ABSTRACT
El objetivo del presente trabajo fue comparar la detección de ADN de Trypanosoma cruzi mediante PCR en tiempo real (qPCR) y PCR convencional en sangre periférica (n=25) y músculo esquelético (n=20) de ratones tratados con drogas tripanomicidas luego de 6 meses post-tratamiento. En las muestras de sangre se detectaron un total de 7 positivas por qPCR, mientras que por PCR convencional sólo se detectaron 2. En músculo esquelético, 15 muestras fueron positivas por qPCR y 3 por PCR convencional. Los resultados obtenidos demuestran que la fuerza de concordancia es débil entre las técnicas de PCR utilizadas para la detección de ADN de T. cruzi (k=0,37; 49% positivas por qPCR vs. 11% por PCR convencional, p=0,0001). En las muestras de sangre, los valores diagnósticos de qPCR con respecto a la PCR convencional fueron: 100% sensibilidad; 78% especificidad; 30% VPP; 100% VPN; 4,6 RVP; 0 RVN. Para las muestras de músculo esquelético se obtuvieron los siguientes valores diagnósticos de qPCR: 100% sensibilidad; 29% especificidad; 20% VPP; 100% VPN; 1,4 RVP; 0 RVN. Ambas técnicas fueron igualmente sensibles en el rango de mediana-alta concentración, pero qPCR fue más efectiva para detectar bajas cargas parasitarias, en particular en las muestras de tejido.
The aim of this work was to compare detection of Trypanosoma cruzi DNA by real time (qPCR) and conventional PCR in peripheral blood (n=25), and skeletal muscle (n=20) of mice treated with trypanocidal compounds after 6 months post-treatment. A total of 7 blood samples were positive by qPCR; whereas, by conventional PCR only 2 were detected. In skeletal muscle, 15 samples were regarded positive by qPCR and 3 by conventional PCR. These results showed a weak concordance strength among PCR techniques employed to detect T. cruzi DNA in the studied samples (k=0.37; 49% positives by qPCR vs. 11% by conventional PCR, p=0.0001). In blood samples, qPCR diagnostic values in comparison with conventional PCR were: 100% sensibility; 78% specificity; 30% PPV; 100% NPV; 4.6 PVR; 0 NVR. For skeletal muscle samples, qPCR diagnostic values were: 100% sensibility; 29% specificity; 20% PPV; 100% NPV; 1.4 PVR; 0 NVR. Both techniques were equally sensitive in the medium-high concentration range, but qPCR was more effective to detect low parasitic burden, particularly in skeletal muscle samples.
O objetivo deste estudo foi comparar a detecção de DNA de Trypanosoma cruzi por PCR em tempo real (qPCR) e PCR convencional no sangue periférico (N=25) e músculo esquelético (N= 20) de camundongos tratados com medicamentos tripanomicidas depois de 6 meses de pós-tratamento. Nas amostras de sangue foi detectado um total de sete positivas por qPCR; enquanto que apenas foram encontradas 2 por PCR convencional. No músculo esquelético, 15 amostras foram positivas por qPCR e 3 por PCR convencional. Os resultados mostram que a força de concordância é fraca entre as técnicas de PCR utilizadas para a detecção de DNA de T. cruzi (k=0,37, 49% positivas por qPCR vs. 11% para a PCR convencional, p=0,0001). Nas amostras de sangue, os valores diagnósticos de qPCR em relação a PCR convencional foram de 100% sensibilidade; 78% de especificidade; 30% de VPP; 100% VPN; 4,6 RVP; 0 RVN. Para as amostras de músculo esquelético, os seguintes valores diagnósticos de qPCR foram obtidos: 100% sensibilidade; 29% de especificidade; 20% de VPP; 100% VPN; 1,4 RVP; 0 RVN. Ambas as técnicas são igualmente sensíveis na faixa de concentração média-alta, mas qPCR foi mais eficaz na detecção de baixas cargas parasitárias, especialmente em amostras de tecido.
