Imunoensaios: uma alternativa para a detecção de fungos toxigênicos em alimentos / alimentosImmunoassays: an alternative for toxigenicfungi detection in foods

O monitoramento constante da contaminação fúngica é imprescindível para assegurar a qualidade e segurança dos alimentos, reduzindo as perdas econômicas, assim como os riscos à saúde humana e animal. Os métodos tradicionais de identificação e detecção de fungos (cultivo em diversos meios, exame microscópico e análises bioquímicas) geralmente consomem muito tempo e exigem pessoal com experiência. Os imunoensaios, particularmente os ensaios imunoenzimáticos, constituem uma alternativa promissora aos métodos tradicionais devido à alta sensibilidade, especificidade, reprodutibilidade e potencial como método rápido de controle de qualidade. Dentre os ensaios imunoenzimáticos, aqueles baseados em exoantígenos são os mais empregados na resolução de problemas taxonômicos, detecção e identificação de fungos toxigênicos. Nesta revisão serão abordados conceitos básicos de imunoensaios, métodos de detecção de fungos, assim como diversos ensaios imunoenzimáticos para a detecção de fungos toxigênicos em alimentos.

Constant monitoring of mould contamination is essential in order to assure the food quality and safetyand reduce the economic losses, as well as to minimize the potential hazards to human and animal health.The traditional methods for mould identification and detection (culture in several media, microscopicexamination and chemical analysis) are usually time-consuming and require trained staff. Immunoassays,particularly enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) could be a promising alternative to the traditionalmethods due to high sensitivity, specificity, reproducibility and potential for use in rapid quality control.Among ELISAs, those based on exoantigens are the most employed in the resolution of taxonomicproblems, detection and identification of toxigenic fungi. This review discusses the basic principles ofimmunoassays, methods of mould detection and the several ELISAs developed for toxigenic fungidetection in food

Produção e caracterização de exoantígenos de Fusarium verticillioides / Production and characterization of Fusarium verticillioides exoantigens

Fusarium verticillioides Sacc. Niremberg (=F. moniliforme Sheldon) é um patógeno primário de milho e principal produtor de fumonisinas. Este fungo pode causar perdas econômicas significativas para produtores e processadores de grãos, criadores de animais, além de representar sérios riscos á saúde humana e animal. Diversos métodos para a detecção de fungos têm sido utilizados, porém a maioria demanda tempo e pessoal treinado. Por outro lado, os métodos imunológicos, particularmente os ensaios imunoenzimáticos, apresentam diversas vantagens para o emprego rápido em controle de qualidade. Neste trabalho, foram obtidos exoantígenos de 8 isolados de F. verticillioides para a produção de anticorpos policlonais. O perfil eletroforético dos antígenos apresentou bandas com massas moleculares aparentes variando entre 17 e 170 kDa. Os antígenos de 3 isolados (97K, 113F e 162A), tendo como base a concentração de proteínas e número de bandas, foram escolhidos para a produção de anticorpos policlonais. O soro imune anti-97K, com maior título no ELISA indireto (1:12.800), apresenta potencial para a imunodetecção de Fusarium verticillioides.

Fusarium verticillioides Sacc. Niremberg (=F. moniliforme Sheldon) is a primary corn pathogen and themain fumonisin producer. This fungus can cause significant economical losses for the farmers, grainprocessors, animal producers and risk for human and animal health. Several methods for mould detectionhave been used, however most of these are time-consuming and require trained staff. Otherwise,immunoassays (particularly enzyme-linked immunosorbent assay, or ELISA) provide several advantagesand potential for use in rapid quality control. In this work exoantigens from eight F. verticillioidesisolates were obtained for further production of polyclonal antibodies. The electrophoretic profile ofthese antigens showed protein bands with molecular mass ranging from 17 to 170 kDa. The antigens from3 isolates (97K, 113F and 162A) were selected for polyclonal antibodies production, based on proteinconcentration and number of bands. Antiserum against F. verticillioides 97K exoantigens, which showed thehighest titre in indirect ELISA (1:12.800), has potential for the immunodetection of F. verticillioides

Fumonisins in corn: correlation with Fusarium sp. count, damaged kernels, protein and lipid content

A contaminação natural por fungos e fumonisinas foi avaliada em 109 amostras de milho recém-colhido do Estado do Paraná e correlacionada com grãos ardidos (%). Além disso, grãos sadios e ardidos de 24 amostras de milho foram selecionados a fim de comparar o perfil da microbiota fúngica e níveis de fumonisinas. A correlação entre os teores de proteínas/lipídios e os níveis de fumonisinas também foi analisada nos 15 híbridos de milho mais freqüentemente cultivados no Estado do Paraná. A contagem total de fungos em 109 amostras de milho recém-colhido variou de 1,9x104 a 3,5x106 UFC/g, Fusarium sp. de 1,0x103 a 2,2x106 UFC/g e, níveis de fumonisinas de 0,13 a 20,38 µg/g. A contagem total de fungos/Fusarium spp. e níveis de fumonisinas apresentaram correlação positiva (p<0,05). Adicionalmente, houve uma correlação positiva entre grãos ardidos (%) e a contagem total de fungos/ Fusarium spp. (p < 0,05). Os níveis de fumonisinas nos grãos sadios variaram de 0,57 a 20,38 µg/g, enquanto que nos grãos ardidos variaram de 68,96 a 336,38 µg/g. Não foi observada correlação significativa entre os níveis de fumonisinas e os teores de proteínas/lipídios. Esses resultados ratificam a importância do monitoramento constante da contaminação por fungos toxigênicos e fumonisinas em milho e derivados a fim de garantir a qualidade e segurança dos produtos e minimizar o risco potencial à saúde humana e animal.