Rendimiento diagnóstico del Western Blot para detectar simultaneamente anticuerpos en pacientes con cisticercosis, hidatidosis y fascioliasis humana / Western Blot diagnostic yield for simultaneous antibody-detection in patients with human cysticercosis, hydatidosis, and human fascioliasis

RESUMEN Objetivo. Determinar el rendimiento diagnóstico de la técnica de Western Blot para detectar simultáneamente anticuerpos en pacientes con cisticercosis, hidatidosis y fascioliasis humana. Materiales y métodos. Estudio transversal de evaluación de prueba diagnóstica. Se obtuvieron los antígenos de excreción-secreción de las larvas de Taenia solium, quistes de Echinococcus granulosus; y la forma adulta de Fasciola hepática; que luego fueron separados electroforéticamente en geles de poliacrilamida individuales, transferidos y fijados a una membrana de nitrocelulosa para ser enfrentados con sueros de pacientes con las tres parasitosis. La sensibilidad de la técnica se evaluó empleando 300 sueros individuales, 60 pools de dos parasitosis y 20 pools de tres parasitosis y la especificidad con 75 sueros de pacientes con otras parasitosis, 10 de pacientes con otras enfermedades y 15 sueros de personas no parasitadas. Resultados . La técnica reconoció trece glicoproteínas (GP): GP 35, 31, 24, 23, 18, 17, 14 y 13 kDa para cisticercosis, GP 8,16 y 21 kDa para hidatidosis y GP: 17 y 23 kDa para fascioliasis. La prueba detectó la presencia de anticuerpos alcanzando una sensibilidad de 96% (IC95%: 94,62-98,54%) en la detección de una o las trece bandas, una especificidad de 100% (IC95%: 99,50 - 100,00%); individualmente, se tuvo una sensibilidad para cisticercosis de 97% (IC95%: 93,16-100%), para hidatidosis de 94% (IC95%: 88,85-99,15%) y para fascioliasis de 96% (IC95%: 91,66-100%). Conclusiones. La prueba de Western blot es eficaz en la detección, simultanea de anticuerpos en pacientes con cisticercosis, hidatidosis y fascioliasis humana, y puede ser utilizada como prueba de descarte o confirmatoria en zonas endémicas.

ABSTRACT Objectives . To determine the diagnostic yield using western blotting to simultaneously detect antibodies in patients with human cysticercosis, hydatidosis, and human fascioliasis. Materials and methods . Cross-sectional study of diagnostic yield assessment. Excretory/secretory antigens were obtained from Taenia solium larvae, Echinococcus granulosus cysts, and the adult flukes of Fasciola hepática, which were then separated using the polyacrylamide gel electrophoresis technique, transferred, and attached to a nitrocellulose membrane to be probed with sera from the patient infected with the three parasites. The sensitivity of the technique was assessed using 300 individual serum samples, 60 pools of two parasites, and 20 pools of three parasites with 75 sera from patients with other parasites, 10 from patients with other diseases, and 15 from patients without parasites. Results . The technique revealed 13 glycoproteins (GP): GP 35, 31, 24, 23, 18, 17, 14, and 13 kDa for cysticercosis; GP 8, 16, and 21 kDa for hydatidosis; and GP 17 and 23 kDa for fascioliasis. The test detected the presence of antibodies with a sensitivity of 96% (95% confidence interval [CI] = 94.62-98.54%) in the detection of one or the thirteen bands, a specificity of 100% (95% CI = 99.50-100.00%); individually, there was a sensitivity for cysticercosis of 97% (95% CI = 93.16-100.00%), for hydatidosis of 94% (95% CI = 88.85-99.15%) and for fascioliasis of 96% (95% CI = 91.66-100.00%). Conclusions . Western blotting is effective in the simultaneous detection of antibodies in patients with human cysticercosis, hydatidosis, and fascioliasis, and it can be used as a diagnostic test to either rule out or confirm the presence of antibodies in endemic areas.

