Coinfecções por Leishmania infantum, Neospora caninum e Toxoplasma gondii em cães necropsiados da região central do Rio Grande do Sul, Brasil / Coinfections by Leishmania infantum, Neospora caninum and Toxoplasma gondii in necropsied dogs from the central region of Rio Grande do Sul, Brazil

O objetivo do presente trabalho foi determinar a presença de anticorpos para Leishmania infantum, Neospora caninum e Toxoplasma gondii, por meio da reação de imunofluorescência indireta (RIFI), em cães (n=78) provenientes da região central do Rio Grande do Sul, necropsiados no Hospital Veterinário da Universidade Federal de Santa Maria (UFSM), bem como avaliar os dados epidemiológicos, sazonais e anátomo-histopatológicos. Do total de animais avaliados, 67,9% (53/78) apresentaram soropositividade para ao menos um agente. A ocorrência de anticorpos para L. infantum, N. caninum e T. gondii foi de 33,3 (26/78), 37,1 (29/78) e 43,5% (34/78), respectivamente. Detectaram-se monoinfecções em 9,4% (5/53) para L. infantum, 18,8% (10/53) para N. caninum e 20,7% (11/53) para T. gondii. As coinfecções foram observadas em 27/53 (50,9%) dos animais. As infecções ocorreram independentemente de idade, sexo, procedência ou raça (P>0,05). Não se verificaram lesões anatomo-histopatológicas relacionadas aos agentes pesquisados, caracterizando-os como animais assintomáticos. Os resultados confirmaram a exposição de cães a esses protozoários na região central do RS e, em especial, demonstraram a circulação do agente causador da leishmaniose em uma área considerada indene para a enfermidade.(AU)

The present paper is aimed to determine the presence of antibodies for Leishmania infantum, Neospora caninum and Toxoplasma gondii by indirect immunofluorescence (IIF) in dogs (n=78) from the central region in the state of Rio Grande do Sul necropsied in the Veterinary Hospital from Universidade Federal de Santa Maria (UFSM). The data was evaluated regarding epidemiological, anatomic, and histopathologic findings. Of the total animals evaluated, 67.9% (53/78) showed seropositivity for at least one agent. The occurrence of antibodies to L. infantum, N. caninum and T. gondii was 33.3% (26/78) 37.1% (29/78) and 43.5% (34/78), respectively. The mono infections were detected in 9.4% (5/53) of L. infantum, 18.8% (10/53) for N. caninum and 20.7% (11/53) T. gondii. The coinfections occurred in 50.9% (27/53) of animals. There were not anatomical and histopathological lesions regarding these surveyed agents, characterizing them as subclinical animals. The results confirmed the exposition of dogs to these protozoa in the central region of the RS, highlighting the circulation of the causer agent of leishmaniasis in an area considered harmless for the disease.(AU)

Atividade de nanoformulações de Melaleuca alternifolia e terpinen-4-ol em isolados de Rhodococcus equi / Melaleuca alternifolia activity in nanoformulations and terpinen-4-ol against Rhodococcus equi isolates

Rhodococcus equi é o agente etiológico da rodococose equina, importante doença respiratória de potros. Especialmente na última década, a emergência de cepas resistentes aos antimicrobianos empregados no tratamento da rodococose tem sido relatada. Nesse sentido, há a necessidade de estudos envolvendo terapias alternativas e novas tecnologias, incluindo o uso de plantas medicinais e nanotecnologia. Neste trabalho utilizou-se Melaleuca alternifolia nas seguintes formulações: óleo livre, nanocápsula, nanoemulsão e a combinação de óleo livre com nanocápsula e com nanoemulsão, além do seu composto majoritário, terpinen-4-ol, a fim de verificar a atividade antimicrobiana frente a isolados de R. equi de diferentes origens. Utilizou-se o método de microdiluição em caldo na determinação das concentrações inibitória mínima (CIM) e bactericida mínima (CBM) das diferentes formulações frente aos isolados (n=24). Verificou-se baixo potencial para atividade antibacteriana de M. alternifolia na formulação de óleo livre. Todavia, essa atividade foi potencializada quando se incorporou o óleo essencial às nanoformulações. O composto terpinen-4-ol demonstrou potencial atividade antibacteriana quando incorporado ao óleo essencial e quando utilizado isoladamente. Verificou-se que tanto M. alternifolia quanto terpinen-4-ol testados possuem atividade antimicrobiana contra isolados de R. equi, sugerindo seu emprego em estudos avaliando seu potencial para o tratamento da rodococose.

