of ptiose, squamous cell carcinoma and atypical form of Actinobacillosis should be considered in the differential diagnosis of cutaneous form of C. pseudotuberculosis infection in cattle. The data presented demonstrate that infection with C. pseudotuberculosis should be considered in the differential diagnosis of skin lesions in cattle in Brazil.(AU)

Produção e caracterização de protease fibrinolítica de Streptomyces parvulus DPUA 1573 / Production and characterization of fibrinolytic protease from Streptomyces parvulus DPUA 1573

As proteases fibrinolíticas são capazes de degradar coágulos de fibrina formados dentro dos vasos sanguíneos, evitando a trombose intravascular. Em animais, a tromboflebite, que acomete frequentemente os equinos, ocasiona, em seus casos graves, a obstrução jugular e também um edema de laringe, derivando a obstrução das vias aéreas, o que possibilita um edema cerebral, ocorrendo o óbito do animal. Devido ao fato de o tratamento ser de custo elevado, faz-se necessária a investigação de outras fontesde proteases fibrinolíticas com custos menores e com menos efeitos colaterais. Diante disso, este estudo tem como objetivo produzir e caracterizar proteases fibrinolíticas obtidas de Streptomyces parvulus DPUA 1573. Para produção da enzima, foi utilizado um planejamento fatorial 24 avaliando a concentração da farinha de soja (0,5, 1,0 e 1,5%) e da glicose (0, 0,5 e 1,0g/L), temperatura (28, 32 e 37ºC) e agitação (150, 200 e 250rpm) sobre a biomassa e a atividade fibrinolítica. Pode-se verificar que a protease fibrinolítica apresentou atividade máxima (835U/mL) nas condições de concentração de 1,5% de soja, 1g/L de glicose, 28°C e 150rpm com 48 horas de fermentação. A protease fibrinolítica obtida teve temperatura e pH ótimos de 55°C e pH 9,0, respectivamente. A atividade enzimática foi inibida pelo EDTA, pelo íon Fe2+ e pelo SDS, o que indicou a enzima ser uma metaloprotease. A linhagem Streptomyces parvulus DPUA 1573 foi capaz de produzir protease fibrinolítica, possuindo características bioquímicas favoráveis à aplicação na medicina veterinária e possivelmente humana.(AU)

Fibrinolytic proteases are able to degrade fibrin clot formed in the blood vessel, avoiding intravascular thrombosis. In animals, thrombophlebitis often affects horses, and in severe cases causes obstruction of the jugular and laryngeal edema leading to airway obstruction allowing cerebral edema resulting in the death of the animal. Since treatment is costly, the investigation of other sources of fibrinolytic proteases at lower cost and with fewer side effects is needed. Thus, this study aims to produce and characterize fibrinolytic proteases from Streptomyces parvulus DPUA 1573. For enzyme production, a factorial design was performed to evaluate 24 soybean flour concentration (0.5, 1.0 and 1.5%) and glucose (0, 0.5 and 1.0g/L), temperature (28, 32 and 37°C) and agitation (150, 200 and 250rpm) on biomass and fibrinolytic activity. Fibrinolytic protease showed maximum activity (835 U/mL) under these conditions: 1.5% soybean flour, 1g/L glucose, 28°C, and 150rpm 48 hours of fermentation. The optimal temperature was 55°C and optimal pH was 9.0. Fibrinolytic protease activity was inhibited by EDTA, the ion Fe2+, and by SDS, which indicated that the enzyme is a metallo-protease. The strain Streptomyces parvulus DPUA 1573 was able to produce fibrinolytic protease with biochemical characteristics favorable for application in veterinary and human medicine.(AU)

Influência do aquecimento artificial de ovos de matrizes pesadas sobre o rendimento de incubação / Influence of artificial heating on hatchability of broiler breeder eggs