Estandarización de la técnica de western blot para el diagnóstico específico de la enfermedad de Chagas utilizando antígenos de excreciónsecreción de los epimastigotes de Trypanosoma cruzi / Western blot technique standardization for specific diagnosis of Chagas disease using excretory-secretory antigens of Trypanosoma cruzi epimastigotes

Objetivos. Evaluar la eficacia del Western Blot para el diagnóstico específico de la enfermedad de Chagas utilizando antígenos de excreción-secreción de epimastigotes de Trypanosoma cruzi. Materiales y métodos. Los antígenos fueron obtenidos luego de veinte horas de incubación en medio Minimum Essential Medium-Eagle, los cuales fueron preparados a la concentración proteica de 0,2 ug/uL para ser enfrentados a 10 mL de un pool de sueros de pacientes con la enfermedad de Chagas y un conjugado anti-IgG marcado con peroxidasa, se evidenció la presencia de los antígenos de 10, 12, 14,15, 19, 20, 23, 26, 30, 33, 36, 40, 42, 46, 58, 63, 69 91,100 y 112 KDa, de los cuales, los antígenos de 10, 12, 14, 15, 19, 20, 23 y 26 KDa, han sido considerados como específicos usando pools de sueros de pacientes con otras parasitosis y sueros de personas no parasitadas. La sensibilidad de la técnica se evaluó empleando sueros individuales de 65 pacientes con la enfermedad de Chagas y la especificidad con sueros de 40 pacientes con otras parasitosis y cinco sueros de personas no parasitadas. Resultados. La técnica tiene una sensibilidad de 95,4% en la detección de una a ocho bandas específicas, una especificidad de 100%, un valor predictivo positivo de 100% y un valor predictivo negativo de 93,7%. Conclusiones. La técnica de Western Blot con antígenos de excreción-secreción de epimastigotes de T. cruzi es eficaz en el diagnóstico de la enfermedad de Chagas en el Perú, pudiendo ser utilizada como prueba confirmatoria.

Objectives. Evaluate the effectiveness of Western Blot for the specific diagnosis of Chagas disease using excretorysecretory antigens of Trypanosoma cruzi epimastigotes. Materials and methods. Antigens were obtained after twenty hours of incubation in EagleÆs Minimum Essential Medium, which were prepared at a protein concentration of 0.2 ug/uL to be faced with 10 mL pool of serum from patients with Chagas disease and a conjugated anti-IgG labeled with peroxidase. The presence of the following antigens was observed: 10, 12, 14, 15, 19, 20, 23, 26, 30, 33, 36, 40, 42, 46, 58, 63, 69, 91, 100, and 112 kDa; of which antigens of 10, 12, 14, 15, 19, 20, 23, and 26 kDa were considered to be specific using pools of serum from patients with other parasitosis and serum from people with no parasites. The sensitivity of the technique was assessed using individual serum from 65 patients with Chagas disease; and the specificity with serum from 40 patients with other parasitosis, and serums from five people who did not have parasites. Results. The technique has a sensitivity of 95.4% in the detection of one to eight specific bands, a specificity of 100%, a positive predictive value of 100%, and a negative predictive value of 93.7%. Conclusions. Western Blot technique with excretory-secretory antigens of T. cruzi epimastigotes is effective in the diagnosis of Chagas disease in Peru; therefore, it can be used as a confirmatory test.

Estandarización de la técnica de Western blot para el diagnóstico de la fasciolosis humana utilizando antígenos de excreción-secreción de Fasciola hepática / Western blot technique standardization of the diagnosis of human fasciolosis using Fasciola hepatica excreted-secreted antigens

