ABSTRACT
Sperm from rat cauda epididymis was washed, sonicated and centrifuged to obtain fractions sedimenting at 600 x g for 5 min, 27.000 x g for 5 min, and 100.000 x g for 40 min. All fractions were observed with the electron microscopy and assayed for cytochrome c oxidase activity. The 100.000 x g fraction contained only small membranous vesicles and less than 0.5 of the total enzymatic activity. This fraction was considered to represent sperm plasmalemma and it was extracted with Tris-HCl buffer before treating it with one of the following chemicals: acetate buffer, pH: 4.5; 0.6 M KCl; bicarbonate buffer, pH 11.0; Triton X-100, and Sodium Dodecyl Sulfate (SDS). After centrifuging, the residual sediments were solubilized in hot 2 SDS. The extracts and the solubilized sediments (hot SDS) were analyzed in SDS-PAGE. The extracts obtained with the first three chemicals contained 11,9, and 25 of total proteins respectively. The bicarbonate buffer solubilized 45, and the detergents 55 and 65 respectively. A total of 30 bands were seen in the extracts and sediments. Acid pH extracted a low number of bands of high mobility and low molecular weight. Instead, the KCl and bicarbonate buffer, extracted a great number of bands over a wide range of molecular weights (23, 38.5, 55, 100, and 140 KD). The detergents had similar effects: both solubilized four new bands. In residual sediments there were no new proteins and the bands corresponded to those extracted with the detergents, but they varied in staining intensity. According to the results obtained with the mild chaotropic agents of 0.6 M KCl and bicarbonate buffer, 50 of the mass of membraneous proteins may be peripheric. Proteins partially extracted with the detergents were also found in the residual sediment, and they may constitute the skeleton of sperm membrane.
Subject(s)
Animals , Male , Rats , Membrane Proteins/isolation & purification , Spermatozoa , Buffers , Cell Membrane , Detergents , Electrophoresis, Polyacrylamide Gel , Microscopy, Electron , SpermatozoaABSTRACT
El análisis morfométrico aplicado a fibras preterminales de cerebro y a células de Sertoli de testículo del sapo Bufo arenarum mostraron que los microtúbos desaparecen en un 75% y 92% respectivamente cuando los animales son enfriados a 1-2-C por 90 minuots. Las estimaciones hechas en cuerpos neuronales de cerebro y en otras células del testículo mostraron los mismos resultados. Trabajos previos de los autores (López y Bertini, 1982) mostraron que el grado de polimerización de tubulina (porcentaje de tubulina insoluble) en sapos enfriados, solo decreció en un 40%. Se postula que el elevado porcentaje de tubulina insolubre en animales enfriados es decreció en un 40%. Se postula que el elevado porcentaje de tubulina insoluble en animales enfriados es debido a la existencia de un pool de tubulina no estructurada en microtúbulos, unida a estructuras membranosas en sitios de alta afinidad y/o a oligómeros de tubulina no reconocible como microtúbulos por microscopía electrónica
Subject(s)
Animals , Male , Cold Temperature/adverse effects , Microtubules/ultrastructure , Tubulina/metabolism , Cerebrum/ultrastructure , Testis/ultrastructureABSTRACT
Se estudió el consumo de oxígeno y las actividads de cuatro hidrolasas ácidas y de citocromo c oxidasa en el hígado de ratones a distintas edades desde el feto al adulto. Se observó que las actividads lisosomales no cambiaban mucho durante los últimos días de vida fetal, pero que rápidamente aumentaban después del nacimiento. Las actividads hidrolíticas alcanzaron un máximo en la segunda semana de vida, mientras que la actividad de citocromo c oxidasa y el consumo de oxígeno lo hicieron recién en la tercera semana. Esterasa y lipasa presentaron un segundo aumento luego del destete. La actividad de estas dos enzimas fue además diferente en ratones mantenidos en vida intrauterina por tratamiento con progesterona de las madres que en ratones nacidos utilizados como controles, mientras que la acitividad de arilsulfatasa y de fosfatasa ácida fue semejante en ambas condiciones. Nuestros resultados y las observaciones morfológicas de otros autores sugieren que los cambios de actividad hidrolítica observados en los últimos días de vida fetal reflejan principalmente alteraciones en las poblaciones celulares del hígado, mientras que los incrementos de actividad después del nacimiento representan el proceso de maduración de los hepatocitos y de las células de Kupffer. Las alteraciones en la dieta producidas por el destete y por la falta de amamantamiento en la experiencia de prolongación de la vida intrauterina pueden ser la causa de las variaciones observadas en estas condiciones en las actividads de lipasa y esterasa