O desenvolvimento embrionário nas aves tem início antes mesmo da postura. A variabilidade do estágio de desenvolvimento embrionário no momento da oviposição é conhecida e influencia a taxa de eclosão, uma vez que estágios muito avançados ou muito precoces são prejudiciais por tornarem os embriões mais sensíveis ao estresse do armazenamento. O aquecimento de ovos férteis no período entre a postura e o armazenamento vem sendo estudado como forma de reduzir os efeitos negativos do armazenamento sobre o rendimento de incubação por permitir que os embriões progridam até um estágio em que são mais aptos a suportar o estresse do armazenamento. Este experimento teve como objetivo avaliar os efeitos do aquecimento artificial de ovos de matrizes pesadas no período entre a coleta e o armazenamento sobre o rendimento de incubação e o peso do pinto ao nascimento. Foram utilizados 5.760 ovos de matrizes pesadas Cobb(r) com 57 semanas de idade. O delineamento experimental foi inteiramente ao acaso, constituído por quatro tratamentos definidos com base no tempo de aquecimento dos ovos (zero, três, seis e nove horas). O aquecimento foi feito em câmara de fumigação a 30°C, e os ovos foram armazenados por três dias. O aquecimento artificial no período entre a coleta e o armazenamento não influenciou a eclodibilidade, a mortalidade embrionária e o peso do pinto ao nascimento, tendo sido, nessas circunstâncias, uma prática injustificada...

In birds, embryonic development begins before laying. The embryonic development variability at the time of egg laying is known and influences hatching rate, since very early or advanced stages are detrimental for embryos because they become more sensitive to stress storage. The heating of fertile eggs in the period between posture and storage has been studied as a way to reduce the negative effects of storage on hatchability since it allows embryos to progress to a stage where they are more able to survive during storage. This experiment aimed to evaluate the effects of artificial heating of fertile broiler breeder eggs in the period between the collection and storage on hatchability and chick weight at birth. For this, 5760 eggs from Cobb(r) broiler breeders, 57 weeks old, were used. The experimental design was completely randomized. It consisted of four defined treatments based on the heating time of eggs (zero, three, six and nine hours). Heating was done in a fumigation chamber at 30°C, and eggs were stored for three days. The artificial heating in the period between collection and storage didn't affect hatchability, embryo mortality and chick weight at birth, being, in this case, an unjustified practice...

Avaliação da atividade cicatrizante do óleo de pequi (Caryocar coriaceum Wittm) em feridas cutâneas produzidas experimentalmente em ratos / Evaluation of the healing activity of pequi (Caryocar coriaceum Wittm) oil in cutaneous wounds induced experimentally in rats

O objetivo deste estudo foi demonstrar os efeitos do tratamento tópico do creme à base de óleo de pequi (Caryocar coriaceum Wittm) utilizando 40 ratos (Rattus norvegicus albinus) da linhagem Wistar, machos, com 60 dias de idade. Esses foram divididos em dois grupos: I) composto por 20 ratos com feridas cutâneas tratados com aplicação tópica do creme base com 10% de óleo de pequi; II) com o mesmo número de animais que receberam a aplicação tópica do creme base sem o óleo de pequi. Após antissepsia e anestesia local foi produzida cirurgicamente ferida circular de 1 cm de diâmetro na região dorso lombar. As lesões cutâneas foram avaliadas sob o aspecto clínico, morfométrica e histológico no 3o, 7o, 14o e 21o dias pós-operatório. No grupo tratado com creme à base de óleo de pequi houve aceleração na evolução do processo cicatricial. As feridas dos animais desse grupo apresentaram redução significativa a partir do décimo quarto dia pós-operatório, bem como foram verificados nesse período achados histológicos característicos da etapa final do processo de cicatrização tais como: acentuada quantidade de fibroblastos, fibras colágenas e completo processo de reepitelização, enquanto que as feridas do grupo controle necessitaram de mais tempo para resolução do processo cicatricial.

The main objective of this study was to demonstrate the effects of topical treatment with ointment containing pequi oil (Caryocar coriaceum Wittm), using 40 male 60-day-old mice (Rattus norvegicus albinus) from the Wistar line. These were divided into two groups: I) composed by 20 mice with cutaneous wounds treated by topical application of the ointment based on 10% pequi oil; II) the same number of mice, receiving the topical application of ointment without pequi oil. After antisepsis and local anesthesia, round 1-cm-diameter wounds were made on the lower back region. The wounds were evaluated in regard to clinical, morphometric and histological aspects on the 3rd, 7th, 14th and 21st postoperative days. The group treated with the pequi ointment presented acceleration in the healing process. The animals' wounds of this group showed a meaningful reduction from the 14th postoperative day, when histological characteristics from the ending of the healing process were noted, such as a large amount of fibroblasts, collagen fibers and a complete process of reepithelialization, while the wounds of the control group needed more time for the healing process.