Objetivos. Evaluar la eficacia de la técnica de electroinmunotransferencia (EITB) o Western blot utilizando antígenos de excreción-secreción de las formas adultas de Fasciola hepatica (Fh E/S Ag) para el diagnóstico de la fasciolosis humana. Materiales y métodos. Los antígenos fueron obtenidos a las 18 horas de incubación en medio Minimum Essential Eagle y preparados a la concentración proteica de 0,15 ug/uL; los cuales, al ser enfrentados con un pool de sueros de pacientes con fasciolosis confirmada por el hallazgo de huevos del parásito en las heces, se detectaron los antígenos de 10, 12, 17, 23, 27, 30, 36, 43, 66 y 136 KDa, con los cuales se desarrolló la técnica de Western blot. La sensibilidad se evaluó empleando sueros de 67 pacientes con fasciolosis, y la especificidad con sueros de 57 pacientes con otras parasitosis y diez sueros de personas no parasitadas. Resultados. De los 67 sueros, 64 reaccionaron con la banda de 23 KDa y 61 con la banda de 17KDa. Estas dos bandas no fueron detectadas por ninguno de los sueros de pacientes con otras parasitosis, ni de personas no parasitadas, siendo por ello consideradas como específicas y diagnósticas. Conclusiones. La sensibilidad de la prueba, utilizando las bandas de 17 y 23 KDa, fue de 95,5 por ciento cuando se presenta reacción positiva en una o en las dos bandas, siendo la especificidad para estos dos antígenos de 100 por ciento con un valor predictivo positivo de 100 por ciento y un valor predictivo negativo de 95,71 por ciento.

Objectives. To evaluate the performance of the enzyme-linked immunoelectrotransfer blot assay (EITB, Western blot) using excretory/secretory antigens from adult forms of Fasciola hepatica (Fh E/S Ag) for the diagnosis of human fasciolosis. Materials and methods. Antigens were obtained after 18 hours of incubation in culture medium Minimum Essential Eagle, prepared at a protein concentration of 0.15 ug/uL and run against a pool of sera of patients with proven fasciolosis (confirmed by the finding of parasite eggs in the stool microscopy). Antigens of 10, 12, 17, 23, 27, 30, 36, 43, 66 and 136 kDa were detected and used to develop the Western blot technique. The sensitivity was evaluated using sera from 67 fasciolosis patients, and the specificity using sera from 57 patients with other parasitic diseases, and 10 from healthy individuals. Results. Out of the 67 sera, 64 reacted with the 23 kDa band and 61 with the one of 17 kDa. These two bands were not detected in sera from patients with other parasitic diseases or in those from healthy volunteers and thus could be considered specific and diagnostic. Conclusions. The sensitivity of the test, using the bands of 17 and 23 kDa, was 95.5 percent for positive reactions to at least one of these two bands, being its specificity 100 percent with a positive predictive value of 100 percent and negative predictive value of 95.71 percent.

Antígenos de larvas pulmonares de Ascaris suum reconocidos por anticuerpos producidos en Oryctolagus cuniculus / Ascaris suum lung larvae antigens recognized by antibodies produced in Oryctolagus cuniculus

El presente trabajo tuvo como objetivo determinar mediante la técnica de Western Blot los antígenos de larvas pulmonares de Ascaris suum que son detectados por anticuerpos producidos en Oryctolagus cuniculus inmunizado experimentalmente. Las larvas pulmonares (L3 y L4) fueron obtenidas en 120 ejemplares de Mus musculus cepa BALB/c ratón infectados experimentalmente por vía oral con huevos infectivos de A. suum. Parte de estas larvas fueron cultivadas en el medio Eagle (MEM) para la obtención de antígenos de excreción/secreción y la otra fue sonificada para la obtención de antígenos somáticos, los cuales sirvieron para inmunizar dos ejemplares de O. cuniculus, utilizando Adyuvante Completo e Incompleto de Freund. A las 5 semanas de inmunización se obtuvo sangre de los conejos por punción cardiaca a fin de recuperar el suero, parte del cual fue purificado parcialmente por precipitación salina y diálisis. Mediante la técnica de electroinmuno-transferencia (Western Blot) y usando sueros de los conejos inmunizados se detectaron en los antígenos de excreción/secreción de 20 horas de cultivo reducidos con dithiothreitol, 12 bandas antigénicas de 100, 72.4, 56.2, 42.7, 39.8, 34.6, 31.6, 30.2, 19.5, 16.9, 15.5 y 14.9 KDa, siendo las más reactivas las de 100, 72.4, 16.9, 15.5 y 14.9 KDa. En los antígenos somáticos bajo condiciones de reducción, se detectaron solamente seis bandas de 42.7, 39.8, 34.6, 30.2, 28 y 25.2 KDa de poca reactividad. Estos resultados permiten afirmar que los antígenos de excreción/secreción de A. suum de 20 horas de incubación en el medio MEM inducen la producción de un mayor número de anticuerpos de tipo IgG en conejos inmunizados experimen-talmente.

