Caracterización de la estructura primaria de la interleucina-2 humana recombinante / Characterization of the primary structure of the recombinant human interleukin-2

La interleucina-2 humana recombinante clonada y expresada en E. coli, y purificada mediante cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC), fue analizada para verificar su estructura primaria. El análisis de aminoácidos de la proteína pura coincide con la composición teórica esperada. La proteína fue hidrolizada con bromuro de cianógeno, los péptidos separados por HPLC fueron secuenciados automáticamente y determinada su composición aminoacídica, confirmándose la estructura desde el extremo N-terminal hasta el residuo 56. Con el propósito de completar la secuencia de la proteína, esta fue reducida y carboximetilada. La proteína se sometió a digestión con endoproteinasa GLU-C (Staphyloccocus aureus V8) y una parte de esta digestión se incubó a continuación con tripsina. Los péptidos purificados mediante gel filtración (Biogel P-6) y HPLC en fase inversa, fueron secuenciados con la técnica manual de doble acoplamiento con dimetilaminoazobenzeno isotiocianato e isotiocianato de fenilo (DABITC/PITC). La purificación de la digestión tríptica de la proteína reducida y carboximetilada mediante fase inversa, suministró los péptidos para análisis en espectrometría de masas utilizando como fuente de ionización bombardeo con átomos rápidos (MS FAB). Tanto los resultados de la secuenciación como la espectrometría de masas confirman que la interleucina-2 obtenida en E. coli posee la estructura primaria reportada para esta proteína

Separación de PTH-aminoácidos mediante cromatografía en fase inversa en columnas cortas / Separation of PTH-aminoacids on short RP-columns

En el presente trabajo se describe un procedimiento para la separación de 20 PTH-aminoácidos por cromatografía líquida de alta eficiencia en fase inversa, utilizando una columna de tipo C-8, de 50 mm de largo, que permite una gran economía de disolventes y de tiempo. La separación se completa en 14 minutos y utiliza un gradiente de iso-propanol en acetato de amonio 0,025 M a pH 5,3

Síntesis química de oligonucleótidos por el método de fosfotriéster / Chemical synthesis of oligonucleotides by the phosphotriester approach

En este trabajo se reporta la síntesis química de los desoxioligonucleótidos siguientes: ACTTCTTAACCT, GATCACACATTT, ACACTTCTTTAT, GACAGACTACCT, CTGCTCTGACAACCT, AAATGTCT, AGCATGCT, TCTGAATGACCTGCATTAAAATAT, GTAAAACGACGGCCAGT y AAACCTCATCTGTGT. Estos fueron obtenidos mediante el método del triéster en solución, empleando distintos tipos de agentes de condensación e introduciendo modificaciones en el procedimiento de aislamiento de los productos de reacción. Todos los desoxioligonucleótidos sintetizados fueron purificados, una vez desprotegidos, por cromatografía líquida de alta eficacia en columnas de intercambio iónico y fase inversa sucesivamente y comprobada su secuencia por el método de Maxam y Gilbert