Rhodococcus equi causes rodococose in horses, characterized by bronchopneumonia in foals. Due to reports of antimicrobial resistance, it is important to develop studies involving alternative therapies and new technologies, including the use of medicinal plants and nanotechnology. In this work, the plant Melaleuca alternifolia in oil free formulations, nanocapsule, nanoemulsion and the combination of free and nanocapsule oil nanoemulsion, besides its major compound, terpinen-4-ol, were used in order to verify antimicrobial activity against isolates of R. equi. The broth microdilution method was employed to determine the minimum inhibitory (MIC) and minimum bactericidal (MBC) concentrations of different formulations against 24 isolates. There was low antibacterial activity of M. alternifolia in oil free formulation; however, it was observed that the activity was enhanced when incorporated as essential oil the nanoformulations. The major compound, terpinen-4-ol, showed bactericidal and bacteriostatic activity when used alone. It is suggested that M. alternifolia, in association with nanocarriers systems, as well as terpinen -4-ol, presents potential for future studies concerning the equine rodococosis therapy.

Identificação diferencial de Rhodococcus equi e Dietzia maris em bubalinos / Differential identification of Rhodococcus equi and Dietzia maris in buffaloes

Foram analisados 24 isolados bacterianos oriundos de leite e pele de búfalas (Bubalus bubalis), os quais foram previamente identificados como Rhodococcus equi com o auxílio de fenotipia concisa. Testes fenotípicos complementares e ferramentas moleculares foram utilizados com o objetivo de caracterizar esses isolados, bem como diferenciá-los de outros microrganismos intimamente relacionados. Observaram-se três fenótipos distintos, porém a identificação dos isolados foi inconclusiva. Apenas um dos isolados foi comprovado como sendo R. equi com a realização da PCR espécie-específica, sequenciamento e análise dos fragmentos de DNA. Os demais isolados só foram identificados pelo sequenciamento de fragmento do gene que codifica a região 16S do rRNA universal de bactérias, indicando tratar-se de Dietzia maris. O perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos revelou maior resistência dos isolados de D. maris para oxacilina (96 por cento) e rifampicina (87 por cento). O isolado de R. equi apresentou resistência à amicacina, oxacilina, penicilina, rifampicina e tetraciclina. Alerta-se para o risco da incorreta identificação dos isolados baseados em testes fenotípicos concisos e para a necessidade de utilização de testes complementares para diferenciação entre R. equi e D. maris.

Twenty-four bacterial isolates from milk and skin of buffalo females (Bubalus bubalis), which previously had been identified as Rhodococcus equi by using a restricted number of phenotypical tests for bacterial characterization, were analyzed. The goal of this study was to perform the characterization of these isolates, as well as the differentiation of other microorganisms closely related by using additional phenotypical tests and molecular tools. Based on the phenotypical results, three different biotypes were obtained. However, the identification of the isolates was inconclusive. Only one of the isolates was confirmed as R. equi by the PCR specifically for this species, as well DNA sequencing and DNA fragment analysis. All the other isolates only could be precisely identified after the DNA sequencing, and they were characterized as Dietzia maris. The sensitivity profile to antimicrobials demonstrated the highest resistance of D. maris to oxacillin and rifampin, 96 percent and 87 percent, respectively. R. equi isolate, presented resistance to amikacin, oxacillin, penicillin, rifampin, and tetracycline. Thus, it is important to alert for the risk of the incorrect identification of the bacterial isolates by using diagnostic analysis based on phenotypical tests in order to differentiate R. equi and D. maris, besides the necessity to use complementary tests for differentiation of these microorganisms.

