Medicina personalizada: farmacogenómica y farmacoepigenética: [editoriales] / Tailored medicine: pharmogenomics and pharmacogenetics: [editorial]

El proyecto genoma humano, los avances y los desarrollos de las diferentes “omicas”, apoyados en la medicina traslacional, han permitido el conocimiento y avance en muchos de los mecanismos moleculares de la fisiología y la patología en el humano. Basado enestos conocimientos se tienen muchas evidencias de que la mayor parte de la terapia con medicamentos puede ser individualizada sobre los estudios de variación del genoma humano, ya que solo entre el 30 % y 60 % de los pacientes tienen una respuesta común a dichas terapias...

Análisis proteóiico de cultivos primarios de tiroides / Proteomic nalysiis of primary cultures from thyroid / Análiseproteómicco de culturas preliminares do thyroid

En el presente estudio se identificaron proteínas de expresión constitutiva, como vimentina, actina, tubulina, proteína de choque térmico de 60 kDa, peroxirredoxina y la ATP sintasa mitocondrial, en cultivos primarios de tiroides normales y de carcinoma papilar de tiroides. Se establecieron las condiciones de extracción, solubilización, análisis cuantitativo y cualitativo de dichas proteínas, y se buscaron las mejores condiciones de isoelectroenfoque (IEF) en la electroforesis en dos dimensiones (2D). En la extracción y solubilización de las proteínas se evaluó la presencia o ausencia de anfolitos y sales, se obtuvo un mejor resultado empleando en el amortiguador de extracción sales como Tris-HCl y acetato de magnesio que incrementan la solubilidad de las proteínas. Para la cuantificación se recomienda el uso conjunto de técnicas colorimétricas con la electroforesis SDS-PAGE tiñendo con azul de Coomassie y corroborando los resultados mediante western blot, lo cual permite, además, verificar la integridad de las proteínas. Respecto a la electroforesis en dos dimensiones, se obtuvieron geles con un mayor número de manchas (spots),resueltos, enfocados y reproducibles empleando en el IEF gradientes inmovilizados de pH de 4-7 y voltaje final de 8.000 V. Las proteínas se identificaron mediante el análisis bioinformático de los geles 2D con el programa PDQuest (PDQuest 7.2, Bio-Rad®) y MALDI-TOF.

In this paper, proteins of constitutive expression such as vimentin, actin, tubulin, heat shock protein of 60 kDa, peroxiredoxin and the mitochondrial ATP sintase were identified in primary cultures of normal thyroid and papillary carcinoma. The extraction conditions, solubilization, quantitative and qualitative analysis of such proteins were established. In addition, the best conditions for isoelectrofocusing (IEF) in the two-dimensional electrophoresis (2D) were founded. In the extraction and solubilization of proteins, the presence or absence ofampholytes or salts was evaluated. The best result in the extraction was obtained using buffer salts such as Tris-HCl and magnesium acetate, which increase the solubility of these proteins. For quantification, the recommendation is to combine colorimetric techniques with SDS-PAGE electrophoresis stained with Coomasie blue and Western blot to confirm the results, which allows verifying the integrity of these proteins. In the two-dimensional electrophoresis, resolved, focused and reproducible gels with greater number of spots were obtained using in the IEF immobilized pH gradients of 4-7 and final voltage of 8000 V. The proteins were identified by the bioinformatic analysis of the 2DE gels with the PDQuest program (PDQuest 7.2 (BioRad®) and MALDI-TOF.

