Ovine epididymal spermatozoa preservation in liquid state with or without seminal plasma epididimários ovinos / Preservação em estado líquido, com ou sem plasma seminal, de espermatozóides epididimários ovinos

ABSTRACT: Preservation and use of spermatozoa that have been recovered after death can extend the use of genetically superior animals. The objective of this study was to evaluate the maximum period for which ovine spermatozoa could be successfully stored in refrigerated dilution medium post-mortem, with or without added seminal plasma. Three samples of spermatozoa collected in an artificial vagina from 10 rams, or from the tails of four epididymes from the same rams at the time of death (G0) and six (G6), twelve (G12), twenty-four (G24) and forty-eight (G48) hours after death were used. After recovery, the spermatozoa were refrigerated at 5°C in either control medium (CM) or control medium plus 20%homologous seminal plasma (SP) and evaluated for 72 hours from the start of refrigeration. The G48 samples had a lower(P <0.05) total motility (TM) and plasma membrane integrity in the hyposmotic test (HOST) than the other groups evaluated at all analyzed times. The TM decreased (P <0.05) after 24 hours of cooling in semen collected in AV, at G0 and G24 and after 48 hours of refrigeration in G6 and G12. The TM and HOST integrity and sperm morphology did not differ between samples refrigerated in CM or SP. In conclusion, it is possible to collect epididymal spermatozoa up to 24 hours after death. Sperm viability can be prolonged fora further 48 hours by refrigeration. However, total motility decreases from 24 hours after refrigeration and the supplementation of 20% seminal plasma to the extender has no effect on spermatozoa longevity.

RESUMO: A recuperação e preservação dos espermatozoides após a morte possibilita maior aproveitamento de animais geneticamente superiores. O objetivo deste trabalho foi avaliar o período máximo após a morte do carneiro para que os espermatozoides possam ser refrigerados em meio diluidor com ou sem plasma seminal. Foram utilizadas três amostras de espermatozoides colhidos em vagina artificial (AV) de 10 carneiros ou da cauda de quatro epidídimos provenientes dos mesmos carneiros no momento da morte (G0) e seis (G6), doze (G12), vinte e quatro (G24) e quarenta e oito (G48) horas após a morte. Após a recuperação os espermatozoides (em AV ou cauda do epidídimo) foram refrigerados à 5°C em dois tratamentos: meio controle (CM) ou meio controle acrescido de 20% de plasma seminal homólogo (SP) e avaliados até 72 horas após o início da refrigeração. As amostras do G48 apresentaram motilidade total (TM) e integridade de membrana plasmática no teste hiposmótico (HOST) menor (P<0,05) que os outros grupos avaliados em todos os momentos estudados. TM diminuiu (P<0,05) após 24 horas de refrigeração no sêmen colhido em AV, no G0 e G24 e a partir de 48 horas de refrigeração no G6 e G12. A TM, integridade de membrana no HOST e morfologia espermática não diferiram entre as amostras refrigeradas em CM ou SP. Contudo, é possível refrigerar espermatozoides epididimários até 24 horas post mortem, a refrigeração prolonga a viabilidade espermática até 48 horas após o início da refrigeração. A adição de 20% de plasma seminal ao meio diluidor não tem efeito sobre a longevidade espermática.

Utilização do choque osmótico na avaliação da viabilidade de sêmen criopreservado de ovinos / Utilization of the osmotic shock to assess the frozen ram semen viability

