Normalización de un método inmunoquímico para detectar Papilomavirus humano tipo 16 en lesiones cérvico-uterinas / Standardization of immunochemical method for detection of type 16 human papilomavirus in cervix uterine lesions

Introducción: la infección por Papilomavirus Humano (PVH) es la condición necesaria para la aparición y desarrollo del cáncer cérvico-uterino. Los genotipos de alto riesgo oncogénico son los causantes de este tipo de neoplasia y dentro de ellos el más frecuente es el PVH 16, que se encuentra aproximadamente en el 60 % de los casos. Los métodos de diagnóstico comerciales resultan costosos para países con escasos recursos económicos, lo que sugiere la búsqueda de alternativas empleando protocolos sencillos y baratos. Objetivos: normalizar un método inmunoquímico para la detección del antígeno L1 de PVH tipo 16 en muestras cérvico-uterinas de pacientes con lesiones intraepiteliales escamosas y determinar la coincidencia entre el método normalizado y la Reacción en Cadena de la Polimerasa en Tiempo Real (RCP-TR), como técnica de referencia, para estimar la utilidad de dicho método en el diagnóstico de la infección por este genotipo viral. Métodos: se compararon tres procedimientos de inmunotinción (Indirecto de inmunoperoxidasa en dos pasos, Estreptavidina-Biotina y Amplificación por polímero) respecto a sensibilidad analítica, tinción inespecífica de fondo y tiempo de terminación, para la detección de la proteína L1 de PVH 16 en líneas celulares derivadas de carcinomas cervicales humanos y en muestras cérvico-uterinas utilizadas como controles. El protocolo normalizado se aplicó a muestras cérvico-uterinas de mujeres entre 30 y 59 años, 82 con lesiones intraepiteliales cervicales y 10 sin antecedentes de alteraciones citológicas, a las que además se les determinó PVH 16 mediante RCP-TR. Resultados: el procedimiento de Estreptavidina-Biotina resultó el más sensible y específico. La coincidencia entre el método inmunoquímico y la RCP-TR fue de un 98,6 por ciento, la sensibilidad fue de un 98,57 por ciento y la especificidad de un 91,67 por ciento, con valores predictivos negativo y positivo por encima del 90 por ciento. Conclusiones: se demostró la validez del método inmunoquímico como prueba confirmatoria de la infección por PVH 16. Dicho método probó ser sensible, sencillo y no requiere de una compleja infraestructura para detectar PVH 16 en muestras cervicales. Además, esta técnica permite obtener información rápidamente y evita el uso de métodos invasivos(AU)

Introduction: Human Papillomavirus (HPV) infection is the necessary condition for the occurernce and development of cervical cancer. The high oncogenic risk genotypes are the responsible for this type of neoplasia and the most frequent is HPV 16 that affects roughly 60 percent of cases. Commercial kits for HPV detection are expensive for resource-poor countries, which suggests the search for alternative throguh non-expensive simple protocoles. Objectives: to standardize an immunochemical method for the detection of HPV 16 L1 antigen in cervical samples of patients with squamous intraepithelial lesions and to determine the diagnostic coincidence between the immunochemical method and the real-time polymerase chain reaction to estimate the usefulness of this method for the detection of cervical infection with this viral genotype. Methods: three immunostaining methods (Two-Step Indirect Immunoperoxidase, Labelled Streptavidin-Biotin and Enhanced Polymer) were compared in terms of analytical sensitivity, nonspecific background staining and time of completion, for the detection of protein L1 of HPV-16 in a cell line derived from human cervical carcinoma and clinical samples from uterine cervix. The optimized protocol was applied to 82 cervical samples from women aged 30-59 years with squamous intraepithelial lesions and to 10 samples of sexually active women without previous signals of positive cytology. The presence of type 16 HPV was also detected with the aid of RT-PCR. Results: the Streptavidin-Biotin system was the most sensitive and specific. The diagnostic agreement between the immunochemical method and the real-time polymerase chain reaction reached 98.6 percent, sensitivity was 98.57 percent and specificity was 91.67 %, with positive and negative predictive values above 90 percent. Conclusions: the validity of the immunochemical method as a confirmatory test for infection by HPV-16 has been demonstrated. The normalized immunochemical method proved to be a sensitive, simple, relatively fast method to detect HPV from clinical samples of cervical cells. Furthermore, this method provides information quickly, avoiding the use of invasive methods in patients(AU)

sICAM-1 in meningoencephalitis due to Angiostrongylus cantonensis / sICAM-1 en meningoencefalitis por Angiostrongylus cantonensis

INTRODUCTION: Angiostrongylus cantonensis meningoencephalitis is an emergent disease in the Americas. METHOD: Twelve children suffering from eosinophilic meningoencephalitis due to this parasite aged between 6-10 years were studied. Cerebrospinal fluid (CSF) and serum samples were taken simultaneously in the first diagnostic puncture at admission. RESULTS: All cases showed typical findings on the routine CSF and serum analysis: increased CSF total protein, increased Q (CSF/serum) albumin accompanied by eosinophilia in CSF. No intrathecal synthesis of immunoglobulins was found. Mean serum and CSF sICAM-1 values were 337.4 and 3.97 ng/mL. Qalbumin and QsICAM-1 mean values were 4.1 and 6.2 respectively. In 50 percent of the patients an increased brain-derived fraction of sICAM-1 was found. CONCLUSION: It may be suggested that a dynamic of the sICAM-1 brain derived fraction is perhaps associated to the immune response in the evolution of the disease.sICAM-1 may be an agent in negative feedback for eosinophils passage through the blood-CSF barrier into the inflammatory brain response.

