Dez anos de experiência em controle de qualidade em imuno-hematologia / Ten years of experience of quality control in immunohematology

A medicina transfusional tem como objetivo garantir a qualidade e quantidade do sangue, componentes e serviços oferecidos à comunidade, e, dentro desse contexto, a análise dos reagentes imuno-hematológicos é crítica para a realização dos testes pré-transfusionais e, consequentemente, uma transfusão segura. É responsabilidade do controle de qualidade o constante aperfeiçoamento de testes que analisam a qualidade dos reagentes e equipamentos utilizados. Esse trabalho tem por objetivo apresentar os resultados alcançados em dez anos de experiência do Departamento de Controle de Qualidade em Imuno-hematologia da Fundação Pró-Sangue / Hemocentro de São Paulo. No período de janeiro de 1997 a dezembro de 2007 foram realizadas análises em 3.417 reagentes imuno-hematológicos por ocasião da aquisição do reagente e por solicitação de reavaliação (durante o uso). As análises incluíram desde a inspeção visual no recebimento a testes laboratoriais específicos para cada tipo de reagente. Dos 3.417 lotes analisados (média=310/ano, mediana=252/ano), 94 (2,7 por cento) foram reprovados (média=8,54/ano, mediana=7,00 ± 7,79/ano). Uma vez aprovado pelo controle de qualidade à aquisição, nenhum reagente imunohematológico foi reprovado durante o uso desde 2004. Podemos concluir que, para implementação de um sistema de controle de qualidade de reagentes imuno-hematológicos, não é necessário uso de reagentes ou equipamentos altamente especializados, pois os mesmos são utilizados na rotina laboratorial, como também não envolvem alta complexidade na execução das análises. Podemos enfim considerar que a implementação do controle de qualidade em Imuno-hematologia contribui para o aumento da segurança transfusional e é factível de realização nos mais diferentes níveis de complexidade dos serviços hemoterápicos.

Transfusion medicine has the purpose of guaranteeing the quality and quantity of blood, blood derivatives and services offered to the community. Thus, the analysis of serological reagents is critical in pre-transfusion testing and, consequently, reliable transfusions. A constant improvement in the tests that analyze the quality of reagents and equipment utilized is the responsibility of quality control. This paper aims at presenting the results and experience achieved over 10 years in the Department of Quality Control in Immunohematology at Fundação Pró-Sangue / Hemocentro de São Paulo. In the period of January 1997 to December 2007 we carried out analyses of 3,417 serological reagents at acquisition and/or during their use. The analyses included from visual inspection to specific laboratory tests for each kind of reagent. Of the 3,417 lots analyzed (mean = 310/year, median = 252/year), 94 (2.7 percent - median=8.54/year) failed the tests. From 2004 to date, once the reagents were approved, none failed during use. The implementation of a quality control system with standardized techniques is important for the adequate utilization of serological reagents. This system accomplished by retroactive control of the reagents, contributed to the safety and reliability of results in immunohematology testing.

Detecção de Aspergillus sp pela técnica de PCR-nested em pacientes submetidos a transplante de medula óssea: [carta ao editor] / Detection of Aspergillus sp in bone marrow transplant patients by PCR-nested technique: [letter to editor]

Invasive aspergillosis is an important cause of mortality in long-term neutropenic patients, particularly after bone marrow (B.M.T.) and solid organ transplantation. More than 90% of invasive fungal infections in immunocompromised patients can be attributed to Candida and Aspergillus. To date, there is no fast, reliable and feasible test for Aspergillus infection detection in routine procedures. In the present report, a nested PCR technique, developed to detect Aspergillus infection, is described. In our study, the sensitivity, specificity, positive and negative values using this approach were 100%, 94.4%, 83.3%, and 100%, respectively.

Impacto da recusa de candidatos à doacão de sangue devido aos critérios para prevencão da doenca de Creutzfeldt-Jacob e sua variante / Impact of deferral criteria on prevention of Creutzfeldt-Jakob disease and its variant among blood donors in São Paulo, Brazil

