Importância das comunicações intercelulares para o desenvolvimento de folículos ovarianos / Intercellular communications in ovarian follicles

Durante a foliculogênese em mamíferos, ocorre um longo e complexo processo no qual o oócito adquire a competência necessária para a fecundação. Nesse processo ocorre uma comunicação metabólica bidirecional entre os oócitos e as células somáticas dentro do folículo que garante substratos para o oócito em desenvolvimento. Essa comunicação é mediada pelas junções celulares (junções comunicantes e junções aderentes) presentes nas projeções transzonais. As junções celulares e moléculas de adesão são responsáveis principalmente por promover a adesão entre as células foliculares; mas podem atuar em vias de sinalização celular e na regulação da transcrição gênica nas células somáticas e oócitos. Além disso, as junções comunicantes (junções gap) são canais intermembranares que intermediam a comunicação entre essas células através da passagem de pequenas moléculas. Essas junções comunicantes são compostas por proteínas denominadas conexinas; as conexinas 37 e 43 são as predominantes nos folículos ovarianos. Dessa forma, o conhecimento acerca das junções celulares é de extrema importância para o estudo da foliculogênese. A presente revisão teve como objetivo abordar os principais tipos de junções celulares existentes entre as células foliculares, com destaque para as junções gap e as principais proteínas de membranas (conexinas) presentes nos diferentes estágios do desenvolvimento folicular.

During the mammalian folliculogenesis, a long and complex process occurs, which the oocyte acquires the necessary competence for fecundation. In this process there is a metabolic bidirectional communication among the oocyte and somatic cells inside the follicle, which provides substrates for the oocyte developmental competence. This communication is mediated by cellular junctions (occlusions, adherens and gap junctions) localized in the transzonal projections. Cellular junctions and adhesion mollecules are responsable mainly for promoving the adhesion among follicular cells, however they can act in cellular signaling pathways and in regulation of genic transcription in the follicular cells and oocyte. Moreover, the communication junctions (gap junctions) are intermembrane channels that intermediate the communication among these cells through the passage of small molecules. These gap junctions are composed by connexins, of which the connexins 37 and 43 are the most frequently found in the ovarian follicle. Thus, knowledge of these cellular junctions are of great importance for studying the folliculogenesis process. The aim of this review was to report the main types of cellular junctions localized among the follicular cells, especially the gap junctions and the main membrane proteins (connexins) found in different stages of the follicular development.

Criopreservação de sêmen humano: comparação entre métodos de congelação e tipos de envase / Cryopreservation of human semen: comparison between methods of freezing and types of storage

OBJETIVOS: comparar duas diferentes técnicas de congelação e dois tipos de envase do sêmen humano durante processo de criopreservação. MÉTODOS: estudo experimental, no qual foi analisada a criopreservação de 18 amostras de sêmen de 18 voluntários. Após a adição de meio crioprotetor, "Test-yolk buffer" , as amostras de sêmen foram envasadas em palhetas com capacidade de 0,25 mL ou em criotubos de 2 mL e submetidas à criopreservação por dois métodos, um lento e outro rápido, totalizando quatro tratamentos distintos: RP (congelação pelo método rápido e envasado em palheta), RT (rápido-criotubo), LP (lento-palheta) e LT (lento-criotubo). As amostras, após 24 horas, foram descongeladas em temperatura ambiente e mantidas a 37°C. Os dados coletados foram analisados através do teste t de Student, com p<0,05, utilizando o programa de computador SPSS for Windows® versão 11.0.0. RESULTADOS: houve redução da motilidade espermática após o processo de criopreservação. A taxa de motilidade inicial foi 58,1 por cento e as motilidades após os diferentes métodos de criopreservação foram: 19,2 por cento (RP), 27 por cento (RT), 21,1 por cento (LP) e 30,3 por cento (LT). Houve redução significativa na morfologia normal. A taxa de morfologia normal inicial foi 14,2 por cento e as morfologias após os diferentes métodos de criopreservação foram: 12,8 por cento (RP), 12,6 por cento (RT), 12,6 por cento (LP) e 12,4 por cento (LT). CONCLUSÕES: o método de criopreservação lento com envase em criotubo esteve associado à melhor motilidade espermática após o descongelamento. Não houve diferença entre os métodos quando avaliada a morfologia espermática.

PURPOSE: to compare two different methods of freezing and two types of human semen storage during cryopreservation process. METHODS: experimental research in which the cryopreservation of 18 semen samples from 18 volunteers was studied. Following the addition of the cryoprotectant medium, Test-yolk buffer, the semen samples were packaged into 0.25 mL straws or into 2 mL cryotubes and submitted to cryopreservation by slow or rapid methods, in four different treatments: RS (cryopreservation by rapid method and packaged in straws), RT (rapid-cryotubes), SS (slow-straws), and ST (slow-cryotubes). Samples were thawed after 24 hand then maintained at 37°C. Data collected were analyzed by the Student t-test, with p<0.05, using the SPSS computer program for Windows®, version 11.0.0. RESULTS: the motility of spermatozoa decreased after the cryopreservation process. The initial motility rate was 58.1 percent and motilities after the different methods of cryopreservation were 19.2 percent (RS), 27 percent (RT), 21.1 percent (SS) and 30.3 percent (ST). There was a significant decrease of the normal morphology. The initial normal morphology was 14.2 percent and morphologies after the different methods of cryopreservation were 12.8 percent (RS), 12.6 percent (RT), 12.6 percent (SS) and 12.4 percent (ST). CONCLUSIONS: the slow method of cryopreservation with storage in cryotubes showed the best recovery of motile cells after freezing and thawing. There was no difference among the methods when appraised the morphology.