This study evaluated the use of hipoosmotic swelling test (HOST) with deionized water (0 mOsmol), as a method of post thaw ram semen evaluation and correlate their findings with different techniques of semen evaluation. Therefore, twenty semen samples of 20 different adult rams were assessed as for kinetic sperm parameters through computerized system (IVOS 12, Hamiton Thorn Biosciences, Beverly, MA, EUA) and subjective analysis. The sperm membranes viability was carried out by the association of fluorescent probes (propidium iodide, JC-1 and FITC-PSA). The structural integrity of the plasma membrane was also studied through supravital test with eosin and the functional integrity of membrane evaluated by doing the hipoosmotic swelling test with deionized water (0 mOsmol), in the following proportions: One part of semen for 10 (HOST 10), 50 (HOST 50) and 100 (HOST 100) parts of water. After semen dilution in the different proportions it was fixed in formalin-buffered saline and analyzed with regard to percentage of HOST reactive sperm (bent/coiled). The percentage of reaction obtained for HOST 10 (33,1%); HOST 50 (32,8%) and HOST 100 (31,8%) did not differ significantly. HOST 10 presented positive correlation with the plasma membrane integrity by the EOS (r = 0,80; p 0,05). Positive correlations between HOST 50 and HOST 100 with sperm subpopulation with membrane integrity by fluorescence were observed (r = 0,83 and r = 0,85; p 0,01). The findings suggest that the HOST with deionized water can provide additional information for post thawing ram sperm viability evaluation.

O presente trabalho analisou o emprego do choque osmótico (HOST) com o uso da água deionizada (0 mOsmol), como método de avaliação do sêmen ovino descongelado e correlacionou os resultado obtidos com aqueles encontrados em diferentes técnicas de avaliação de sêmen. Para tanto, vinte amostras de sêmen criopreservado (20 reprodutores), foram avaliadas quanto aos parâmetros de cinética espermática pelo sistema computadorizado (IVOS 12, Hamilton Thorne Biosciences, Beverly, MA, EUA) e análise subjetiva. A análise da viabilidade das membranas espermáticas foi efetuada com a associação de sondas fluorescentes (PI, JC-1 e FITC-PSA). A integridade estrutural da membrana plasmática foi estudada com o teste supravital com eosina (EOS) e, por fim, a integridade funcional da membrana foi avaliada pelo choque osmótico, com a utilização da água deionizada nas seguintes proporções: uma parte de sêmen para 10 (HOST 10), 50 (HOST 50) e para 100 (HOST 100) partes de água. Após a diluição do sêmen, nas diferentes proporções, as amostras foram analisadas quanto ao percentual de espermatozoides reativos ao HOST. Os valores de positividade obtidos para o HOST 10 (33,1%), HOST 50 (32,8%) e HOST 100 (31,8%) não diferiram significativamente. O HOST 10 apresentou importante correlação positiva com a integridade da membrana plasmática pela EOS (r = 0,8; p 0,05). Os HOST 50 e 100 demonstraram correlações positivas com subpopulações espermáticas com membrana plasmática íntegra pela fluorescência (r = 0,83 e r = 0,85; p 0,01). Os resultados obtidos revelaram que o HOST com água deionizada pode fornecer informações complementares para a avaliação da viabilidade do sêmen ovino pós-descongelação.

Rapid serum agglutination and agar gel immunodiffusion tests associated to clinical signs in rams experimentally infected with Brucella ovis / Teste de soro aglutinação rápida e do teste de imunodifusão em gel de ágar associados aos sinais clínicos em carneiros infectados experimentalmente com Brucella ovis

The purpose of this study was to evaluate the agar gel immunodiffusion and the rapid serum agglutination tests associated to clinical signs in rams experimentally infected with Brucella ovis. The serological profile during the 12 months of infection showed a large fluctuation of antibodies that favors the failure in the diagnostic. The evaluation of tests after the experimental infection allowed to suggest that none of the tests were able to detect the infection throughout the period of study. The study reinforces the importance of considering the clinical signs to support the diagnosis of Brucella ovis infection in rams.

O objetivo deste estudo foi avaliar o uso do teste de imunodifusão em gel de ágar e o teste sorológico de aglutinação rápida comparados aos sinais clínicos em carneiros infectados experimentalmente com Brucella ovis para o diagnóstico confirmatório da brucelose ovina. O perfil sorológico durante os 12 meses pós-infecção mostrou flutuação da resposta por anticorpos, que favorece a falha no diagnóstico. A avaliação dos testes indicou que nenhum dos testes foi capaz de detectar a infecção durante todo o período de estudo. O estudo ressalta a importância de considerar os sinais clínicos para apoiar o diagnóstico confirmatório da infecção por Brucella ovis em carneiros.

