Replacement of HIV p24 Ag test by a multiplex RT-PCR method for primary screening of blood donors

Nucleic Acid Testing (NAT) as a tool for primary screening of blood donors became a reality in the end of the 1990 decade. We report here the development of an "in-house" RT-PCR method that allows the simultaneous (multiplex) detection of HCV and HIV-RNA in addition to an artificial RNA employed as an external control. This method detects all HIV group M subtypes, plus group N and O, with a detection threshold of 500 IU/mL. After validation, the method replaced p24 Ag testing, in use for blood donation screening since 1996 at our services. From July 2001 to February 2006, 102,469 donations were tested and 41 (0.04 percent) were found HIV-RNA reactive. One NAT-only reactive donation (antibody non-reactive) was observed, with subsequent seroconversion of the implied donor, giving a yield of 1:102,469. This rate is in contrast to the international experience that reports a detection of approximately 1:600,000 - 1:3,100,000 of isolated HIV-RNA donations.

O uso de testes de ácidos nucleicos (NAT) na rotina de triagem de doadores de sangue tornou-se uma realidade ao final da década de 1990. Descreve-se aqui uma metodologia de RT-PCR multiplex "in-house" que permite a detecção simultânea dos RNAs dos vírus HIV e HCV além de uma molécula artificial de RNA usada como controle externo. O método detecta todos os subtipos de HIV do grupo M e também do grupo N e O, com uma sensibilidade de 500 UI/mL. Após validação, este teste substituiu o do antígeno p24, até então na rotina de triagem em nosso laboratório, desde 1996. De julho de 2001 a fevereiro de 2006 foram testadas 102.469 doações e 41 (0.04 por cento) foram NAT reativas. Uma doação NAT isoladamente reativa (anticorpo não-reativa) foi detectada com soroconversão subseqüente do doador, portanto, o rendimento do NAT nesta população até o presente momento é de 1:102.469. Este número contrasta com a experiência obtida internacionalmente, onde taxas de 1:600.000 - 1:3.100.000 foram descritas.

Primary screening of blood donors by nat testing for HCV-RNA: development of an "in-house" method and results

An "in-house" RT-PCR method was developed that allows the simultaneous detection of the RNA of the Hepatitis C Virus (HCV) and an artificial RNA employed as an external control. Samples were analyzed in pools of 6-12 donations, each donation included in two pools, one horizontal and one vertical, permitting the immediate identification of a reactive donation, obviating the need for pool dismembering. The whole process took 6-8 hours per day and results were issued in parallel to serology. The method was shown to detect all six HCV genotypes and a sensitivity of 500 IU/mL was achieved (95 percent hit rate). Until July 2005, 139,678 donations were tested and 315 (0.23 percent) were found reactive for HCV-RNA. Except for five false-positives, all 310 presented the corresponding antibody as well, so the yield of NAT-only donations was zero, presenting a specificity of 99.83 percent. Detection of a window period donation, in the population studied, will probably demand testing of a larger number of donations. International experience is showing a rate of 1:200,000 - 1:500,000 of isolated HCV-RNA reactive donations.

Desenvolveu-se uma metodologia própria ("in-house") baseada em RT-PCR, que permite detectar simultaneamente o RNA do vírus HCV e de um RNA artificial empregado como controle externo. As amostras são analisadas em pools de 6-12 doações, cada doação sendo incluída em dois pools diferentes, um horizontal e um vertical, permitindo a identificação imediata de uma doação reativa, sem a necessidade de desmembrar-se um pool reativo. O processo todo consumiu de 6-8 horas diárias e os resultados foram emitidos em paralelo à sorologia. O método detectou os seis genótipos de HCV, com um limite de sensibilidade de 500 UI/mL (95 por cento hit rate). Até julho de 2005 haviam sido testadas 139.678 doações com a detecção de 315 (0,23 por cento) doações reativas para HCV-RNA. Exceto cinco falso-positivas, todas estas doações também apresentavam o respectivo anticorpo, portanto não se detectou nenhuma doação em janela imunológica. A especificidade foi de 99,83 por cento. A detecção de amostra em janela imunológica, nesta população de doadores, provavelmente demandará a análise de um número maior de doações, espelhando-se na experiência internacional que tem mostrado a detecção de amostras HCV-RNA isoladas em 1:200.000 - 1:500.000 doações.

Acúmulo de policloretos de bifenila na populaçäo da Grande Säo Paulo, Brasil / Accumulation of polychlorinated biphenyls in the population of Greater S.Paulo, Brazil

Os policloretos de bifenila (PCBs), cuja utilizaçäo iniciou-se em 1930 em sistema fechados (capacitores e transformadores elétricos) foram observados no ambiente em 1966, atingindo a cadeia alimentar e acumulando-se no tecido subcutâneo de seres humanos; ao mesmo tempo, foi possível mostrar que esses produtos químicos säo potencialmente nocivos para a saúde humana. Como em 1976 os PCBs foram encontrados no tecido gorduroso de pequena amostra da populaçäo brasileira, decidiu-se fazer um estudo mais amplo, analisando-se por cromatografia de fase gasosa a gordura do tecido celular subcutâneo de 189 pessoas, de ambos os sexos, que tinham sofrido morte violenta. Foram encontrados níveis médios de 0,8661 ppm em indivíduos do sexo masculino, que apresentaram aumento linear das concentraçöes de acordo com a idade, o que näo foi observado entre os do sexo feminino, onde os valores médios de acúmulo foram de 1,4530 ppm. Do total de amostras, 12,7% apresentaram níveis superiores a 1,95 ppm. É discutida a importância do achado e säo assinaladas as medidas de proteçäo da populaçäo brasileira exposta aos PCBs

Policloretos de bifenila: um grave problema ocupacional e ambiental / Polychlorinated biphenyls: an important occupational and environmental problem

É feita uma revisäo bibliográfica atualizada dos problemas tanto de natureza ambiental como de natureza ocupacional causados pelos policloretos de bifenila, destacando-se os estudos experimentais em animais e os estudos epidemiológicos que permitem um amplo conhecimento dos efeitos potencialmente nocivos desses agentes químicos