ABSTRACT
In order to facilitate the detection of apoptotic cells (Apo C) in Rubella virus (RV) infected cultures in settings of low resources, we compared hematoxylin and eosin staining (H&E) with the conventional TUNEL technique, and confirmed our findings with DNA electrophoresis and transmission electron microscopy. H&E allowed to distinguish Apo C from non-apoptotic cells. The proportion of Apo C in infected cultures was proportional to the multiplicity of infection (MOI). At a MOI of 10, the percent of Apo C at 3, 4 and 5 days post infection (pi) were 26, 45 and 47
, respectively, which were significantly reduced when the caspase inhibitor z-VAD-fmk was present in the supernatant. By the TUNEL assay, the percent of Apo C in RV-infected cultures were lower (0.8, 1.2 and 1.2
at 3, 4 and 5 days pi, respectively). Our results have shown that H&E staining is an easy, rapid, economic and reproducible method to detect Apo C in RV infected Vero cells cultures. It is possible that H&E makes evident early stages of apoptosis, when an apoptotic cell shows chromatin condensation, nuclear and cytoplasmic contraction (but is still attached to the monolayer), while TUNEL detects later stages of apoptosis because it needs an extensive DNA fragmentation, when apoptotic cells are about to or have already detached from the substratum.
ABSTRACT
Two monoclonal antibodies (MnAb) directed against the lipopolysaccharide (LPS) and major outer membrane protein (MOMP) of Chlamydia trachomatis were produced for use in indirect immunofluorescence (IFI). The specificity of the antibodies was determined by Dot-blot, Immunoblotting (IB) and IFI onto culture cells infected with C. trachomatis and IFI onto commercial swabs (MRL). The MnAb 2D3 and 3C2 detected LPS and MOMP of C. trachomatis, respectively, by different methods. Neither MnAb showed cross-reactions when other gram-negative bacteria were used as antigens.
ABSTRACT
El síndrome de rubéola congénita (CRS) puede ser fácilmente evitado si las mujeres en edad gestacional conocen su estado inmune y, en caso de ser seronegativas, reciben la vacunación previa al embarazo. Con el objetivo de determinar el estado inmune de grandes poblaciones se adoptó un método sencillo para la recolección y el almacenamiento de las muestras de sangre. A un total de 100 pacientes se les extrajo suero y sangre que fue absorbida en un círculo de papel de filtro, que capta aproximadamente 0,1 ml de suero. Fueron analizados los títulos de anticuerpos inhibidores de la hemaglutinación (TIH). En las muestras de papel, luego de ser almacenada en bolsas plásticas a 25 grados centígrados durante 7, 14, 21, 30, 60 y 100 días, con respecto a los sueros de cada paciente. De las muestras de sangre obtenidas en el papel de filtro a los 30 días de realizada la extracción, el 72 o/o tuvo el mismo TIH y el resto poseía una dilución de diferencia en relación con los sueros correspondientes. De las muestras ensayadas a los 60 días de extracción un 59 o/o tuvo el mismo TIH y el 41 o/o una dilución de diferencia. A los 100 días de extracción, el 51 o/o de las muestras tuvieron el mismo TIH, el 38 o/o una dilución de diferencia y el 11 o/o tuvieon 1 o más de una dilución de diferencia. En conclusión, los resultados de ese estudio mostraron que las muestras de sangre recolectadas sobre papel de filtro pueden ser usadas para la detección de anticuerpos antivirus rubéola determinados por IHA dentro de los 30 días post-obtención con una sensibilidad y especificidad del 100 o/o. Esta muestra en papel es estable a temperatura ambiente, sin ninguna restricción de aire o esterilización especial