Metabolitos con actividad antiviral aislados de Curvularia pallescens / Antiviral activity metabolites isolated from Curvularia pallescens

The strain BAFC 2336 of Curvularia pallescens is a hyphomycete isolated from internal fungi present in leaves and stems of Baccharis coridifolia. Three compounds designated B, D1 and D2 which inhibited the replication of vesicular stomatitis virus (VSV) and herpes simplex virus type 1 (HSV-1) in tissue cultures were isolated from fluid cultures of Curvularia pallescens. The purification procedure of the compounds consisted first in an organic solvent extraction followed by chromatography through a silica gel column. Fractions eluted from the column with antiviral activity were pooled and then subjected to thin layer chromatography (TLC) in silica gel plates. Three isolated bands were recognized with Rf of 0.63, 0.36 y 0.33 for B, D1 and D2, respectively. The chromatographic characteristics of the isolated metabolites were determined by TLC and HPLC and their chemical structure by means of spectroscopic methods. Analysis of the data obtained indicated that compound D2 (MW: 280 Da) is identical with Brefeldin A a macrolide with antiviral activity isolated from other fungi but not reported to be present in Curvularia pallescens. Compound D1 is similar in structure to compound D2; however, the low amount obtained after purification unabled us to obtain complete structural characterization. Compound B (MW: 332 Da) has an aromatic ring and a chemical structure related to curvularins, a generic name for certain metabolites from Curvularia. This compound appears to be a novel compound with antiviral potency similar to Brefeldin A, but less toxic.

Determinación de la actividad antiviral de un xilomanano sulfatado de origen natural en distintas condiciones experimentales / Determination of the antiviral activity of a natural sulphated xylomannan under different experimental conditions

Se analizó la influencia de distintas condiciones experimentales sobre la determinación de la actividad antiviral del xilomanano sulfatado F6, aislado del alga roja patagónica Nothogenia fastigiata, sobre la multiplicación de los virus herpes simplex tipos 1 y 2 (HSV-1 y HSV-2). En las condiciones ensayadas, la concentración inhibitoria 50 por ciento (CI50) de F6 resultó independiente de la multiplicidad de infección (en el rango 0,1-0,0001 UFP/célula), del tipo de ensayo antiviral empleado (inhibición del rendimiento viral o reducción en la formación de placas), de la cepa de virus (F, KOS, B2006, Field) y de la línea celular (Vero, HEp-2, BHK-21). La independencia del efecto inhibitorio de F6 respecto de la multiplicidad de infección representa una ventaja para este polisacárido respecto de otros compuestos antivirales que sólo son activos frente a muy bajas dosis de virus

Susceptibilidad de Picornavirus a un antiviral de origen vegetal (Meliacina) / Susceptibility of picornaviruses to an antiviral of vegetal origin (meliacine)

La planta superior Melia azederach L (MA) produce un polipéptido cíclico que puede aislarse de sus hojas y que tiene un amplio espectro antiviral contra virus con RNA de distintas familias. En este trabajo se estudió su efecto sobre dos Picornavirus: el virus fiebre aftosa (VFA) y el virus polio. Para ello se probaron las cepas A24, A87, C3 Resende, O1 Campos, O1 Caseros y O69 del VFA y los tipos 1, 2 y 3 del virus polio. Se encontró que las cepas muestran una susceptibilidad diferencial a una concentración no citotóxica del antiviral de 0,3 µg/ml, siendo las cepas A24 y A87 las más susceptibles ya que resultaron inhibidas en un 90 por ciento. Para que ello ocurra el extracto de MA debe agregarse después de la adsorción viral y conservarse en el medio de cultivo hasta la cosecha de virus ya que con todas las cepas ensayadas el pretratamiento de las monocapas no resultó efectivo. Para determinar la influencia de la multiplicidad de infección (m.i.) en la diferente susceptibilidad observada se eligió la cepa O1 Campos del VFA y la tipo 3 de polio que resultaron ser poco sensibles cuando se usó una m.i. de 1, encontrándose una inhibición del 99 por ciento para ambos virus a una m.i. de 0,001. Estos resultados indican que los Picornavirus también son susceptibles a la inhibición por meliacina, que dicha inhibición varía con la cepa ensayada y que la aparente resistencia de estos virus estaría relacionada con la velocidad del ciclo de replicación, el que es superior al establecimiento del estado antiviral, cuando todas las células son infectadas simultáneamente

Ensayos de citotoxicidad y actividad antiviral de extractos crudos y semipurificados de hojas verdes de Melia azedarach L / [Assays of cytotoxicity and antiviral activity of crude and semipurified extracts of green leaves of Melia azedarach L.]

Crude extracts from fresh green leaves of Melia azedarach L contain an antiviral factor (FAV) able to inhibit the replication of several animal viruses, e.g. Polio, VSV, HSV, FMDV, Sindbis, Junín, Pichinde and Tacaribe in Vero or BHK-21 cells. Crude preparations were subjected to different steps of purification like chromatography on Sephadex G-100 and DEAE-Sephadex. The antiviral activity of G-100 and DEAE fractions was fully conserved, whereas contaminating proteins were lost. Two types of cytotoxicity tests were performed with the different fractions. Two-fold serial dilutions of each of them were added to preformed monolayers of Vero or BHK-21 cells and cellular viability was tested. While crude extracts were toxic at low dilutions (less than or equal to 1:10), G-100 and DEAE fractions were not. The other cytotoxicity assay consisted in seeding the cells in the presence of different concentrations of each fraction. G-100 fraction affected cell growth at low dilutions (less than or equal to 1:5), while DEAE fraction did not. It should be remarked that the purification procedure rendered a partial purified DEAE fraction with an increased specific activity (antiviral activity/mg of protein). It is concluded that an antiviral factor devoid of toxicity exists in M. azedarach L extracts, which exhibited a broad spectrum of antiviral activity.

