ABSTRACT
O sequenciamento da região ITS2 (espaço interno transcrito) do rDNA foi utilizado para identificar duas espécies próximas de Trichogramma: T. rojasi e T. lasallei, esta última recentemente constatada no Brasil. O DNA das amostras foi extraído utilizando-se Chelex 100. O produto de PCR foi ligado ao vetor pGEM-T ® e ambos foram então acondicionados em placas de Petri para o crescimento de colônias brancas, o que constata a ligação correta entre o vetor e o DNA. A partir dessas colônias, uma pequena quantidade (10æl) foi purificada utilizando material específico e seqüenciada. As seqüências foram alinhadas pelo programa ESEE 3.0. Os primers específicos utilizados para a amplificação do rDNA da região ITS2 das espécies de Trichogramma estudadas foram eficientes. O sequenciamento das duas espécies diferiu em comprimento e posição dos nucleotídeos, mostrando que são distintas. Os resultados mostraram que esta é uma boa técnica para identificação de espécies crípticas de Trichogramma, difíceis de identificar quando são utilizados apenas caracteres morfológicos.
The sequence of the ITS2 (internally transcribed spacer 2) region of the rDNA was used to identify two closely related Trichogramma species: T. rojasi and T. lasallei, the second species recently reported in Brazil. The DNA of the samples was extracted using Chelex 100. The PCR product was linked to a pGEM-T® vector and both were then placed into Petri dishes to grow white colonies, which demonstrate the correct ligation between the vector and the DNA. From these colonies, 10æl were purified and sequenced using a special kit, and the sequences aligned using the ESEE 3.0 software. Specific primers were efficient to amplify the ITS2 rDNA region of the Brazilian Trichogramma. The sequence of each species differed in length and in nucleotide position, showing that they are distinct. Thus, the results show that this technique is a good tool to identify Trichogramma cryptic species, otherwise difficult to identify when using only morphological characters.
ABSTRACT
For the first time in Brazil, Wolbachia was detected in Trichogramma using PCR with the wsp specific primer. A Trichogramma atopovirilia Oatman & Platner population was colected in Helicoverpa zea Boddie (Lepidoptera: Noctuidae) eggs at Embrapa/Sete Lagoas. The results showed that the amplification of DNA bands, confirms the presence of Wolbachia on the analysed population. The presence of this a-proteobacteria will contribute for the correct choice on which population will be used for applied biological control programs against lepidopterous pests.
Identificou-se pela primeira vez no Brasil a presença de Wolbachia em Trichogramma através de um PCR com o primer específico wsp. A população de Trichogramma atopovirilia Oatman & Platner foi coletada na Embrapa Milho e Sorgo, em ovos de Helicoverpa zea Boddie (Lepidoptera: Noctuidae). Os resultados mostraram através da amplificação de bandas de DNA, a confirmação da presença de Wolbachia na população em estudo. A presença dessa a-proteobactéria irá contribuir para a escolha da população correta a ser utilizada em programas de controle biológico aplicado contra lepidópteros pragas.
ABSTRACT
Utilizando-se o sequenciamento da região ITS2 do DNA ribossomal juntamente com algumas enzimas de restrição, pôde-se construir uma chave molecular simples e precisa de algumas espécies brasileiras de Trichogramma. Esta chave é fácil de ser elaborada e resultados rápidos são obtidos na identificação desse pequeno parasitóide (0,25 mm). Usando-se essa metodologia, pode-se também verificar possíveis contaminações em criações de laboratório.
Using the ITS2 sequences of the ribosomal DNA together with some restriction enzymes, a simple and precise molecular key to some Brazilian species of Trichogramma was created. This key is very easy to make and quick results can be obtained on the identification of this minute parasitoid (0.25 mm). The methodology presented is easily implemented and can be used to detect possible contaminations under laboratory rearings.