Estudo da glândula salivar do principal vetor da oncocercose no Brasil, Thyrsopelma guianense (Diptera: Simuliidae): Aspectos morfológicos, bioquímicos e moleculares / Study of salivary gland main vector of onchocerciasis in Brazil, Guyana Thyrsopelma (Diptera: Simuliidae): Morphological, biochemical and molecular

O simulídeo Thyrsopelma guianense é o principal vetor da oncocercose no Brasil, e pouco se conhece sobre a composição e função da saliva em simulídeos. Artrópodes hematófagos contém uma “poção mágica” para interagir com à hemostase, inflamação e imunidade de seus hospedeiros. A glândula salivar de fêmeas de T. guianense é constituída de dois lobos idênticos contendo uma glândula principal (envolvida com a alimentação com sangue) e uma acessória (envolvida com a alimentação com açúcar), a última similar à glândula de macho. A análise histoquímica demonstrou uma saliva é rica em polissacarídeos, proteínas e lipídios principalmente na glândula principal. Essa região contém cavidades secretoras elétron-densas, enquanto, o lúmen da glândula acessória é elétron-lucente. Os homogenados salivares inibiram a coagulação sanguínea, atuando em fXa mas não em trombina. Esses homogenados também apresentaram atividade enzimática de lisozima em pH 7,0.

O sialotranscriptoma isolou e identificou 1.772 transcritos, classificados como secretores (S) (74,7%), celulares (C) (16,2%), produtos de função desconhecida (U) (9%) e elementos de transposição (0,1%). Esse sialotranscriptoma identificou famílias de proteínas ubíquas como antígeno-5, Yellow, domínios ML, lipocalina, lisozima, cecropina, serpina, domínios Kunitz, serino proteases, hialuronidase, apirase, glicosidases, adenosina deaminase e destabilase, além de famílias de proteínas específicas para insetos como Aegyptina e a superfamília D7/OBP. Cerca de 63,4% dos produtos secretores corresponderam a famílias de proteínas encontradas somente em Simulium, como SVEP/Marydilan, proteínas ácidas ricas em His, Sv 7,8 kDa, mucinas, tipo-colágeno, básicas 7-13 kDa, Sv 7,8 kDa, 4,8 kDa, básicas 7,4 kDa, básica 13 kDa e família 5-Cys. Várias famílias de proteínas foram deorfanizadas do sialotranscriptoma de S. nigrimanum como Sn 8-10 Cys W, ácida 28 kDa, básica 28 kD, 19 kDa, básica 8 kDa e Sn básica 4,4 kDa. Transcritos com similaridade para kunitoxina foram encontrados em T. guianense. Observamos um aumento na expressão de transcritos para a classe S e expecionalmente em SVEP, e nos subgrupos síntese de proteína e metabolismo energético da classe C, em relação a outros sialotranscriptomas de Simulium. O proteoma confirmou 28 das 32 famílias de proteínas encontradas no transcriptoma e disponibilizamos 101 sequências de proteínas de interesse para o NCBI. Essa é a primeira descrição de um sialoma (do grego Greek Sialo=saliva) de um vetor de oncocercose. Assim, nossos resultados ajudam no entendimento do papel da saliva de Simulium na transmissão de Onchocerca volvulus e para a evolução de proteínas salivares em simulídeos, além de consistir numa plataforma de novos compostos antihemostáticos e candidatos a vacina contra oncocercose.

Estudo da glândula salivar do principal vetor da oncocercose no Brasil, Thyrsopelma guianense (Diptera: Simuliidae): Aspectos morfológicos, bioquímicos e moleculares

O simulídeo Thyrsopelma guianense é o principal vetor da oncocercose no Brasil, e pouco se conhece sobre a composição e função da saliva em simulídeos. Artrópodes hematófagos contém uma “poção mágica” para interagir com à hemostase, inflamação e imunidade de seus hospedeiros. A glândula salivar de fêmeas de T. guianense é constituída de dois lobos idênticos contendo uma glândula principal (envolvida com a alimentação com sangue) e uma acessória (envolvida com a alimentação com açúcar), a última similar à glândula de macho. A análise histoquímica demonstrou uma saliva é rica em polissacarídeos, proteínas e lipídios principalmente na glândula principal. Essa região contém cavidades secretoras elétron-densas, enquanto, o lúmen da glândula acessória é elétron-lucente. Os homogenados salivares inibiram a coagulação sanguínea, atuando em fXa mas não em trombina. Esses homogenados também apresentaram atividade enzimática de lisozima em pH 7,0.

