Cocultura de embriões Mus musculus com monocamadas de células de linhagens primária e contínua em um sistema sem fluxo externo de CO2 / Coculture of Mus musculus embryos with monolayers of primary and continuous lineages in a system without external CO2 flow

A eficiência de três monocamadas celulares (linhagem contínua - células Madin and Darby Bovine Kidney/ MDBK;linhagem primária - células de útero e de oviduto bovino) foi testada para verificar a existência de especificidade celular através do desenvolvimento de embriões, desde o estádio de duas células até o de mórula compacta, em um sistema de cocultura sem fluxo externo de CO2. Depois da seleçâo, os embriões (n = 343) foram aleatoriamente distribuídos em diferentes tubos de ensaio, os quais foram colocados a 37°C durante 72 horas. Após o período de cocultura, as porcentagens de mórulas compactas obtidas foram de 87,7 por cento em células de oviduto, 86,2 por cento na monocamada de células uterinas e 88,3 por cento na de células MDBK. Não foi observada diferen- ça significativa entre esses valores e, por isso mesmo, conclui-se que a especificidade celular não é importante para o desenvolvimento in vitro de embriões Mus musculus.

The efficiency of three monolayers (continuous lineage - Madin and Darby Bovine Kidney/ MDBK; primary lineage - bovine celisfrom uterus and oviduct) hás been tested to verify the celular specificity through development of two cells embryos until compact morulaes stage in a coculture system without continuous CO2 flow. The selected mouse embryos (n=343) were randomiy divided into three experimental groups andplaced in closed culture tubes mantained aí 37°C during 72 hours. After the co-culture period, the porcentages of compact morulaes were 87.7 percent in oviduct cells, 86.2 percent in uterus monolayer and 88.3 percent in MDBK cells. It was not observed significative difference between these results and it is possible to condude that celular specificity is not importam to enhance the In vitro development of Mus musculus embryos.

Renovação parcial do meio de cultura como perspectiva de aumentar a eficiência de um sistema de cocultoura de embriões sem fluxo contínuo de CO2 / Partial replacement of the culture medium in order to enhance a embryos coculture system without continuous CO2 flow

Substituindo-se parcialmente (30%) os meios de cultura TC M 199/NaHCO3 (199/NaHCO3) e TC M 199/25mM HEPES (199/HEPES) a intervalos de 24, 48 ou 72 horas, testou-se a possibilidade de incrementar a obtenção de blastocistos expandidos (BLE) a partir de embriões Mus musculus no estádio de duas células incubados sem fluxo contínuo de CO2. Após distribuição aleatória dos embriões em tubos de ensaio contendo 2ml de meio de cultura e monocamada celular de oviduto bovino, os referidos tubos foram hermeticamente fechados e colocados em estufa bacteriológica a 37°C durante 96 horas. A renovação do meio de cultura em qualquer período não incrementou a porcentagem de embriões que alcançou o estádio de BLE, todavia, o número total de BLE obtido com o 199/HEPES (79,0%) foi superior (P £ 0,01) ao verificado com o 199/NaHCO3 (65,0%).

It has been evaluated, in a coculture system without continuous CO2 flow, the possibility to enhance the percentage of blastocists obtained from two cells mouse embryos by partial (30%) replacement (each 24, 48 and 72 hours of intervals) of two culture media (TCM 199/NaHCO3 and TCM 199/25 mM HEPES). The embryos, randomiy allocated in closed cultures tubes with 2 ml of medium and bovine oviduct monolayer, were maintained at 37°C during 96 hours. No diferences between spreaded blastocists were verifica when the media were replaced at ali intervals, however, the medium TCM 199/25mM HEPES was significantiy more effective (P £ 0.01) then TCM 199/NaHCO3.