Effect of EDTA on TGF-ß1 released from the dentin matrix and its influence on dental pulp stem cell migration

Abstract: Bioactive molecules stored in dentin, such as transforming growth factor beta1 (TGF-b1), may be involved in the signaling events related to dental tissue repair. The authors conducted an in vitro evaluation of the amount of TGF-b1 released from dentin slices after treatment with 10% ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), 2.5% sodium hypochlorite (NaOCl) or phosphate-buffered saline (PBS), and the effect of this growth factor on stem cell migration from human exfoliated deciduous teeth (SHED). Sixty 1-mm-thick tooth slices were prepared with or without the predentin layer, and treated with either 10% EDTA for 1 minute, 2.5% NaOCl for 5 days or kept in PBS. Tooth slice conditioned media were prepared and used for TGF-b1 ELISA and migration assays. Culture medium with different concentrations of recombinant human TGF-b1 (0.5, 1.0, 5.0 or 10.0 ng/mL) was also tested by migration assay. The data were evaluated by ANOVA and Tukey's test. Optical density values corresponding to media conditioned by tooth slices either containing or not containing the predentin layer and treated with 10% EDTA were statistically greater than the other groups and close to 1 ng/mL. Increased rates of migration toward media conditioned by tooth slices containing the predentin layer and treated with PBS, 10% EDTA or 2.5% NaOCl were observed. Recombinant human TGF-b1 also stimulated migration of SHED, irrespective of the concentration used. EDTA may be considered an effective extractant of TGF-b1 from the dentin matrix. However, it does not impact SHED migration, suggesting that other components may account for the cell migration.

Detecção de RNA de Leischmania(Leishmania) infantum chagasi em pulgas e carrapatos coletados de cães naturalmente infectados e padronização de uma PCR em tempo real para diagnóstico e diferenciação de espécies de Leishmania / Detection of RNA of Leishmania(Leishmania) infantum chagasi in fleas and ticks collected from naturally infected dogs and standardization of a real-time PCR for diagnois and differentiation of leishmana species

A leishmaniose visceral americana (LVA) é um sério problema de saúde pública. No período de 2003 a 2009 foram registrados no Brasil mais de 34 mil casos de leishmaniose visceral. Até a década de 80, a maioria dos casos concentrava-se em áreas rurais dos municípios. Esse perfil mudou e vários casos são notificados nas áreas urbanas. No Estado de São Paulo a doença é autóctone desde 1998. A partir de 2003 foram registrados também casos autóctones caninos nas redondezas da região metropolitana de São Paulo. Uma das formas de se avaliar a propagação da infecção é o estudo dos transmissores. Embora Lutzomyia longipalpis seja uma espécie prevalente em zonas urbanas, tem sido a única responsável pela transmissão na área urbana dos municípios da região Oeste do Estado. Contudo, na Região Metropolitana de São Paulo a sua presença ainda não foi detectada. Este fenômeno leva a supor que outra espécie de flebotomíneos ou outros ectoparasitas de cães como os carrapatos Rhipicephalus sanguineus e as pulgas Ctenocephalides felis felis possam estar envolvidos na transmissão da LVA. Este estudo mostra que os cães estão densamente infestados por pulgas e carrapatos em todos os estádios evolutivos. Além disso, material genético positivo para L. (L.) infantum chagasi, foi encontrado no interior desses ectoparasitas com uma positividade variando de 53,1% nas pulgas a 77,7% nas ninfas, inclusive após a ecdise de ninfa para o estádio adulto sugerindo a capacidade dos carrapatos de preservar parasitas vivos. Com a utilização da PCR em tempo real, foi possível quantificar o DNA presente no interior dos ectoparasitas. A PCR em tempo real single se mostrou eficiente na detecção de espécies do subgênero Leishmania e com a PCR multiplex foi possíveldiferenciar entre as espécies dos subgênero Viannia e as do complexodonovani. O marcador molecular (CY5) da PCR em tempo real multiplex foicapaz detectar todas as espécies de Leishmania spp analisadas sendo útilpara detectar...

Importance of high IgG anti-Toxoplasma gondii titers and PCR detection of T. gondii DNA in peripheral blood samples for the diagnosis of AIDS-related cerebral toxoplasmosis: a case-control study

BACKGROUND: Cerebral toxoplasmosis (CT) continues to cause significant morbidity and mortality in human immunodeficiency virus (HIV)-infected patients in Brazil. In clinical practice, the initial diagnosis is usually presumptive and alternative diagnosis tools are necessary. Our objective was to evaluate whether the detection of high titers of IgG anti-Toxoplasma gondii and T. gondii DNA in blood samples are associated with the diagnosis of CT. METHODS: In this case-control study we included 192 patients with HIV-1 infection: 64 patients with presumptive CT (cases) and 128 patients with other diseases (controls). Blood samples to perform indirect immunofluorescense reaction (IFI) to detect anti-T. gondii IgG antibodies and polymerase chain reaction (PCR) were collected before or within the first three days of anti-Toxoplasma therapy. Two multivariate logistic regression models were performed: one including the variable qualitative serology and another including quantitative serology. RESULTS: In the first model, positive IgG anti-T. gondii (OR 4.7, 95 percent CI 1.2-18.3; p = 0.027) and a positive T. gondii PCR result (OR 132, 95 percent CI 35-505; p < 0.001) were associated with the diagnosis. In the second model, IgG anti-T. gondii titres > 1:1024 (OR 7.6, 95 percent CI 2.3-25.1; p = 0.001) and a positive T. gondii PCR result (OR 147, 95 percent CI 35-613; p < 0.001) were associated with the diagnosis. CONCLUSIONS: Quantitative serology and molecular diagnosis in peripheral blood samples were independently associated with the diagnosis of CT in HIV-infected patients. These diagnostic tools can contribute to a timely diagnosis of CT in settings where Toxoplasma infection is common in the general population.