Avaliação da atividade cicatrizante do jucá (Caesalpinia ferrea Mart. ex Tul. var. ferrea) em lesões cutâneas de caprinos / Evaluation of the Brazilian ironwood (Caesalpinia ferrea Mart. ex Tul. var. ferrea) healing activity on cutaneous lesions of goats

O objetivo deste estudo foi demonstrar os efeitos do tratamento tópico do jucá (Caesalpinia ferrea) em feridas cutâneas. Quinze caprinos machos sem raça definida foram divididos em 3 grupos de acordo com o pós-cirúrgico (7º, 14º e 21º dias). As feridas experimentais foram tratadas com a pomada composta pela casca da Caesalpinia ferrea em pó misturada com a vaselina estéril e as do grupo controle apenas com a vaselina esterilizada. A aplicação diária da pomada e da vaselina estéril foi realizada sobre ferida circular padronizada de 16 cm² de área na região torácica de cada animal. As avaliações das feridas foram feitas do ponto de vista clínico, bacteriológico, morfométrico e histopatológico nos períodos pré-determinados (7º, 14º e 21º dias). Morfometricamente, as feridas do controle apresentaram áreas cirúrgicas menores e grau de contração maior que as do grupo tratado, entretanto, histologicamente, houve completa epitelização das feridas tratadas no 21º dia, enquanto que as feridas do grupo controle necessitavam de mais tempo para resolução do processo cicatricial. No exame microbiológico realizado no momento da produção da ferida, não se observou crescimento bacteriano e no momento das biópsias, identificou-se a presença de bactérias da família Enterobacteriaceae e Staphylococcus aureus, sendo que a partir do 14º dia observou-se Staphylococcus aureus apenas no grupo controle. A utilização tópica da pomada de Caesalpinia ferrea apresentou eficiência significativa no auxílio da reparação cicatricial de feridas cutâneas de caprinos.

The aim of this study was to demonstrate the effects of the topical treatment with Brazilian ironwood (Caesalpinia ferrea) on cutaneous wounds. Fifteen male mongrel goats were divided into 3 groups according to the postoperative period ((7th, 14th and 21st days). The experimental wounds were treated with an ointment composed of Brazilian wood powder bark mixed with sterile vaseline, whereas controls were only treated with sterile Vaseline. The ointment and the sterile vaselin were daily applied on a standardized circular wound (16 cm² area) in the thoracic region of each animal. Clinical, bacteriological, morphometric and histopathological evaluations were performed in the wounds at predetermined periods (7th, 14th and 21st postoperative days). Morphometrically, control wounds had smaller surgical areas and greater degree of contraction than those from the treated group. However, histologically, there was a complete epithelialization of the treated wounds on the 21st day, whereas control wounds required longer time for healing. In the microbiological evaluation performed at the moment of wound production, there was no bacterial growth. During biopsies, Enterobacteriaceae bacteria and Staphylococcus aureus were identified; from the 14th day, the latter was only observed in the control group. The topical use of Caesalpinia ferrea ointment was significantly efficient to help healing cutaneous wounds in goats.

Desenvolvimento pós-natal e potencial teratogênico da prole de ratos Wistar no estudo da toxicidade reprodutiva de duas preparações fitoterápicas contendo soja Glycine max (L) Merr / Neonatal development and teratogenic potential of Wistar rats offspring in the study of reproductive toxicity of two commercial phytotherapic preparations with soy Glycine max (L) Merr

Avaliou-se o efeito de duas preparações fitoterápicas comerciais que continham soja sobre o desenvolvimento geral e sexual da progênie de ratos Wistar e sobre o potencial teratogênico das preparações fitoterápicas durante um estudo de toxicidade reprodutiva. Para tanto, observaram-se, diariamente, as características de desenvolvimento dos filhotes e analisou-se o comportamento em campo aberto, e, para avaliar o potencial teratogênico, realizou-se diafanização dos fetos removidos por cesariana. Inferiu-se que o tratamento dos pais não comprometeu o desenvolvimento de sua progênie e também não determinou efeitos teratogênicos aos fetos de ratos Wistar.