O sialotranscriptoma isolou e identificou 1.772 transcritos, classificados como secretores (S) (74,7%), celulares (C) (16,2%), produtos de função desconhecida (U) (9%) e elementos de transposição (0,1%). Esse sialotranscriptoma identificou famílias de proteínas ubíquas como antígeno-5, Yellow, domínios ML, lipocalina, lisozima, cecropina, serpina, domínios Kunitz, serino proteases, hialuronidase, apirase, glicosidases, adenosina deaminase e destabilase, além de famílias de proteínas específicas para insetos como Aegyptina e a superfamília D7/OBP. Cerca de 63,4% dos produtos secretores corresponderam a famílias de proteínas encontradas somente em Simulium, como SVEP/Marydilan, proteínas ácidas ricas em His, Sv 7,8 kDa, mucinas, tipo-colágeno, básicas 7-13 kDa, Sv 7,8 kDa, 4,8 kDa, básicas 7,4 kDa, básica 13 kDa e família 5-Cys. Várias famílias de proteínas foram deorfanizadas do sialotranscriptoma de S. nigrimanum como Sn 8-10 Cys W, ácida 28 kDa, básica 28 kD, 19 kDa, básica 8 kDa e Sn básica 4,4 kDa. Transcritos com similaridade para kunitoxina foram encontrados em T. guianense. Observamos um aumento na expressão de transcritos para a classe S e expecionalmente em SVEP, e nos subgrupos síntese de proteína e metabolismo energético da classe C, em relação a outros sialotranscriptomas de Simulium. O proteoma confirmou 28 das 32 famílias de proteínas encontradas no transcriptoma e disponibilizamos 101 sequências de proteínas de interesse para o NCBI. Essa é a primeira descrição de um sialoma (do grego Greek Sialo=saliva) de um vetor de oncocercose. Assim, nossos resultados ajudam no entendimento do papel da saliva de Simulium na transmissão de Onchocerca volvulus e para a evolução de proteínas salivares em simulídeos, além de consistir numa plataforma de novos compostos antihemostáticos e candidatos a vacina contra oncocercose.

Anticoagulant activity in salivary gland homogenates of Thyrsopelma guianense (Diptera: Simuliidae), the primary vector of onchocerciasis in the Brazilian Amazon

In this study, anticoagulant activity was detected in salivary gland homogenates (SGHs) of Thyrsopelma guianense (Diptera: Simuliidae). The SGH yielded 1.07 ìg ± 0.03 (n = 15) of total soluble protein per pair of glands. In addition, following SDS-PAGE (12.5 percent gel) and silver nitrate staining, 12 polypeptides with molecular weights ranging from 14-69 kDa were detected in all physiological ages analyzed (12 h, 24 h, 48 h and 72 h following emergence). Coagulation bioassays showed that the SGHs had activities that interacted at all levels of coagulation (the intrinsic, extrinsic and common pathways), by extending the plasma recalcification time, prothrombin time, thrombin time. This is the first report on the activity of salivary gland proteins from the main vector of onchocerciasis in Brazil. We also suggest detailed studies on the morphology and function of the salivary glands in order to understand the role of these proteins in host/vector interactions.

Haematophagic behavior in laboratory of Lutzomyia cruzi (Mangabeira) (Diptera: Psychodidae) in relation to three mammalian blood sources in Manaus, Brazil

The sand fly Lutzomyia cruzi is considered as one of vectors of visceral leishmaniasis in Brazil. This work examined optimum feeding age, feeding time, host preference, fecundity rates, and female blood meal volume taken by single females from a closed colony of L. cruzi. Mean feeding time was longer on hamsters, 6.6 minutes, than on humans, 5.7 minutes. 49.1 percent of the 48h-old flies fed on humans and 43.3 percent of 72h-old flies fed on hamsters. Of a total of 120 females, 61 percent fed on humans and 25 percent fed on hamsters. Total fecundity was significantly higher in females fed on hamster than on human or opossum. Laboratory-reared L. cruzi females fed earlier, more promptly, and preferably on humans than on hamsters when offered these blood-meal sources simultaneously. The blood-meal volume is higher in females fed on hamsters than other hosts (human and opossum).

O flebotomíneo Lutzomyia cruzi é incriminado como um dos vetores de leishmaniose visceral no Brasil. Foram estudados: a idade ótima, a preferência alimentar, os índices de fecundidade e o volume de alimentação sanguínea realizado com fêmeas de L. cruzi colonizadas em laboratório. O tempo médio de alimentação foi maior em hamster, seguido de humano. Verificou-se que 49,1 por cento das fêmeas alimentaram-se em humano com 48h enquanto em hamster, 43,3 por cento alimentaram-se com 72h. Das 120 fêmeas observadas, 61 por cento realizaram a alimentação em humanos e 25 por cento em hamster. A fecundidade total foi maior nas fêmeas alimentadas em hamster, humano e mucura, respectivamente. Observou-se que fêmeas de L. cruzi colonizadas alimentam-se mais facilmente e preferencialmente em humanos do que em hamster quando ambas as fontes de alimentação são oferecidas simultaneamente. O volume da alimentação sanguínea foi maior nas fêmeas alimentadas em hamster.

Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) em uma vila de exploração de minérios - Pitinga, município de Presidente Figueiredo, Amazonas, Brasil / American Cutaneous Leishmaniasis (ACL) in a mining village - Pitinga, Amazonas, Brazil

A Vila de Pitinga, Presidente Figueiredo/AM, é uma área de exploração de minérios e endêmica para leishmaniose tegumentar americana (LTA). A vila é a sede administrativa e local de moradia de seus funcionários. O comportamento epidemiológico da endemia, avaliado para o período de 2000 a 2004, foi relacionado com as medidas de controle adotadas para reduzir a incidência da doença na área e comparado com o registrado para o município e o Estado do Amazonas. A maior proporção dos casos detectados no período ocorreu no gênero masculino, com atividades laborais de contato com a floresta. O declínio na incidência de casos de LTA na área do estudo, não foi observado como ocorrido no Município e Estado e foi considerado resultante das medidas de controle para a doença, aplicadas na área.

The village of Pitinga, Presidente Figueiredo, AM, is a mining area and endemic for American Cutaneous Leishmaniasis (ACL). The village is the administrative office of the mine and where mining workers live. This study presents the profile of ACL in the 2000-2004 period. The highest prevalence of ACL occurs in male individuals with forest-related activities. The reduction in the number of ACL cases in the study area was not observed in the municipality and the state, a fact probably related to the disease control measures put into practice in the area.