ABSTRACT
@#[摘 要] 目的：为解决野生型B细胞成熟抗原（BCMA）被γ分泌酶切割导致表达不稳定的问题，构建抵抗γ分泌酶切割的BCMA突变体并构建靶细胞，用于评价BCMA CAR-T细胞的杀伤功能。方法：将野生型BCMA的穿膜域替换为人CD8α穿膜域，构建抵抗γ分泌酶切割的BCMA突变体（BCMA-CD8α TM），构建过表达该突变体的U266（U266BCMA Mut）、K562（K562BCMA Mut）、SKOV3（SKOV3BCMA Mut）和CHO（CHOBCMA Mut）细胞；构建装载NFAT-EGFP报告基因的BCMA CAR Jurkat细胞（BCMA-CAR-Jurkat-Reporter）与U266BCMA Mut细胞共培养，采用FCM检测该细胞中EGFP表达水平以指示NFAT激活水平，荧光素酶法检测BCMA CAR-T细胞对Luciferase标记的K562BCMA Mut细胞的杀伤作用，实时无标记动态细胞分析技术（RTCA）检测BCMA CAR-T细胞对SKOV3BCMA Mut和CHOBCMA Mut细胞的杀伤作用。结果：应用γ分泌酶抑制剂LY411575抑制γ分泌酶活性，显著增强野生型U266细胞表面BCMA表达水平，平均荧光强度上调10倍以上；但撤除抑制剂后BCMA表达水平逐渐降低（P<0.01）；BCMA-CD8α TM突变体可抵抗γ分泌酶的切割作用，在U266细胞表面稳定表达（P>0.05）；U266细胞及过表达BCMA-CD8α TM的U266细胞与BCMA-CAR-Jurkat-Reporter细胞共培养后都可激活Reporter系统、增强EGFP表达，但该效应在BCMA-CD8α TM过表达的U266细胞中更显著（P<0.01）；BCMA-CD8α TM在BCMA表达阴性的K562、SKOV3和CHO 3种靶细胞中成功过表达，且在LY411575处理下该突变体的表达水平仅有小幅度升高；荧光素酶法检测结果显示，不同效靶比下，BCMA CAR-T细胞均可特异、高效杀伤过表达BCMA-CD8α TM的K562细胞；RTCA结果显示，不同效靶比下，BCMA CAR-T细胞均可有效识别、杀伤过表达BCMA-CD8α TM的SKOV3和CHO细胞，但同等效靶比下的Mock-T细胞无此效应。结论：本实验构建的BCMA-CD8α TM突变体能够抵抗γ分泌酶的切割，在多种靶细胞表面稳定表达，为评价BCMA CAR-T细胞体外杀伤的有效性和特异性提供多种检测手段。
ABSTRACT
ABSTRACT Introduction Maintaining body balance is a prerequisite for good tennis practice. Therefore, the demands of technical movements for competitive playability are achieved only after players have improved balance. Objective Analyze the impacts of balance training on the performance of tennis players. Methods 24 male tennis college students, 18 to 21 years old, were selected and divided into experimental and control groups. The intervention took place under a specific balance training protocol for eight weeks, and data were collected in the experimental group before and after the intervention. Results The test time with eyes closed in unipodal support, Romberg test, eyes closed standing, and walking standing in the experimental group was 37.340 ± 14.382s, 67.250 ± 30.275s, 21.070 ± 7.887s and 4.510 ± 0.540s respectively, showing statistical superiority over the control group. Conclusion After eight weeks of balance training exercise intervention, compared with the subjects without instability training exercise intervention, the subjects' static and dynamic balance ability after eight weeks of training were significantly improved. Level of Evidence II; Therapeutic studies - investigation of treatment outcomes.
RESUMO Introdução A manutenção do equilíbrio corporal é pré-requisito básico para uma boa prática no tênis. Portanto, as exigências dos movimentos técnicos para jogabilidade competitiva são alcançadas somente depois que os jogadores têm um aprimoramento do equilíbrio. Objetivo Analisar os impactos do treinamento de equilíbrio sobre o desempenho dos jogadores de tênis. Métodos 24 estudantes universitários de tênis masculinos de 18 a 21 anos foram selecionados e divididos em grupo experimental e grupo de controle. A intervenção deu-se por protocolo específico de treino de equilíbrio durante oito semanas e os dados foram coletados previamente e posteriormente à intervenção do grupo experimental. Resultados O tempo de teste com os olhos fechados em apoio unipodal, teste de Romberg, olhos fechados em pé e andar de pé no grupo experimental foi de 37.340 ± 14.382s, 67.250 ± 30.275s, 21.070 ± 7.887s e 4.510 ± 0.540s respectivamente, apresentando superioridade estatística frente ao grupo controle. Conclusão Após oito semanas de intervenção de exercício de treinamento de equilíbrio, em comparação com os sujeitos sem intervenção de exercício de treinamento instável, a capacidade de equilíbrio estático e a capacidade de equilíbrio dinâmico dos sujeitos após 8 semanas de treinamento foram significativamente aprimoradas. Nível de evidência II; Estudos terapêuticos - investigação dos resultados do tratamento.
RESUMEN Introducción El mantenimiento del equilibrio corporal es un requisito básico para la buena práctica del tenis. Por lo tanto, las exigencias de los movimientos técnicos para la jugabilidad competitiva se logran sólo después de que los jugadores tengan una mejora del equilibrio. Objetivo Analizar el impacto del entrenamiento del equilibrio en el rendimiento de los tenistas. Métodos Se seleccionaron 24 estudiantes universitarios de tenis, de entre 18 y 21 años, y se dividieron en un grupo experimental y un grupo de control. La intervención se llevó a cabo mediante un protocolo específico de entrenamiento del equilibrio durante ocho semanas y se recogieron datos antes y después de la intervención en el grupo experimental. Resultados El tiempo de prueba con los ojos cerrados en apoyo unipodal, la prueba de Romberg, los ojos cerrados de pie y la marcha de pie en el grupo experimental fue de 37,340 ± 14,382s, 67,250 ± 30,275s, 21,070 ± 7,887s y 4,510 ± 0,540s respectivamente, presentando superioridad estadística sobre el grupo de control. Conclusión Después de ocho semanas de intervención de ejercicios de entrenamiento de equilibrio, en comparación con los sujetos sin intervención de ejercicios de entrenamiento de inestabilidad, la capacidad de equilibrio estático y la capacidad de equilibrio dinámico de los sujetos después de 8 semanas de entrenamiento mejoraron significativamente. Nivel de evidencia II; Estudios terapéuticos - investigación de los resultados del tratamiento.