Estudio interlaboratorio de los ensayos para anticuerpos antifosfolípidos / Cooperative study for Interlaboratory antiphospholipid antibodies detection

La presencia de anticuerpos antifosfolípidso (aFL) en pacientes con trombosis venosa y/o arterial, pérdidas fetales o abortos recurrentes caracteriza al síndrome antifosfolípido (SAF). Los aFL son evaluados por métodos convencionales como ensayos de coagulación para la actividad de anticoagulante lípico (AL) y ensayos inmunológicos para los anticuerpos anticardiolipina (aCL). Aún existen muchos inconvenientes cuando se comparan los resultados informados por distintos laboratorios a pesar de los avances logrados en la estandarización de estos ensayos. El comité de Síndrome Antifosfolípido del grupo CLART realizó un estudio interlaboratorio que consistió en dos etapas: 1) distribución de un cuestionario para conocer la metodología utilizada por los centros participantes en la evaluación de los aFL, 2) distribución y análisis de 12 muestras de sueros para determinar la concordancia de los resultados de aCL dados por los participantes con aquellos considerados de referencia determinados por el centro coordinador. Se recibieron en la primera etapa 27 respuestas y en la segunda, los resultados de 20 de los 24 centros que acordaron participar. Se observó una gran dispersión de los resultados para a CL, IgG e IgM (principalmente usando equipos comerciales) en comparación con los de referencia (ELISA desarrollado), considerando tanto los valores en unidades como en títulos. La concordancia entre los resultados mejoró significativamente cuando los datos de aCL de los participantes eran agrupados como resultado negativo (título negativo o positivo débil) o positivo (título positivo moderado o alto) para el SAF. Esto remarca la necesidad de una mejor estandarización y de urgentes recomendaciones internacionales para la realización del ensayo de aCL, parte fundamental de los criterios de laboratorio para el SAF.

Utilidad de la detección de anticuerpos anti-factor VIII por Elisa en hemofílicos / Usefulness of detection of afVIII antibodies by Elisa in haemophiliacs

Los hemofílicos pueden desarrollar en forma concomitante inhibidor lúpico (LA) e inhibidor neutralizante anti-factor VIII (a-fVIII). El diagnóstico diferencial es complejo ya que el LA interfiere en la identificación de los a-fVIII. A fin de detectar a-fVIII sin interferencia de LA, desarrollamos un ELISA utilizando fVIII recombinante libre de fosfolípidos como antígeno con la muestra y revelamos la IgG unidad mediante un anticuerpo anti-IgG humana-fosfatasa. El sistema permitió detectar un anticuerpo monoclonal a-fVIII al ser revelado con el antisuero anti-IgG ratón. Como control inespecífico se utlizaron anticuerpos monoclonales anti-GPIIIa y anti-factor von Willebrand. Para evaluar la utilidad del ELISA, se analizaron plasmas de pacientes hemofílicos con a-fVIII, con o sin LA y hemofílicos sin inhibidor. Como controles negativos se incluyeron plasmas con LA y normales. Los plasmas de hemofílicos con a-fVIII dieron valores de absorbancia >X Normalñ3DE; algunos plasmas hemofílicos sin inhibidor también mostraron absorbancias superiores al normal, aunque inferiores a las observadas para a-fVIII. Las lecturas de los controles no fueron significativas. No observamos interferencias por la presencia de LA. El ELISA a-fVIII sería un elemento diagnóstico complementario, al permitir evidenciar anticuerpos capaces de unirse al fVIII, aún en plasmas LA.