Excretory/secretory antigens (E/SAg) and somatic antigens (SAg) of Ascaris suum lung larvae that induce the immunoglobulin G antibodies production in Oryctolagus cuniculus experimentally immunized was determined. For this purposes, specimens of Mus musculus BALB/c were inoculated orally with infective eggs of A. suum obtained from pigs naturally parasitized in order to obtain the lung larvae. Part of these larvae was cultured in Minimum Essential Medium (MEM) to obtain E/SAg and another part was sonicated to obtain the SAg too. Both, E/SAg and SAg mixed with complete and incomplete Freund's adjuvant were used for rabbits immunization. Five weeks after the immunization, the rabbits were bled by cardiac puncture obtaining the immunosera by centrifugation, which was purified partially by saline precipitation and dialysis. By using an Western blot technique with purified immunoserum and E/SAg obtained to 20 hours and reduced with dithiothreitol, fourteen antigens bands of 100, 72.4, 56.2, 42.7, 39.8, 34.6, 31.6, 30.2, 19.5, 16.9, 15.5 y 14.9 KD, were detected. The bands of 100, 72.4, 16.9, 15.5 and 14.9 KDa were been the most reactives. Thereby the SAg, also reduced with dithiothreitol, seven bands of 42.7, 39.8, 34.6, 30.2, 28.0 and 25.2 KDa were detected. They were a bit clear. In conclusion, the E/SAg induce the highest production of immunoglobulin G antibodies in rabbits experimentally immunized.

Niveles de parasitemia y alteraciones histopatológicas en Mus musculus BALB/c infectado con Trypanosoma cruzi obtenido de Panstrongylus chinai del Valle Chamán, La Libertad - Perú / Parasitemia levels and histopathologycal changes in Mus musculus balb/c infected with Typanosoma cruzi obtained from Panstrongylus chinai of Chaman Valley, la libertad - Peru

Se determinó los niveles de parasitemia y las alteraciones histopatológicas en el corazón y el encéfalo de Mus musculus cepa BALB/c infectado experimentalmente con Trypanosoma cruzi obtenido de Panstrongyius chinai capturados en el valle de Chamán, La Libertad-Perú. El trabajo se hizo en 10 ejemplares de M. musculus machos (nueve experimentales y un control) de 20 días de edad. A cada uno de los ejemplares del grupo experimental se les inoculó intraperitonealmente 5x104 tripomastigotes (0,1 mL inoculo original) suspendidos en sangre, y al control 0,1 mL de solución salina fisiológica estéril. La parasitemia se inició a partir del quinto día de la inoculación del T. cruzi, elevándose hasta niveles comprendidos entre 2,5x106 y 7,0x106 tripomastigotes/mL, antes de la muerte de los animales (18 días como máximo). El corazón y encéfalo fueron separados y conservados en formol al 10 por ciento para realizar cortes y colorearlos con la técnica H/E. Todos los ratones parasitados presentaron: erizamiento de pelo, incontinencia urinaria, parálisis de extremidades posteriores y convulsiones. A nivel histopatológico, tanto en el corazón como en el encéfalo, se observaron áreas de edema, congestión vascular, hipercromasia y nidos de amastigota. En el encéfalo se presentó, además, focos de inflamación crónica y difusa y en el corazón infiltrado inflamatorio linfocitario.