Validação dos diagnósticos molecular e sorológico da toxoplasmose cerebral em pacientes com aids / Validation of dianosis molecular and serological of the cerebral toxoplasmosis in patients with aids

A toxoplasmose é uma das mais comuns infecções parasitárias com alta prevalência em humanos. É uma infecção de caráter oportunista que acomete principalmente mulheres grávidas e pode ameaçar a vida dos pacientes imunocomprometidos, principalmente aqueles com a síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS). Ela é causada por Toxoplasma gondii, um protozoário parasita intracelular obrigatório. A doença pode causar danos graves no sistema nervoso central pela ocorrência da encefalite toxoplásmica. A doença cerebral era uma rara infecção antes da epidemia da AIDS, tornando-se a causa mais comum de lesões expansivas intracranianas e a terceira doença definidora de AIDS. Este estudo avaliou o diagnóstico molecular e imunológico da toxoplasmose cerebral e determinou os perfis sorológicos dos pacientes. Foram analisadas as 256 amostras obtidas de 207 pacientes divididos em dois grupos. O grupo I foi composto de 64 pacientes com toxoplasmose cerebralobtendo um total de 82 amostras (64 de sangue e 18 de LCR). O grupo II foi composto de 143 pacientes com outras doenças oportunistas, sendo 95 neurológicas e 79 doenças sistêmicas, obtendo um total de 174 amostras(128 de sangue e 46 de LCR). A análise molecular das amostras foi realizada pela reação da polimerase em cadeia (PCR), utilizando iniciadores B22 e B23 do gene B1, e a análise imunológica pela imunofluorescênciaindireta (IFI) e pela reação imunoenzimática (ELISA). A PCR mostrou ser igualmente sensível e muito mais específica que os testes imunológicos na análise das amostras de LCR e sangue. O grave envolvimento neurológico na maioria dos pacientes estudados e a altaprevalência de toxoplasmose no Brasil podem ter contribuído para o aumento da sensibilidade da PCR. Os perfis sorológicos dos pacientes do grupo I apresentaram títulos significativamente mais altos daqueles encontrado no grupo II, e sugerem a presença da toxoplasmose cerebral ou um alto risco de desenvolver a doença. Apenas dois pacientes apresentaram ...

Validação dos diagnósticos molecular e sorológico da toxoplasmose cerebral em pacientes com aids

A toxoplasmose é uma das mais comuns infecções parasitárias com alta prevalência em humanos. É uma infecção de caráter oportunista que acomete principalmente mulheres grávidas e pode ameaçar a vida dos pacientes imunocomprometidos, principalmente aqueles com a síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS). Ela é causada por Toxoplasma gondii, um protozoário parasita intracelular obrigatório. A doença pode causar danos graves no sistema nervoso central pela ocorrência da encefalite toxoplásmica. A doença cerebral era uma rara infecção antes da epidemia da AIDS, tornando-se a causa mais comum de lesões expansivas intracranianas e a terceira doença definidora de AIDS. Este estudo avaliou o diagnóstico molecular e imunológico da toxoplasmose cerebral e determinou os perfis sorológicos dos pacientes. Foram analisadas as 256 amostras obtidas de 207 pacientes divididos em dois grupos. O grupo I foi composto de 64 pacientes com toxoplasmose cerebralobtendo um total de 82 amostras (64 de sangue e 18 de LCR). O grupo II foi composto de 143 pacientes com outras doenças oportunistas, sendo 95 neurológicas e 79 doenças sistêmicas, obtendo um total de 174 amostras(128 de sangue e 46 de LCR). A análise molecular das amostras foi realizada pela reação da polimerase em cadeia (PCR), utilizando iniciadores B22 e B23 do gene B1, e a análise imunológica pela imunofluorescênciaindireta (IFI) e pela reação imunoenzimática (ELISA). A PCR mostrou ser igualmente sensível e muito mais específica que os testes imunológicos na análise das amostras de LCR e sangue. O grave envolvimento neurológico na maioria dos pacientes estudados e a altaprevalência de toxoplasmose no Brasil podem ter contribuído para o aumento da sensibilidade da PCR. Os perfis sorológicos dos pacientes do grupo I apresentaram títulos significativamente mais altos daqueles encontrado no grupo II, e sugerem a presença da toxoplasmose cerebral ou um alto risco ...