Mecanismos de resistencia en micobacterias de crecimiento rápido / Resistance mechanisms of rapid growing mycobacteria

Las Micobacterias de crecimiento rápido (MCR) son patógenos oportunistas capaces de ocasionar infecciones en piel, pulmonares y diseminadas. En Venezuela existe un incremento de estas infecciones derivadas de procedimientos invasivos, entre ellas cirugías estéticas. El tratamiento de esas infecciones requiere la administración de al menos dos antibióticos por varios meses. En la presente revisión se describe los mecanismos de resistencia a los antibióticos que se han reportado en las MCR, principalmente las tres especies que frecuentemente se han asociado a infecciones en piel: M. abscessus, M. chelonae y M. fortuitum. Los factores más importantes relacionados a la resistencia en los esquemas de tratamiento son: cambios relacionados en la permeabilidad de la membrana al antibiótico, la inactivación enzimática y modificaciones del sitio blanco. En MCR se han evidenciado la presencia de betalactamasas con actividad penicilinasas y cefalosporinasas y de acetil-transferasas que pueden modificar los aminoglicósidos. Las modificaciones de las regiones ARNr 23S y ARNr 16S han permitido explicar, en parte, la resistencia a macrólidos y aminoglicósidos. La metilación de los sitios blanco de acción de los macrólidos es otro factor importante, sobre todo en especies como M. abscessus. Éste último mecanismo explica la falla terapéutica que se ha reportado en pacientes tanto en infecciones pulmonares como en infecciones en piel. Es necesario ampliar el estudio sobre los mecanismos de resistencia en estas especies, tomando en consideración las complicaciones que llevan estas infecciones y los tiempos prolongados de tratamientos pudiendo generar efectos secundarios en los pacientes y la frustración cuando ocurre la falla terapéutica.

The rapid growing mycobacteria (RGM) are opportunist pathogens able to cause skin, pulmonary and disseminated infections. In Venezuela there is an increase in the prevalence of these infections especially following esthetic surgery. The treatment of such infections is cumbersome requiring the administration of at least two antibiotics for several months. In the present review we describe the principal antibiotic resistance mechanisms reported for RGM, particular for the species most frequently associated with skin and soft tissue infection: M. abscessus, M. chelonae and M. fortuitum. The most important factors associated with resistance to antibiotics are impermeability of the cell membrane, enzymatic inactivation and changes in the target site. In RGM the presence of the beta-lactamases with penicillinases and cephalosporinase activity has been demonstrated and the presence of acetyl-transferases which can modify aminoglycosides. Changes in the 23S rRNA and 16S rRNA regions has allowed to explain, partly macrolide and aminoglycoside resistance. Mutation in the macrolide target site is another important resistance mechanism, particularly for the species group M. abscessus. This last mechanism can explain treatment failure reported in the patients with pulmonary or skin infection. We conclude that there is a need for more extensive studies about the mechanisms of antibiotic resistance of RGM; taking into account the complications of these infections, the prolonged treatment long time, producing secondary effects and the frustrations of patient and physician caused by therapeutic failures.

Diseño del kit de tinción Ziehl Neelsen del Instituto nacional de Higiene "Rafael Rangel" / Design Kit Ziehl Neelsen the Instituto Nacional de Higiene "Rafael Rangel"

La tinción de Ziehl Neelsen (ZN), es una técnica de coloración de microorganismos para la identificación de patógenos, como Mycobacterium tuberculosis causante de la tuberculosis, que requiere de tres (03) soluciones: Carbol Fucsina Fenicada (Fucsina Básica), Azul de Metileno al 1% y Solución Decolorante, que se elaboran en la Sección de Reactivos y Colorantes del Instituto Nacional de Higiene "Rafael Rangel" y se emplean en el diagnóstico de tuberculosis. Esta investigación surgió con el propósito de comprobar el tiempo de caducidad y condiciones de almacenamiento de dichos productos y presentarlos en un estuche tipo kit para su distribución, en apoyo a la Red Nacional de Laboratorios de Salud Pública y comercialización con otros entes. Se realizó el ensayo de tres (3) lotes del kit de Ziehl Neelsen; con su respectiva contramuestra que fue evaluada en el análisis final. Se registraron los parámetros físicos de temperatura y humedad relativa bajo condiciones normales de almacenamiento en el laboratorio, con las muestras protegidas de la luz. Se evaluó la funcionalidad por medio de la tinción ZN observada bajo microscopio, de tres (03) muestras con ATCC 700686: M. peregrinum y ATCC 29213: S. aureus por lote; tomando en cuenta el exceso de colorante, y la definición de las coloraciones. Estas evaluaciones se realizaron durante dos (02) años encontrándose como resultado que física y funcionalmente los productos contentivos en el kit se mantenían estables, fijándose un tiempo de caducidad de dos (02) años.