Una nueva especie y un nuevo registro de monogéneos parásitos en peces marinos del Perú / A new specie and a new record of monogenea parasites on peruavian marine fishes

Se describe una nueva especie de microcotylinae, neobivagina chita, de las branquias de anisotremus scapularis (Tschudi) chita (pomadasyidae) de la costa peruana. Neobivagina chita sp. n. se caracteriza por el número de testículos (51-72), presencia de receptáculo seminal y por el arreglo y número de las espinas atriales. Se registra por primera vez para el Perú a rhinobatonchocotyle cyclovaginatus Doran, 1953 (hexabothriidae) y se señala a rhinobatos planiceps Garman, guitarra como un nuevo huésped

Estandarización y evaluación de una técnica de Elisa para el diagnóstico de la hidatidosis humana / Standardization and evaluation of an Elisa test in the diagnosis of human hydatid disease

Debido a que las técnicas clásicas de doble difusión con detección del arco % (DD5) y la reacción de hemaglutinación indirecta (RHA), presentan baja sensibilidad, y con el fin de mejorar el diagnóstico serológico de la hidatidosis se efectuó la implementación y evaluación de un test de ELISA practicada mediante micrométodo con antígeno hidatídico purificado por ultracentrifugación. La evaluación se efectuó en 126 muestras provenientes de 36 pacientes con hidatidosis comprobada, 51 de pacientes con otras afecciones parasitarias y no parasitarias y 39 individuos sanos. La aplicación de la técnica demostró una sensibilidad de 86% y una especificidad de 96%. De acuerdo a estos resultados y a los valores predictivos obtenidos se demuestra que la técnica de ELISA presenta utilidad para el diagnóstico de la hidatidosis clínica y supera francamente en sensibilidad y practicabilidad a la DDS y la RHAI

Cynoscionicola american n, sp. y C. cynoscioni n. sp. (Monogenea: Hetraxinidae) parásitos de peces de la familia Scianidae de la Costa Peruana / Cynoscionicola americana n. sp and C. cynoscioni n. sp. (Monogenea: Heteraxinidae) parasites in fishes of the family Scianidae from Peruvian Cost

Se describen Cynoscionicola americana n. sp. y C.cynoscioni n. sp.. Ellas son diferentes de las otras especies conocidas por el número total de pinzas, presencia y estructura de pinzas grandes en el lado derecho del cotiloforo y estructura de sus atrios genitales

Nota sobre la presencia de Synthesium tursionis (Marchi, 1873) Price, 1932 (Trematoda: campulidae) en Delphinus delphis L. (Cetacea:odontoceti) de la costa peruana / Note on the presence of Synthesium tursionis (Marchi, 1873) Price 1932 (Trematoda: campulidae) in Delphinus delphis L. (Cetacea: odontoceti) from the peruvian coast

Se da a conocer la presencia de Synthesium tursionis (Marchi, 1873) Price, 1932 parasitando a Delphinus delphis L de la costa peruana. Este es el primer hallazgo de esta especie en el Perú (nueva distribución) y D. delphis es un nuevo huésped

Larvas plerocercoides de Diphyllobothridae Luhe, 1910: hallazgo en peces marinos de consumo humano en la costa peruana. / Plerocercoid larvae of Diphyllobothridae Luhe, 1910: findings in sea fishes of human consumption in the Peruvian coast

Se estudiaron 480 peces oseos procedentes del area marina comprendida entre 5 grados a 9 grados lat. Sur en el norte peruano y que fueron colectados en el Terminal Pesquero de Trujillo entre 1979 y 1982. Estos especimenes fueron identificados de acuerdo a la clave de Chirichigno (1974), como pertenecientes a 18 especies. Se encontraron larvas plerocercoides en Sciaena callaensis, Cynoscion analis, Merluccius gayi peruanus y Genypterus maculatus, las cuales fueron identificadas como pertenecientes a la familia Diphyllobothriidae.Estas larvas fueron encontradas en el peritoneo, en pared del estomago, en la superficie de las visceras y en la pared de la cavidad visceral, cerca de la cloaca.Se comunica por primera vez la presencia de larvas de Diphyllobothriidae en los huespedes mencionados