Criopreservação de sêmen humano / Cryopreservation of human semen

Os primeiros relatos sobre a resistência de espermatozóides a baixas temperaturas, são do século XVIII. Desde então, tem-se investido como melhorar o processo de criopreservação. Atualmente, o sêmen criopreservado pode ser utilizado em várias situações. A criopreservação é indicada rotineiramente para o tratamento de casais inférteis com causa masculina. Pacientes com patologia oncológica que se submeteram a tratamentos quimioterápico e radioterápico mantêm sua fertilidade, quando podem criopreservar o sêmen. A criopreservação de espermatozóides promove danos celulares por diversos mecanismos. Entre os fatores responsáveis por essas crioinjúrias, destacamos: a taxa de queda na temperatura durante o processo, a forma de acondicionamento das amostras a serem criopreservadas, os meios crioprotetores, a forma de manutenção dessas amostras, a taxa de aquecimento durante o descongelamento e variações individuais. Os resultados de tratamentos que utilizam técnicas de reprodução assistida, como Fertilização in vitro e Injeção Intracitoplasmática de Espermatozóides, dependem da qualidade seminal, que está refletida na motilidade e na morfologia espermática. Ainda não há um consenso na literatura sobre qual a melhor técnica para criopreservação de espermatozóides, mostrando a necessidade de novos estudos, para que a qualidade seminal seja cada vez menos afetada durante o processo

Expressäo relativa de fator semelhante a insulina (IGFI) e receptor do homômonio folículo estimulante (FSHR) em folículos e tecido ovariano de Bos primigenius (Nelore) / Relative expression of insulin like growth factor I (IGFI) and follicle stimulating hormone receptor (FSHR) in follicles and ovarian tissue from Bos primigenius indicus (Nelore)

O aperfeiçoamento das técnicas que objetivam a exploraçäo do potencial reprodutivo das fêmeas requer a compreensäo mais ampla dos mecanismos de controle de desenvolvimento folicular. Uma alternativa de estudo nesta esfera, é a quantificaçäo da expressäo relativa de genes envolvidos nos processos de recrutamento, seleçäo e desenvolvimento folicular, pelo emprego da técnica de transcriçäo - reversa associado a reaçäo em cadeia pela polimerase (RT - PCR). O presente trabalho objetivou quantificar a expressäo relativa dos genes insulin-like growth factor I (IGF-I) e do receptor do hormônio folículo estimulante (FSHR), tendo como controle interno o gene da gliceraldeído 3-fosfato desidrogenase (GAPDH). Foram utilizados ovários bovinos de animais de matadouro em diferentes fases do ciclo estral. O RNA total dos folículos e tecido ovarianos foi purificado por TRIZOL. As reaçöes de RT-PCR foram realizadas com o "kit" SuperScriptTM First-Strand. Os produtos de PCR foram analisados em gel de agarose e as bandas submetidas à análise densitométrica. Todos os genes foram amplificados observando-se a curva exponencial de amplificaçäo, a validaçäo do método foi realizada através de análise de regressäo, sendo estabelecido o coeficiente de amplificaçäo (E). A expressäo relativa de mRNA para cada gene de interesse foi calculada pela fórmula estabelecida por Prelle et al.12. Em todos os tecidos analisados, todos os genes foram expressos, sobressaltando-se diferenças nos diferentes ciclos estudados. Com relaçäo os dados referentes ao coeficiente de amplificaçäo (E), observou-se tanto para gene controle (GAPDH), como para o gene IGF-I concordância nos valores encontrados para as diferentes classes analisadas. Quanto ao gene IGF-I, a interpretaçäo dos achados para a expressäo relativa de mRNA pode está relacionada ao caráter constitutivo dessa proteína ou devido os transcritos näo serem dependentes dos níveis de FSH. Observou-se diferenças na expressäo relativa de mRNA de FSHR entre as classes de tecidos analisados, o que pode ser explicado pela variaçäo do número de receptores nas células da granulosa nas diferentes fases do ciclo estral. Pode-se perceber a partir desse estudo que a técnica de RT-PCR semi quantitativo é de grande importância biotecnológica, possibilitando auxílio na compreensäo da dinâmica folicular. Entretanto esses estudos devem ser ampliados com outros genes para melhor compreensäo das etapas fisiológicas envolvidas na foliculogênese