ABSTRACT
Soro de pacientes hansenianos sedimentam aceleradamente hemácias de carneiro formolizadas, o que constitui a reação de Rubino, cuja positividade ocorre nas formas da doença com comprometimento da imunidade celular específica para o M. leprae. Recentemente, identificou-se e isolou-se, através de métodos de precipitação e cromatográfos, o componente sérico responsável pelo fenômeno - fator Rubino - como sendo uma IgM. No presente trabalho a reação foi dissecada, através de caracterização dos componentes moleculares nela envolvidos. A propriedade do fator Rubino/IgM de adsorver-se à superfície da hemácia possibilitou sua purificação em etapa única, sendo sua eluição feita com tampão ácido. Essa adsorção, quando feita com precipitado PEG 10 por cento de soro Rubino positivo, somente ocorreu quando houve suplementação com soro humano normal (SHN). Dessa forma, tornou-se inquestionável a necessidade, previamente sugerida, de um co-fator, contido até mesmo em SHN, para a adsorção do fator Rubino/IgM às hemácias. Visando aumentar a sensibilidade da reação de Rubino, optou-se por revestir os poços de microplacas com hemácias formolizadas, seguindo-se contato com preparações contendo fator Rubino/IgM. As reações foram negativas, o que se constatou ser atribuível a ausência do ligante eritrocíto, eluído por tratamento das monocamadas com metanol. Procedimentos de identificação desse ligante, mostraram ser ele (1) extraído dos estromas com clorofórmio:metanol (1:2); (2) separado na fase orgânica da partição de Floch, (3) separado em cromatografia de camada delgada de alta resolução para fosfolipídios num Rf de 0,2 a 0,4. Esses resultados sugeriam correspondência do ligante eritrocíto com fosfolipídio, o que foi reforçado pela observação de que cardiolipina era capaz de inibir a reação de Rubino. Procedimentos de purificação do co-fator, mostraram ser essa proteína (1) precipitada do soro com polietileno glicol (PEG) na concentração 12 a 20 por cento; (2) recuperada na fração não ligante de proteína A e G; (3) eluída em coluna de troca aniônica Mono Q (pH 8,0) com 20 por cento do gradiente salino (0 a 1 M de NaCI); (4) eluída na gel filtração em Superdex 200, em um volume coincidente com o da BSA.