Características biológicas e congelabilidade do sêmen de carneiros Ideal-Polwarth ao longo do ano / Biological characteristics and freezability of Ideal-Polwarth rams throughout the year

Com o objetivo de investigar a qualidade seminal ao longo do ano, bem como sua congelabilidade e manutenção da viabilidade in vitro pós-descongelamento, neste mesmo período, o sêmen de cinco carneiros Ideal-Polwarth foi colhido, avaliado em suas características biológicas e congelado mensalmente, durante um ano, usando-se o diluente glicina-gema. Cerca de 30 dias após cada congelamento, submeteram-se as amostras ao Teste de Termorresistência, avaliando-se a motilidade, o vigor e a morfologia das células espermáticas. Os resultados obtidos com sêmen fresco (pré-congelamento) e com sêmen congelado/descongelado foram analisados de acordo com as colheitas mensais e, também, agrupados em dois períodos: período I, inverno e outono secos, e período II, primavera e verão chuvosos, utilizando-se a análise de variância com quadrados mínimos e o Teste de Tukey. Os resultados não mostraram influência de meses do ano ou de épocas I e II sobre as características biológicas do sêmen fresco ou sua congelabilidade. Conclui-se que, na latitude de 22º 51ÆS, o sêmen de carneiros da raça Ideal-Polwarth pode ser congelado em qualquer período do ano, com alta qualidade.

Substituiçäo do amarelo metacromo pelo rosa bengala no método de coloraçäo para a avaliaçäo da morfologia espermática de sêmen descongelado / Substitution of the metachrome yellow by rose bengal in the staining method for the spermatic morphology evaluation of thawed semen

O presente trabalho deve como objetivo testar uma alternativa para a avaliaçäo da morfológia espermática proposta por PAPA et al. (1989), em funçäo da dificuldade de obtençäo e alto custo do corante amarelo metacromo. No Laboratório de Andrologia da F.M.V.Z. - UNESP - Botucatu foram feitos 20 esfregaços de amostras de sêmen descongelados das espécies bovina, caprina, eqüina, canina e coradas pela técnica anteriormente proposta, substituindo-se a soluçäo do amarelo metacromo glicerinada pela soluçäo de rosa bengala glicerinada (20 ml de soluçäo mäe de rosa bengala citado por MIES FILHO (1987) + 55 ml de álcool metílico + 5 ml de tampäo sorensen + 20 ml de glicerina). A análise dos esfregaços de sêmen corados com a substituiçäo proposta permitiu perfeita visualizaçäo do acrossomo, bem como das demais estruturas do espermatozóides e manteve o padräo de coloraçäo da morfologia espermática do sêmen descongelado

Alteraçöes morfológicas em ovários de éguas: tumores e hematomas / Morphological changes in the mare ovaries: tumors and hematomas

Descrevem-se as alteraçöes morfológicas diagnosticadas nos ovários de 14 éguas. Foram constatados 12 tumores das células de granulosa e 2 hematomas nos animais submetidos à ovariectomia unilateral no Hospital Veterinário da FMVZ-UNESP-BOTUCATU

Avaliaçäo da fertilidade com ratos Rattus norvergicus Albinus machos tratados cronicamente com morfina endovenosa / Fertility evaluation in male rats (Rattus novergius albinus) chronically treated with endovenous morphine

O presente trabalho avalia a fertilidade em ratos machos tratados cronicamente com cloridrato de morfina com injeçäo diárias via endovenosa. A escolha do uso desta via de administraçäo deu-se pelo fato de que em plano piloto anterior, a morfina mostrou alteraçöes na fertilidade destes animais, o que näo ocorreu em trabalhos anteriores quando injetada intraperitonealmente. O objetivo deste trabalho, portanto, é determinar a ocorrência de alteraçöes na fertilidade e morfologia dos testículos, hipófise, genitais acessórios e espermatozóides desses ratos, haja vista a incidência ao uso abusivo deste fármaco por humanos

Vasectomia no cäo (canis familiaris): alteraçöes macro e microscópicas do epidídimo / Vasectomy in the dog (canis familiaris): macroscopic and microscopy alterations of epididymis