The effect of two commercial phytotherapic preparations containing soy was evaluated on the general and sexual development of Wistar rats offspring and on the teratogenic potential during a reproductive toxicity study. For this, the offspring development characteristics were daily observed, and the behavior in open field was studied. To assess the teratogenic potential, diaphanization of the fetuses removed by caesarean section was done. It was concluded that the treatment of the parents did not compromise the development of their progeny and also did not determine the teratogenic effects in the fetuses.

Apoptose e expressão de VP2 e GAPDH na infecção precoce pelo vírus da doença infecciosa da bursa de Fabricius em pintos SPF / Apoptosis and expression of VP2 and GADPH in an experimental infectious bursal disease in SPF chicks

Vinte e nove pintos SPF de um dia foram inoculados com o vírus da doença infecciosa da bursa de Fabricius (VDIB) para avaliar a ocorrência precoce de apoptose e a expressão da proteína viral 2 (VP2) e da enzima gliceraldeído fosfato dehidrogenase (GAPDH). Os animais foram distribuídos em cinco grupos: 1-controle; e 2 a 5- com 24, 48, 72 e 96 horas pós-inoculação, respectivamente. Fragmentos da bursa de Fabricius foram colhidos para processamento histológico e extração de RNA. Lâminas coradas em HE e TUNEL (marcação in situ da fragmentação do genoma com transferase terminal de deoxinucleotídeo) foram utilizadas na morfometria do índice apoptótico. Amostras de mRNA foram testadas para a expressão dos genes VP2 e GAPDH utilizando-se transcrição reversa e RT-PCR. Utilizou-se um kit SYBR GREEN PCR, e a reação foi desenvolvida em ABI Prism 7000 SDS. Os índices apoptóticos cresceram progressivamente indicando uma relação na atrofia bursal causada pelo VDIB. Paralelamente, os resultados da PCR em tempo real demonstraram queda da carga viral nas células linfóides da bursa nos diferentes intervalos de tempo do experimento. Esses resultados sugerem um papel protetor da apoptose na diminuição da replicação viral.

Twenty-nine SPF 1-day-old chicks were inoculated with infectious bursal disease virus (IBDV) to evaluate early apoptosis and the expression of viral protein 2 (VP2) and glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenease (GAPDH). Five groups were formed: G1-control -and G2 to G5, - 24, 48, 72 and 96 hours post inoculation, respectively. Half of each BF was fixed and processed by routine techniques. To quantify apoptosis, 5µm-thick sections were stained with HE and submitted to TUNEL (terminal transferase UDP nick end labeling) technique. mRNA was extracted from pooled samples of 3 animals/group and used for the expression of VP2 and GADPH genes using the reverse transcription and real-time polymerase chain reaction (RT-PCR). A SYBR GREEN PCR kit was used and the reaction was carried out in an ABI Prism 7000 SDS. Apoptotic indexes progressively increased indicating a role of IBDV in inducing hypotrophy of the BF. Also, it was showed that as long as apoptosis increased, viral protein expression decreased, which suggests that apoptosis plays a role as a defense mechanism against viral replication.

Phylogeography of Brachyplatystoma rousseauxii (Siluriformes - Pimelodidae) in the Amazon Basin offers preliminary evidence for the first case of [quot ]homing[quot ] for an Amazonian migratory catfish

The large pimelodid, Brachyplatystoma rousseauxii, is one of the two most important catfish species for the fisheries in the Amazon. It is captured by commercial and artisanal fishing fleets in at least five Amazonian countries, at fishing grounds more than 5000 km apart. Current evidence suggests a complex life cycle that includes the longest reproductive migration known for a freshwater fish species. Experimental fisheries have pointed to a decrease in yield in the Western Amazon. However, reliable information about the capture and status of this fishery resource is still nonexistent, and no study has ever addressed its genetic diversity. We sequenced the entire D-loop of 45 individuals of B. rousseauxii, fifteen from each of three different fishing locations along the main channel of the Solimoes-Amazonas System covering a distance of around 2200 km. Results of phylogenetic analyses, molecular diversity estimations, analysis of molecular variance, and nested clade analysis, together show that there is no genetic segregation associated with location in the main channel, as one would expect for a migratory species. However, the significant decrease found in genetic diversity towards the western part of the Amazon could be explained by a non-random choice of tributary to spawn. It is possible that the genetic diversity of the migrating schools decreases towards the west because portions of the species' genetic diversity are being [quot ]captured[quot ] by the different effluents, as the fish migrates to spawn in the headwaters. Like the salmon in North America, B. rousseauxii may be returning to their home tributary to spawn.