A doenca de Creutzfeldt-Jacob (CJD) e sua variante (vCJD) são doencas neurológicas fatais, degenerativas, com longo período de incubacão. Recentemente, um possível caso de transmissão de vCJD por transfusão sangüínea foi descrito. A partir de 2001 adotamos critérios para recusa de candidatos baseados em dados da literatura, Portarias e Resolucões do Ministério da Saúde. Avaliamos retrospectivamente o porcentual de recusas anuais na triagem clínica de 1.015.587 candidatos à doacão, referentes aos critérios relacionados a CJD e vCJD, de janeiro de 2001 a dezembro de 2004. Este porcentual correspondeu a 0,0049 por cento em 2001, 0,0051 por cento em 2002, 0,092 por cento em 2003 e 0,098 por cento em 2004, representando recusa definitiva de 726 (0,068 por cento) candidatos. A causa mais freqüente de recusa por CJD ou vCJD foi permanência no Reino Unido > 6 meses (259 recusas) seguido de transplante de córnea (203 recusas) e uso de hormônio do crescimento de origem humana (151 recusas). Embora o número de recusas relacionados a CJD e sua variante seja baixo em nossa Instituicão, observamos um aumento gradativo anual, que provavelmente relaciona-se à adicão de novos critérios. Diferentemente de outros países, estas recusas não afetaram nosso estoque de sangue e componentes. Com os dados obtidos, consideramos que, na nossa populacão, podemos manter o "Princípio da Precaucão" sem causar prejuízo no fornecimento de sangue e componentes aos nossos pacientes.

Aplicação do índice prognóstico internacional em pacientes com linfoma difuso de grandes células B em uma instituição brasileira / The use of the international prognostic index in a Brazilian institution for patients suffering from diffuse large B-cell lymphoma

O linfoma difuso de grandes células B (LDGCB) corresponde a 50 por cento dos casos de linfoma não-Hodgkin (LNH). A partir de 1993, o tratamento destes pacientes passou a ser direcionado pelo índice Internacional de Prognóstico (IPI) validado em vários estudos. Entretanto a aplicação do IPI ainda não foi avaliada em nossa população e em nossas condições socioeconômicas. Neste estudo avaliamos o impacto do IPI ajustado para a idade (IPIa) na remissão completa (RC), sobrevida global (SG) e sobrevida livre de doença (SLD) dos portadores de LDGCB com idade inferior a 60 anos, tratados no Serviço de Hematologia do HCFMUSP. Dos 111 pacientes avaliados, 60 foram classificados com IPIa de risco baixo e intermediário e 51 IPIa de risco intermediário alto e alto. Os pacientes de risco baixo e intermediário foram analisados em conjunto no grupo de baixo risco adaptado e os de risco intermediário alto e alto no grupo de alto risco adaptado. Verificamos que a SG e a SLD foram influenciadas pelo estádio clínico, DHL e o estado funcional dos pacientes. Recomendamos o uso sistemático do IPI no tratamento dos nossos pacientes com LDGCB em nossa instituição.

Comparison of catheter-related infection risk in two different long-term venous devices in adult hematology-oncology patients

OBJETIVO: Infecção é a principal complicação relacionada ao uso de cateteres venosos de longa permanência em pacientes oncológicos e sua incidência pode variar a depender do tipo de cateter utilizado. O objetivo deste estudo foi comparar a freqüência e risco de infecção entre dois tipos de dispositivos de longa permanência. MÉTODOS: Estudo retrospectivo com 96 pacientes onco-hematológicos portadores de cateteres parcialmente implantáveis (n=55) ou totalmente implantáveis (n=42). Dados demográficos e cuidados com o dispositivo foram similares entre os dois grupos. A comparação entre os dispositivos foi realizada através da avaliação da incidência de infecção e da sobrevida livre de infecção. RESULTADOS: Em uma mediana de acompanhamento de 210 dias, a incidência de infecção relacionada ao cateter foi de 0,2102/100 cateter-dias para os dispositivos parcialmente implantáveis e de 0,0045/100 cateter-dias para os totalmente implantáveis, com uma razão de incidência de 46,7 (IC 95% = 6,2 a 348,8). A taxa de sobrevida livre de primeira infecção em um ano foi de 45% versus 97% e a taxa de sobrevida livre de retirada por infecção foi de 42% versus 97%, respectivamente para cateter parcialmente ou totalmente implantável (p<0,001 para ambas comparações). Conclusão: No presente estudo, o risco de infecção foi menor nos dispositivos totalmente implantáveis do que nos parcialmente implantáveis.