Em 20 cäes, distribuídos em 2 grupos numericamente iguais e selecionados por meio de exame andrológico, praticou-se vasectomia unilateral do lado esquerdo, empregando-se na ligadura do canal deferente, fio de algodäo ou categute cromado 00. Foi sacrificado un animal de cada grupo com 7, 14, 30 dias e depois mensalmente até o 8§ mês após a intervençäo cirúrgica. Todos os cäes foram necropsiados e os epidídimos, após isolamento e pesagem, foram analisados macro e microscopicamente. Os diâmetros externos do colo testicular do canal deferente do lado esquerdo tornaram-se maiores. Houve sensível alteraçäo na forma, tamanho, consistência, simetria e peso do epidídimo do lado operado, cuja cauda adquiriu forma esférica e mostrou progressivo achatamento do epitélio de revestimento, com perda dos estereocílios. O corpo assumiu forma de correia ligeiramente cilíndrica e a cabeça permaneceu praticamente inalterada. As médias dos pesos dos epidídimos dos lados esquerdo e direito, quando se empregou fio de algodäo, foram, respectivamente, 3,69 ñ 1,51 g e 2,46 ñ 0,76 g e para o categute cromado 3,90 ñ 1,58 g e 2,52 ñ0,71 g. A análise estatística dos pesos dos epidídimos revelou diferença significativa entre os lados operados e controle para ambos os grupos. Näo foi constatada nenhuma diferença quanto ao emprego do fio de algodäo ou categute cromado na ligadura do deferente seccionado

Vasectomia no cäo (canis familiaris): II. Alteraçöes macro e microscópicas do testiculo / Vasectomy in the dog (Canis familiaris): II. macroscopic and microscopic alterations of the testis

Em 20 cäes, distribuídos em 2 grupos numericamente iguais e selecionados por meio de exame andrológico, praticou-se vasectomia unilateral do lado esquerdo, empregando-se na ligadura do canal deferente fio de algodäo ou categute cromado 00. Foi sacrificado um animal de cada grupo com 7, 14, 30 dias e depois mensalmente até o 8§ mês após a intervençäo cirúrgica. Todos os cäes foram necropsiados e os testículos, após isolamento e pesagem, foram analisados macro e microscopicamente. O excame macroscópico dos testículos näo indicou alteraçöes na mobilidade, forma, tamanho, simetria e consistência. As médias dos pesos dos testículos dos lados esquerdo e direito foram, respectivamente, 9,26 ñ 4,29 g e 9,33 ñ 4,27 g, quando se utilizou fio de algodäo e 9,60 ñ 3,05 g e 10,06 ñ 3,03 g quando se utilizou categute cromado, näo sendo as diferenças estatisticamente significativas. A vasectomia induziu a degeneraçäo progressiva do epitélio germinativo, constatada com 14 dias e atingindo um máximo 60 dias após o ato cirúrgico, sem que houvesse a supressäo completa da espermatogênese. Noventa dias após a vasectomia houve início da regenereaçäo do epitélio germinativo e 30 dias mais tarde a espermatogênese tornou-se normal. O tecido intesticial manteve-se inalterado. Näo houve diferença com o emprego dos dois fios de sutura

Avaliaçäo da fertilidade em ratos (Rattus norvergicus albinus) machos tratados cronicamente com morfina endovenosa / Fertility evaluation in male rats (Rattus norvergicus albinus) chronically treated with endovenous morphine

O presente trabalho avalia a fertilidade em ratos machos tratados cronicamente com cloridrato de morfina com injeçöes diárias via endovenosa. A escolha do uso desta via de administraçäo deu-se pelo fato de que em plano piloto anterior a morfina mostrou alteraçöes na fertilidade destes animais, o que näo ocorreu em trabalhos anteriores quando injetada intraperitonealmente. O objetivo deste trabalho, portanto, é determinar a ocorrência de alteraçöes na fertilidade e morfologia dos testículos, hipófise, genitais acessórios e espermatozóides desses ratos, haja a incidência ao uso abusivo deste fármaco por humanos