Expressão gênica de caspases 3 e 8 em timo e baço de ratas recém-desmamadas e imunossuprimidas por glicocorticóide / Genic expression of caspases 3 and 8 in thymus and spleen of glicocorticoid-immunossupressed weaned rats

Determinou-se a expressão gênica das caspases 3 e 8 mediante transcrição reversa de mRNA total e reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) para avaliar a apoptose em timo e baço de ratas imunossuprimidas por glicocorticóides. Utilizou-se dexametasona para indução da apoptose e atrofia linfóide. Quarenta e cinco fêmeas Wistar recém-desmamadas foram separadas em três grupos: as ratas de A (n=18) e B (n=18) foram tratadas com 250 e 500mg de glicocorticóide, via intramuscular, respectivamente, e as do C (n=9) não foram tratadas. Após 24, 48 e 72 horas, seis animais de cada grupo tratado e três do controle foram anestesiados, pesados e sacrificados. O baço e o timo foram coletados e pesados. Fragmentos dos órgãos foram fixados em formol tamponado a 10 por cento e processados segundo técnica para inclusão em parafina. Os blocos foram seccionados em 5æm, e os cortes corados em hematoxilina e eosina. A análise histopatológica aliada ao peso dos órgãos nas diferentes doses e tempos demonstrou que a dexametasona induziu hipotrofia linfóide, que ocorreu com maior intensidade no tempo de 72 horas em animais do grupo B. Fragmentos de timo e de baço foram imediatamente congelados em nitrogênio líquido para extração de mRNA e DNA. Para a padronização da técnica de RT-PCR, utilizaram-se pool de amostras de mRNA dos animais-controle e pool de mRNA de animais tratados em cada tempo de experimento. A técnica de RT-PCR foi sensível o suficiente para a detecção dos mRNAs que codificam as caspases 3 e 8, e ambas participaram do processo de apoptose induzido por dexametasona.

Identification of Chromobacterium violaceum genes with potential biotechnological application in environmental detoxification

Chromobacterium violaceum is a Gram-negative bacterium found in a wide variety of tropical and subtropical ecosystems. The complete genome sequence of C. violaceum ATCC 12472 is now available, and it has considerable biotechnological potential for various applications, such as environmental detoxification, as well as medical and agricultural use. We examined the biotechnological potential of C. violaceum for environmental detoxification. Three operons, comprising the ars operon, involved in arsenic resistance, the cyn operon, involved in cyanate detoxification, and the hcn operon, encoding a cyanase, responsible for biogenic production of cyanide, as well as an open reading frame, encoding an acid dehalogenase, were analyzed in detail. Probable catalytic mechanisms for the enzymes were determined, based on amino acid sequence comparisons and on published structural information for these types of proteins

Pro domain peptide of HGCP-Iv cysteine proteinase inhibits nematode cysteine proteinases

Cysteine proteinases (CPs) are synthesized as zymogens and converted to mature proteinase forms by proteolytic cleavage and release of their pro domain peptides. A cDNA encoding a papain-like CP, called hgcp-Iv, was isolated from a Heterodera glycines J2 cDNA library, expressed and utilized to assess the ability of its propeptide to inhibit proteinase in its active form. The hgcp-Iv cDNA sequence encodes a polypeptide of 374 amino acids with the same domain organization as other cathepsin L-like CPs, including a hydrophobic signal sequence and a pro domain region. HGCP-Iv, produced in Escherichia coli as a fusion protein with thioredoxin, degrades the synthetic peptide benzyloxycarbonyl-Phe-Arg-7-amido-4-methylcoumarin and is inhibited by E-64, a substrate and inhibitor commonly used for functional characterization of CPs. Recombinant propeptides of HGCP-Iv, expressed in E. coli, presented high inhibitory activity in vitro towards its cognate enzyme and proteinase activity of Meloidogyne incognita females, suggesting its usefulness in inhibiting nematode CPs in biological systems. Cysteine proteinases from other species produced no noticeable activity.