Hemolytic disease of the newborn due to anti-U

Anti-U is a rare red blood cell alloantibody that has been found exclusively in blacks. It can cause hemolytic disease of the newborn and hemolytic transfusion reactions. We describe the case of a female newborn presenting a strongly positive direct antiglobulin test due to an IgG antibody in cord blood. Anti-U was recovered from cord blood using acid eluate technique. Her mother presented positive screening of antibodies with anti-U identified at delivery. It was of IgG1 and IgG3 subclasses and showed a titer of 32. Monocyte monolayer assay showed moderate interaction of Fc receptors with maternal serum with a positive result (3.1 percent). The newborn was treated only with 48 hours of phototherapy for mild hemolytic disease. She recovered well and was discharged on the 4th day of life. We conclude that whenever an antibody against a high frequency erythrocyte antigen is identified in brown and black pregnant women, anti-U must be investigated

Controle de qualidade interno de regentes em imunohematologia: aspectos práticos / Internal quality control of immunohematological reagents: practical aspects

A hemoterapia tem buscado incessantemente o aumento da segurança transfusional. Para tanto tem envolvido, dentre outros, a padronização de testes que comprovem a qualidade dos reagentes utilizados nos serviços hemoterápicos, as análises, o uso e a manutenção de equipamentos apropriados e treinamento de funcionários. O controle de qualidade é essencial e indispensável para a obtenção de resultados confiáveis nos ensaios para os quais se destinam. Até o momento, não há descrição pré-estabelecida dos requisitos mínimos para os reagentes utilizados nos testes imuno-hematológicos pelo Ministério da Saúde. Este trabalho tem por objetivo apresentar os aspectos práticos que envolvem o controle de qualidade em imuno-hematologia, além de informações básicas sobre os principais reagentes imuno-hematológicos disponíveis no mercado brasileiro.

One of the main objectives of transfusion medicine is to promote safe transfusion. Continuous improvement involves the standardization of techniques used for quality control of reagents, adequate equipment evaluation and its maintenance and staff training. Quality control of reagents is critical for achieving reliable results in immunohematological testing. In Brazil, as far as we know, there are no minimum requirements for immunohematological reagent guidelines. This paper has the purpose of describing practical aspects of quality control in imunohematology, as well as providing information on the most common immunohematological reagents available on the Brazilian market.

Resolvendo um caso de ABO discrepante através da genotipagem rápida por PCR-RFLP / Solving an ABO complex discrepancy by rapid genotyping using PCR-RFLP

O uso das reaçöes de hemaglutinaçäo para identificar discrepâncias ABO pode consumir um grande tempo e dificultar sua interpretaçäo. Com o conhecimento da base molecular dos antígenos do grupo sangüíneo ABO, o PCR-RFLP foi usado para elucidar um caso complexo de discrepância ABO. Materiais e Métodos: Um bebê do sexo feminino com sete meses de idade foi admitido no hospital com o diagnóstico de mielofibrose e anemia. Os testes pré-transfusionais usando o gel-teste demonstraram ser a paciente do grupo sangüíneo A, com teste de antiglobulina direto e pesquisa de anticorpos negativos. A paciente tinha um resultado prévio de tipagem AB. Nos testes de saliva foram detectados as substâncias A e B. Como testes imuno-hematológicos se mostraram inconclusivos, o PCR-RFLP foi feito usando amostras de sangue da paciente e da mäe. Após extraçäo do DNA genômico, dois fragmentos específicos do gene ABO (exon 6 e 7) foram ampliados usando os primers mo-46/mo-57 e mo-71/mo101 e digeridos com as enzimas Kpn I e Hpa II. Os produtos digeridos foram analisados por eletroforese em gel de agarose. Resultados: Após o PCR-RFLP na amostra do bebê, foram encontrados os fragmentos 309, 252, 223, 204, 150, 137 e 119 pb, confirmando o genótipo A2B, e na amostra da mäe foram encontrados os fragmentos 309, 252, 223, 150 e 137 pb, confirmando, também, o genótipo A2B. Conclusäo: Nos casos de discrepância ABO, a determinaçäo do grupo sangüíneo ABO pode ser feita pelo PCR-RFLP

Estudo de grupos sangüíneos em doadores de sangue caucasóides e negróides na cidade de Säo Paulo / Blood groups in caucasian and black blood donors from Säo Paulo, Brazil