Diversidade antigênica de amostras de vírus da diarréia viral bovina isoladas no Brasil: implicaçöes para o diagnóstico e estratégias de imunizaçäo / Antigenic diversity of Brazilian isolates of bovine viral diarrhea virus (BVDV): implications for diagnosis and immunization strategies

Seqüenciamento e análise filogenética de 17 amostras do vírus da diarréia viral bovina (BVDV) isoladas no Brasil identificaram quatro amostras (23,5 por cento) do genótipo 1a (BVDV-1a), nove amostras (52,9 por cento) do genótipo 1b (BVDV tipo 1b) e quatro amostras (23,5 por cento) do genótipo 2 (BVDV tipo 2). As amostras brasileiras de BVDV tipo 2 apresentaram-se genotipicamente distintas dos BVDV tipo 2 até entäo identificados na América do Norte e Europa, sugerindo pertencerem a um novo subgenótipo. A caracterizaçäo antigênica dessas amostras por neutralizaçäo cruzada revelou reatividade sorológica muito reduzida com cepas vacinais do BVDV. O anti-soro produzido contra três cepas vacinais do BVDV apresentou atividade neutralizante muito reduzida contra várias amostras brasileiras de BVDV tipo 1 e 2. Diferenças de até 128 vezes nos títulos de anticorpos neutralizantes foram observadas entre cepas vacinais e amostras brasileiras do BVDV. Nos testes de soroneutralizaçäo (SN) contra o vírus dos tipos 1 e 2, de 1134 amostras testadas, 280 (24,7 por cento) possuiam anticorpos neutralizantes anti-BVDV e dessas, 215 (76,8 por cento) apresentaram atividade neutralizante contra ambos os vírus, 37 (13,2 por cento) reagiram apenas contra o BVDV tipo 2 e 28 amostras (10 por cento) foram positivas apenas contra o BVDV tipo 1. Esses resultados demonstram que testes de SN utilizando vírus de apenas um genótipo podem resultar em número significativo de falsos-negativos e indica a necessidade da formulaçäo de vacinas com amostras locais de BVDV e/ou contendo vírus dos dois genótipos

Antigenic characterization of Brazilian bovine viral diarrhea virus isolates by monoclonal antibodies and cross-neutralization

Nineteen Brazilian isolates of bovine viral diarrhea virus (BVDV) were characterized antigenically with a panel of 19 monoclonal antibodies (mAbs) (Corapi WV, Donis RO and Dubovi EJ (1990) American Journal of Veterinary Research, 55: 1388-1394). Eight isolates were further characterized by cross-neutralization using sheep monospecific antisera. Analysis of mAb binding to viral antigens by indirect immunofluorescence revealed distinct patterns of reactivity among the native viruses. Local isolates differed from the prototype Singer strain in recognition by up to 14 mAbs. Only two mAbs - one to the non-structural protein NS23/p125 and another to the envelope glycoprotein E0/gp48 - recognized 100 per cent of the isolates. No isolate was recognized by more than 14 mAbs and twelve viruses reacted with 10 or less mAbs. mAbs to the major envelope glycoprotein E2/gp53 revealed a particularly high degree of antigenic variability in this glycoprotein. Nine isolates (47.3 per cent) reacted with three or less of 10 E2/gp53 mAbs, and one isolate was not recognized by any of these mAbs. Virus-specific antisera to eight isolates plus three standard BVDV strains raised in lambs had virus-neutralizing titers ranging from 400 to 3200 against the homologous virus. Nonetheless, many antisera showed significantly reduced neutralizing activity when tested against heterologous viruses. Up to 128-fold differences in cross-neutralization titers were observed for some pairs of viruses. When the coefficient of antigenic similarity (R) was calculated, 49 of 66 comparisons (74.24 per cent) between viruses resulted in R values that antigenically distinguish strains. Moreover, one isolate had R values suggesting that it belongs to a distinct serologic group. The marked antigenic diversity observed among Brazilian BVDV isolates should be considered when planning diagnostic and immunization strategies.