INTRODUCCION: La meningoencefalitis por Angiostrongylus cantonensis es una enfermedad emergente en las Américas. MÉTODO: Doce niños con meningoencefalitis eosinofílica por Angiostrongylus cantonensis con edades entre 6 y 10 años fueron estudiados. Se tomaron muestras simultáneas de suero y líquido cefalorraquídeo (LCR) en la primera punción lumbar diagnóstica. RESULTADOS: Todos los casos evidenciaron hallazgos típicos en los análisis de rutina del LCR y suero: incremento de proteínas totales, aumento de la razón albúmina Q (LCR/suero) acompañado de eosinofilia en LCR. No se encontró síntesis intratecal de inmunoglobulinas. Los valores medios de sICAM-1 en suero y LCR fueron de 337,4 y 3,97 ng/mL respectivamente. Los valores medios de Q albúmina y Q sICAM-1 fueron de 4,1 y 6,2 respectivamente. En el 50 por ciento de los pacientes se encontró un incremento de la fracción de sICAM-1 derivado del cerebro. CONCLUSION: Se puede sugerir que la dinámica de la fracción sICAM-1 derivada del cerebro ocurre quizas asociada a la respuesta inmune frente a la enfermedad. sICAM-1 puede ser un agente de retroalimentación negativa para el paso de eosinófilos de la sangre a través de la barrera sangre-LCR en el cerebro inflamado.

IgG2 immunodeficiency: association to pediatric patients with bacterial meningoencephalitis

An IgG subclass deficiency is often associated with bacterial infections. We studied four pediatric patients suffering from meningoencephalitis, two of them due to Streptococcus pneumoniae and two due to Haemophilus influenzae type b. Simultaneous diagnostic serum and cerebrospinal fluid samples were taken during income. The four subclasses of IgG and albumin were quantified in both biologic fluids by radial immunodiffusion. Very low levels of seric IgG2 with non detectable cerebrospinal fluid IgG2 were found in the patients. No intrathecal IgG subclass synthesis was found in two patients. One patient with S. pneumoniae had IgG3 intrathecal synthesis. Intrathecal IgG1, IgG3 and IgG4 synthesis was found in one patient suffering from H. influenzae according with reibergrams. Substitutive therapy with intravenous gammaglobulin was given to the patients as part of the treatment.

Diagnòstico inmunoenzimàtico de entamoeba histolytica (Schaudinn, 1903) / Immunoenzymatic diagnosis of entamoeba histolytic (Schaudinn, 1903)

El método inmunoenzimático utiliza antígeno purificado de Entamoeba histolytica cepa HK-9 adherido a placas de poliestireno, con posterior colocación del suero del paciente y, por último, el conjugado antitotal humano o anti-IgG unido a peroxidasa de rábano picante. El sustrato empleado para esto fue la ortofenilendiamina como cromógeno y peróxido de hidrógeno. En los intervalos entre cada etapa se realizan lavados con solución amortiguadora de fosfato salino-tween 20. El método fue comparado con otros métodos serológicos utilizados en el diagnóstico del protozoo: contrainmunoelectrofóresis y hemaglutinación pasiva. Para ello se utilizaron 1 069 sueros procedentes de pacientes ingresados por presentar un cuadro de diarrea aguda. La mejor correspondencia se observó entre el método inmunoenzimático y la hemaglutinación, donde los resultados positivos y negativos coincidieron en mayor medida que en el resto de las pruebas entre sí. Once pacientes resultaron positivos por el método ELISA y negativos por hemaglutinación, debido a la mayor sensibilidad del método propuesto. Los resultados de la comparación con la contrainmunoelectrofóresis fueron menos concordantes debido a la escasa sensibilidad de la prueba electroforética

Síntesis de inmunoglobulinas en meningoencefalitis A Neisseria meningitidis / Synthesis of immunoglobulins in meningoencephalitis Neisseria A meningitidis

Se estudiaron 13 pacientes con meningoencefalitis bacteriana producida por Neisseria meningitidis correspondiente al serogrupo B y serotipo 15. La IgE se encontró elevada en el suero y en el líquido cefalorraquídeo. No existieron evidencias de ruptura de la barrera hematoencefálica en los casos estudiados. Hubo síntesis intratecal de IgA, IgG e IgE, lo que unido a la presencia de anticuerpos anti-N. meningitidis en el líquido cefalorraquídeo, indica la existencia de una respuesta humoral frente a la infección del sistema nervioso central por este agente invasor

Estudio inmunológico longitudinal en meningoencefalitis: 1984-1986 / Longitudinal immunologic study in meningoencephalitis: 1984-1986

Se realizó un estudio longitudinal a fin de evaluar la respuesta inmune humoral en 111 pacientes que padecieron de menigoencefalitis en el período de 1984-1985, durante 1 año posterior al egreso: a la salida del hospital, a los 30 y 60 días y a los 6 meses y al año. Se utilizaron técnicas para la determinación cuantitativa de IgA, IgM, IgG y anticuerpos específicos contra serogrupos de N. meningitidis de segunda y tercera generación. Cada inmunoglobulina se manifiesta de forma peculiar para cada grupo etario, por lo que la inmunidad adquirida en los primeros años está influida por la edad. A los 60 días para la IgA y 30 días para la IgM e IgG, el comportamiento se homogeneiza. La variación de las inmunoglobulinas en función de la recuperación describe un comportamiento típico para algunos de los grupos etarios, como el de 6 a 7 años, y no se encontraron diferencias significativas, entre los pacientes con meningoencefalitis bacterianas y virales con respecto a la posesión de anticuerpos contra serogrupos de N. meningitidis