Apesar do fato de que o grupo de mulatos representa um dos mais comuns grupos raciais encontrados näo só no Brasil, mais em vários outros países, existe pouca informaçäo sobre a distribuiçäo dos grupos sangüíneosnestes indivíduos. Foram estudados 2.462 doadores de sangue classificados como caucasóides, mulatos e negros conforme suas características antropológicas, bem como pelas suas informaçöes sobre seus ancestrais. Foram estudadas as freqüências fenotípicas para os sistemas de grupos sangüíneos ABO, Rh, P, Kell, Rh, Lutheran, Lewis, Duffy e Kidd. Näo foram encontradas diferenças estatisticamente significativas entre negros e mulatos para a maioria dos sistemas de grupos sangüíneos por nós estudados, com exceçäo dos seguintes fenótipos: P 1 positivo, Dccee, Le(a-b-), Js(a+b+),Js(a-b+),Fy(a-b-), Fy(a+b+) e Fy(a-b+). Por outro lado foi observada uma diferença estatisticamente significante entre caucasóides e negróides para os seguintes fenótipos eritrocitários: A, B, M+N-S+s-, M+N-S-s+, P1 positivo, ddccee, Dccee, Dccee, DCCee, DccEe, K+k+K-k+, Kp(a-b+), Kp(a+b+), Js(a-b+), Js(a+b-), Le (a-b+), Le(a-b-), Fy(a-b+), Fy(a+b+), Fy(a-b-), Jk(a+b-), Jk(a+b+) e Jk(a-b+). Os resultados encontrados para o grupo mulato foram intermediários entre caucasóides e negros, com forte influência negróide.

Detecçäo precoce de recaída em transplante de medula óssea: revisäo da metodologia atual e uso da técnica de hibridizaçäo in situ (FISH) / Early detection of relapse in bone marrow transplantation. A review of the current diagnostic methodology and the use of in situ hybridization

O método tradicionalmente utilizado para detecçäo de quimerismo e de recaída precoce após transplante de medula óssea é a citogenética com bandeamento. Esta técnica tem como desvantagens o tempo de análise, que pode ser inaceitavelmente prolongado, e a dificuldade de quantificaçäo. A técnica de FISH (hibridizaçäo in situ fluorescente) pode se tornar uma excelente alternativa à citogenética convencional, já que pode ser executada em células em interfase, abreviando o tempo de análise e por fornecer resultados quantificados, permitindo a determinaçäo mais clara de quimerismo. Cento e vinte indivíduos do sexo feminino e 120 do masculino foram analisados inicialmente para a determinaçäo de sensibilidade e especficidade da técnica de FISH para cromossomos X e Y. Quando utilizadas combinadamente, ambas as sondas fornecem níveis de sensibilidade e especificidade maiores que 99 por cento. Quatro pacientes, submentidos a transplante de medula óssea com doadores de sexo diferentes, foram analisados para a observaçäo de recaída precoce. Em dois casos praticamente toda a hematopoese voltou a ser do receptor, indicando recaída da doença antes que análise citogenética pudesse ser utilizada. Em um dos casos encontrou-se um estado de quimera mista sugerindo fortemente a possibilidade de recaída, o que se cofirmou algumas semanas após. O último caso apresentava hematopoese oriunda do doador, indicando que a doença de base näo havia retornado. Concluímos que a técnica de FISH é superior à de citogenética para a detecçäo precoce de recaída pós-transplante em casos onde doador e receptor säo se sexos diferentes

Fisiopatologia e tratamento da leucemia mielóide crônica: novos conceitos e perspectivas / Physiopathology and treatment of chronic myeloid leukemia: new concepts and perspectives

Descobertas recentas sobre a atividade do gene quimérico BCR/ABL têm auxiliado na elucidaçäo de diversos mecanismos envolvidos na gênese e progressäo da leucemia mielóide crônica (LMC). Apesar de a LMC ser ainda, uma doença incurável para os pacientes que näo podem submeter-se a um transplante alogênico de medula óssea, a sobrevida geral tem aumentado progressivamente, devido especialmente a medidas capazes de prolongar a fase crônica. A técnica de reaçäo da polimerase em cadeia (PCR) para a detecçäo do gene quimérico BCR/ABL tem sido um teste bastante valioso para a identificaçäo de casos Philadelphia negativos que apresentam o rearranjo genético ao nível molecular e para a detecçäo de doença residual mínima, especialmente em indivíduos transplantados. Novas formas de tratamento devem traduzir-se em maior sobrevida nos próximos anos quando utilizadas em estágios precoces da doença: transplante autólogo de células-tronco com células mobilizadas e coletadas após quimioterapia em altas doses, o uso de interferon e a terapia gênica. O interferon já é a droga de escolha para o tratamento da maioria dos pacientes...