Ziehl Neelsen (ZN) is a staining technique of microorganisms for the identification of pathogens as Mycobacterium tuberculosis, causative of tuberculosis, which requires three (03) solutions: Carbol Fuchsin combined with Phenol (Basic Fuchsin), Methylene Blue 1% and Bleaching solution, which are prepared in Section of Reagents and Coloring of the Instituto Nacional de Higiene "Rafael Rangel" and are used in the diagnosis of tuberculosis. This investigation was made with the purpose of checking the shelf life and storage conditions of these products and present them in a kit type container for distribution in support of the National Network of Public Health Laboratories and marketing with other entities. The analysis was performed in three (3) batches of the Ziehl Neelsen kit; with their respective counter sample that was evaluated in the final analysis. The physical parameters of temperature and relative humidity were recorded in the laboratory under normal storage conditions with samples protected from light. The functionality was evaluated through ZN staining being observed under a microscope three (03) samples with ATCC 700686: M. peregrinum and ATCC 29213: S. aureus by Batch; taking into consideration the excess dye, and the definition of the colors. These evaluations were conducted for two (02) years found as main result that physically and functionally the products in the kit were stable, and can set an expiration time of two years.

Mycobacterium tuberculosis: espoligotipos en el Estado Carabobo, Venezuela / Mycobacterium tuberculosis: spoligotypes in the Carabobo State, Venezuela

In order to study the genetic variability oí Mycobacterium tuberculosis circulating in the Carabobo State at Venezuela, 317 strains of M. tuberculosis isolated from patients living in different health districts whose acid fast smears were positive, were included. Each strain was characterized by spoligotyping and the pattern compared with the national and worldwide SpolDB4.0 databases; 220 isolates (69.4 percent) were grouped in 24 clusters, being LAM the most common family (34 percent). In contrast to other Venezuelan regions, the most common Carabobo spoligotype was number 605, with 46 isolates (14.5 percent). In addition, there were 97 (30.6 percent) orphan spoligotypes, 19 of which are found in SpolDB4.0, and 78 non described. Co-infection with human irnmunodeficiency virus was detected in 11 patients (3.5 percent). These results show high genotypic variability of M. tuberculosis in the región, contributing with new information for a better understanding of tuberculosis transmission in Venezuela.

Con el objeto de estudiar la variabilidad genética de las cepas de Mycobacterium tuberculosis circulantes en el Estado Carabobo, Venezuela, se empleó la técnica de spoligotyping para caracterizar 317 cepas de M. tuberculosis aisladas de pacientes con baciloscopia y cultivo positivo, residentes en diferentes distritos sanitarios. Los espoligotipos obtenidos se contrastaron con la base de datos nacional y mundial (SpolDB4.0); 220 aislados (69,4 por ciento) se agruparon en 24 clusters, con predominio de la familia LAM (34 por ciento). A diferencia de otras regiones venezolanas, el espoligotipo 605 fue el más frecuente con 46 aislados (14,5 por ciento). Se identificaron 97 (30,6 por cientoo) aislados únicos, 19 reportados en SpolDB4.0 y 78 no descritos. Co-infección con el virus de inmunodeficiencia humana se detectó en 11 pacientes (3,5 por cientoo). Los resultados son un aporte al estudio de la transmisión de la tuberculosis a nivel regional y nacional y sugieren que existen diferencias regionales en las cepas más comunes. La cepa 605, poco común fuera de Venezuela, requiere de estudios epidemiológicos adicionales.