Influencia de la célula huésped en las reacciones de neutralización cruzada entre virus Junín y Tacaribe / Effect of the host cells in the crossed neutralization reactions between Junín and Tacaribe viruses

La inoculación de virus Tacaribe proveniente de cerebro de ratón lactante induce en el cobayo la aparición de anticurepos neutralizantes heterólogos anti-virus Junín. En este trabajo se trató de establecer si dichos anticuerpos neutralizantes estaban dirigidos contra antígenos celulares arrastados por los viriones al brotar o contra antígenos codificados por el genoma ciral. Con este fin de prepararon stocks de ambos virus en distintos huépedes (cerebro de ratón lactante, células Vero y RK13). Se inocularon cobayos con 1000 DICT50 de cada uno de los stocks de virus Tacaribe y 66 días más tarde se desafiaron con 1000 DL50 de virus Junín provenientes de cerebro de ratón. A los 30, 60 y 80 días p.i. con virus Tacaribe, se sangraron los animales y los inmunosueros obtenidos se ensayaron en reacciones directa y cruzada enfrentando a los virus Tacaribe y Junín crecidos en los distintos huésédes. Los resultados mostraron que en todos los casos los títulos de los sueros fueron mayores cuando se realizó la neutralización usando como antígeno virus que había multiplicado en el mismo huésped que el empleado para inmunizar a los animales. Sin embargo, el hecho que inmunosueros provenientes de animales inoculados con virus Tacaribe pudieran neutralizar al virus Junín cuando ambos virus provinieron de distintos huéspedes descarta la posibilidad que los anticurepos heterólogos encontrados en estos animales en el día 60 p.i. con Tacaribe estén dirigidos solamente contra antígenos celulares. Por el contrario dichos anticuerpos neutralizantes parecen estar dirigidos contra antígenos codificados por el genoma viral, confirmando las estreschas relaciones antigénicas existentes entre ambos virus

Inmunizacion de cobayos contra la fiebre hemorragica argentina con virus Tacaribe replicado en celulas diploides humanas. / Inmunization of guinea pigs against Argentinian hemorrhagic fever with Tacaribe virus replicated in human diploid cells

En trabajos anteriores se ha demonstrado claramente que la inoculacion de virus Tacaribe proveniente de cerebro de raton lactante protege al cobayo contra el desafio con dosis letales de virus Junin. En este trabajo se presentan los resultados obtenidos cuando se emplea como antigeno imunizante virus Tacaribe crecido en celulas diploides humanas, sustrato permisible para vacunas atenuadas de uso humano. La semilla de virus Tacaribe empleada en este trabajo para inmunizar los animales se preparo en celulas MCR-5, derivadas de tejido de pulmon de feto humano masculino de 14 semanas. Dicha semilla consistio en los sobrenadantes de celulas infectadas de los dias 3, 4 y 5 post-infeccion, con un titulo de 1 x 10 a quarta UFP/ml. La inoculacion de una sola dosis de 10 a quarta UFP de virus Tacaribe otorgo proteccion total al grupo de 10 cobayos estudiados, no registrandose morbilidad ni mortalidad frente al desafio, 90 dias mas tarde, com 1000 DL50 de virus Junin, cepa XJ. En dichos animales se detectaron anticuerpos neutralizantes anti-Tacaribe a partir de los 20 dias pi, y fueron aumentando en forma exponencial hasta llegar a un nivel estacionario alrededor de los 90 dias. Por el contrario, no se han podido detectar anticuerpos neutralizantes anti-Junin ni aun despues del desafio con dicho virus.Se plantea la posibilidad de distintos mecanismos responsables de la proteccion observada, que confirma la posibilidad del empleo del virus Tacaribe como vacuna contra la FHA

Condiciones optimas para el mantenimiento de la infectividad del virus Tacaribe ante las variaciones de temperatura. / Optima conditions for the maintenance of the infectivity of Tacaribe virus in face of difference of temperature

Se estudio la estabilidad del virus Tacaribe a distintas temperaturas de conservacion y procesos de congelacion y descongelacion. Se demostro la conveniencia del agregado de agen tes estabilizadores a las preparaciones de vi rus, ya sea suero o albumina. En esas condiciones, puede mantenerse el virus Tacaribe a -70 grados C durante varios meses sin perdida significativa de infectividad, la que se conserva aun despues de cuatro descongelaciones sucesivas. Si la temperatura de conservacion es de -16 grados C o 4 grados C, la necesidad del agregado de proteinas estabilizantes resulta mas evidente, en presencia de suero se necesitan mas de 40 dias a -16 grados C o 4 grados C para lograr inactivacion total, mien tras que en solucion salina sin proteinas se inactiva totalmente en 3 dias. La inactivacion del virus Tacaribe es completa luego de 48 horas a 25 grados C o 37 grados C o 10 minutos a 56 grados C