ABSTRACT
A citometria de fluxo permite a análise individual de células quando há expressão de moléculas de membrana, produtos citoplasmáticos e nucleares. Quando se utiliza a marcação prévia das células com anticorpos monoclonais é possível estudar constituintes de membrana característicos de uma determinada linhagem celular. Assim, esta metodologia tem sido largamente utilizada, principalmente na área de onco-hematologia e dos transplantes de medula óssea. A possibilidade de se utilizarem dois ou mais anticorpos monoclonais marcados com fluorocromos diferentes permite o estudo em uma determinada população celular de substâncias pró-coagulantes produzidas por células envolvidas nos mecanismos da hemostasia, abrindo-se a possibilidade de aplicação desta metodologia em áreas de estudo da fisiopatologia relacionada aos estados de hipercoagulabilidade. Os monócitos estão altamente envolvidos nos processos fisiopatológicos envolvendo a formação de trombo e placas ateromatosas, e o Fator Tissular (FT) consiste no principal ativador fisiológico do sistema de coagulação sangüínea. Monócitos estimulados ou não por lipopolissacárides de Escherichia coli expressam FT em condições fisiológicas normais. Neste trabalho buscou-se otimizar as condições de determinação da expressão de FT em monócitos por citometria de fluxo, a partir de metodologia já descrita, em duas populações de indivíduos sadios, com faixas etárias diferentes, no sentido de se estabelecerem os níveis de expressão de FT. Para a análise dos resultados foram utilizadas duas metodologias que definem o percentual de células expressando FT. Dos resultados obtidos, pode-se concluir que não há diferença significativa na expressão de FT de monócitos em função da idade e que os dois métodos de análise utilizados não diferem entre si
The development of the flow cytometric assay usingmonoclonal antibodies labeled with differentfluorescent substances enables the identification of aparticular cell population even if it is present inheterogeneous cell samples. This technique has beenapplied to oncohematology and bone marrowtransplantation studies. Two combined fluorescentmonoclonal antibodies enable the study of a particularcell population in the expression of procoagulantsubstances produced by cells involved in homeostaticmechanisms. The application of this methodologycreates the perspective of pathophysiologic studiesrelated to hypercoagulability states. Considering thatmonocytes are highly involved in pathophysiologicmechanisms contributing to thrombus formation andatheromatous plaques and that Tissue Factor representsthe principal physiologic activator of the clotting system,this study constitutes a potential tool for obtainingnew insights of the role of monocytes in diseasesassociated to hypercoagulability states. The present work aimed to establish the optimization of conditionsfor measuring the tissue factor expression in monocytesstimulated or not by lipopolysaccharides fromEscherichia coli and analyzed by flow cytometric assaybased on a previous methodology. Blood samples werecollected from healthy subjects and divided in two ageranges. Studies on monocytes were carried outcomparing two methods of analysis, which define thepercentage of cells expressing tissue factor on theirsurface. From the results, it was concluded that thereis no difference between the two age ranges related tothe tissue factor expression in monocytes. In addition,there were no significant differences between the twoassessed methods of analysis. Rev. bras. hematol.