Neste estudo, se identificaram proteínas da expressão constitutiva, como vimentina, actina, tubulina, proteína de choque do calor do kDa 60, peroxiredoxinaeasintase mitocondrial do ATP, em cultivos primários de tireóide normal e de carcinoma papilar de tireóide. Se estabeleceram as condições de extração e de solubilization, assim como a análise quantitativaeaqualitativa de tais proteínas, e procuraram-se asmelhores condições para isoeletroenfoque (IEF) na eletroforese bidimensional (2D). Na extração e no solubilization das proteínas, se avaliou a presença ou a ausência de anfolitos ou de sais. O melhor resultado foi obtido usando sais como Tris-HCl e acetato do magnésio no amortecedor da extração, as quais aumentam a solubilida-de das proteínas. Na quantificação, se recomenda o uso de técnicas colorimétricas com eletroforese SDS-PAGE, tingindo com azul de Coomasie. Os resultados se confirmam com Western blot, o qual permite também verificar a integridade das proteínas. Quanto à eletroforese bidimensional, se obtiveram géis com um maior número de pontos (spots) determinados, enfocados e reprodutíveis no IEF usando gradientes imobilizados de pH 4-7 e tensão final de 8000 V. As proteínas foram identificadas por análise bioinformática de géis 2D com o programa PDQuest (PDQuest 7.2 (Bio-Rad®) e MALDITOF.

Enfermedad asociada a Clostridium difficile: nuevas amenazas de un viejo enemigo / Clostridium difficile associated disease: New threats of and old foe

La infección asociada a Clostridium difficile (EACD) es actualmente un importante problema de salud en el mundo con aumentada morbilidad y mortalidad en los adultos mayores. La EACD cada vez se está informando con mayor frecuencia en muchas partes del mundo. Desde 2002, se han informado brotes con una cepa de C. difficile resistente a fluoroquinolonas (BI/NAP1/027). Los cambios en la epidemiología incluyen la emergencia de una nueva población en riesgo, así como mayor incidencia de la enfermedad. La enfermedad se ha asociado con el uso de antibióticos, especialmente los de amplio espectro, por lo cual, éstos deben ser evitados. El tratamiento médico es con metronidazol o vancomicina y los casos severos pueden necesitar resección intestinal. Los casos recurrentes necesitan tratamiento prolongado con antibióticos, inmunoglobulinas y ocasionalmente enemas con materia fecal. Esta revisión es una actualización sobre la epidemiología, patogénesis y tratamiento de la infección por C. difficile.

Molecular Diagnostics of Porcine Stress Syndrome Susceptibility Associated with the Arg615Cys Mutation Using Real-Time PCR with Fluorescent Hybridization Probes / Molecular Diagnostics of Porcine Stress Syndrome Susceptibility Associated with the Arg615Cys Mutation Using Real-Time PCR with Fluorescent Hybridization Probes

Objective : The purpose of the presera study was to devélop a molecular genotyping method test by using a real time PCR hybridization probé and applying it to the analysis of C1843T mutations of the Sus scrofa RYR1 gene. Animáis population Three PSS-susceptible and PSS non-susceptible crossbred swine races were used for the experiments: Pietrain X Landrace Belga, Pietrain X Large White and Pietrain X Duroc. Methods: We have devéloped a genotyping method by using a hybridization probé and applied it to the analysis of C1843T mutations of the RYR1 gene, associated with PSS susceptibility. Genotyping results obtained by hybridization probé strategies were confirmed by restriction analysis and sequencing. In addi-tion, phenotype/genotype correlation analyses were devéloped by using the in vitro contracture test and confirmed the in vivo hálothane-succinylcholine challenge. Results: The real-time PCR with fluorescent hybridization probé methodology was designed to identify ho-mozygous PSS-resistant, PSS-susceptible animáis as well as heterozygous carriers. All cases genotyped by fluorescent hybridization probes were in agreement with PCR restriction enzyme digestión and sequencing and showed a 100% concordance between the in vivo and in vitro porcine stress syndrome (PSS) susceptibility results. Conclusions and clinical relevance: The real-time PCR with fluorescent hybridization probé method described here provides a rapid, easily interpretable and réliáble tool for genotyping the C1843T (Arg615-Cys) polymorphism of the RYR1 gene. This new methodology may be useful in the wide-scale genotyping of PSS-susceptibility and genetic selection.