Subject(s)
Mice , Trypanosoma cruzi , DNA , Polymerase Chain Reaction , Blood , Muscle, SkeletalABSTRACT
La Enfermedad de Chagas causada por el parásito hemoflagelado Trypanosoma cruzi, constituye un grave problema de Salud Pública. En Argentina, se controla sistemáticamente la sangre a transfundir, la donación de órganos y se ha disminuido notablemente la transmisión vectorial. El objetivo de este proyecto fue implementar el uso del equipo para recolección de sangre capilar y conservación en glicerina (Serokit) en los servicios de enfermería de los Centros de Atención Primaria de la Salud en la ciudad de Salta a fin de conocer la seroprevalencia de infección por Trypanosoma cruzi en pacientes que concurren a los mismos. Para ello se realizó el par serológico HAI y ELISA en las muestras conservadas en Serokit y luego en muestras de sangre tomadas por punción venosa para confirmación. Durante dos años de trabajo se analizaron 1647 pacientes que concurrieron a 28 Centros de Salud, resultando 1,7% (29/1647) seropositivos. El Valor Predictivo Positivo fue 93,50% y el Valor Predictivo Negativo fue 99,8%. Todos los niños seropositivos fueron tratados con Benznidazol. Se concluye que el uso de Serokit para la toma y conservación de muestras para posterior diagnóstico de infección por Trypanosoma cruzi es recomendable en Centros de Atención Primaria de la Salud que no cuentan con laboratorio.
Chagas disease is caused by the hemoflagelate parasite Trypanosoma cruzi, and represents a main concern in public health. In Argentina, blood transfusion and organ donation are systematically controlled for T. cruzi infection, and vectorial transmission has dropped significantly. The aim of this project was to implement the use of the equipment for collecting capillary blood and conservation in glycerine (Serokit) in the nursery service of Primary Health Care Centers (PHCC) in the city of Salta, and to know the seroprevalence of T. cruzi infection in PHCC patients. To that aim, the serological pair HAI and ELISA was carried out in samples preserved in Serokit, followed by analysis of blood samples taken by venous punction to confirm the results. During a two-year period, 1647 patients that were assisted at 28 PCHC were analyzed, resulting in 1.7% (29/1647) seropositive samples. Positive Predictive Value was 93.5% and Negative Predictive Value was 99.8%. Every seropositive child was given Benznidazole treatment. It can be concluded that use of Serokit for taking and preserving samples to diagnose serologically T. cruzi infection is recommended in PHCC that lack their own biochemistry laboratory.
A doença de Chagas produzida pelo protozoário flagelado Trypanosoma cruzi constitui um grave problema para a Saúde Pública. Na Argentina, o controle sistemático do sangue para transfusão e o do órgão para transplantar, fez com que diminuísse notavelmente a transmissão vetorial. O objetivo deste projeto foi implementar o uso do equipamento para coleta de sangue capilar e conservação em glicerina (Serokit) nos serviços de enfermagem dos Postos de Atenção Primaria da Saúde da cidade de Salta a fim de conhecer a soroprevalência de infecção com Trypanosoma cruzi em pacientes que são atendidos nos mesmos. Foi realizado o par sorológico HAI e ELISA nas amostras conservadas em Serokit e depois nas amostras de sangue retiradas através de uma punção venosa para a confirmação. Durante dois anos de trabalho, foram analisados 1647 pacientes que foram atendidos nos 28 Postos de Saúde, resultando 1.7% (29/1647) soropositivos. O Valor Preditivo Positivo foi Tripae 93.50% e o Valor Preditivo Negativo foi de 99.8%. Todas as crianças soropositivas foram medicadas com Benznidazol. A conclusão é que o uso de Serokit para a tomada e conservação de amostras para posterior diagnóstico de infecção por Trypanosoma cruzi é recomendável nos Postos de Atenção Primária da Saúde onde não existe a disponibilidade de laboratórios.