Diagnosis of blackleg from cattle tissue impregnated in common filter paper / Diagnóstico de carbúnculo sintomático a partir de papel filtro comum impregnado com tecido bovino

ABSTRACT: Blackleg, an acute myonecrosis caused by Clostridium chauvoei, is usually underdiagnosed since the rapid transport of adequate samples for laboratory testing is difficult. This study tested a direct polymerase chain reaction (PCR) technique using common filter paper impregnated with cattle tissue samples obtained from animals suspected with blackleg. Twenty-five samples, belonging to eleven animals from Rio Grande do Sul State, Brazil, were analyzed. The direct PCR technique identified eight positive animals corroborating with results from microbiological culture. Skeletal muscle was the most common tissue type used in this study and when the animal was positive the pathogen was always detected in this tissue. Storage time of the impregnated filter paper at room temperature did not prove to be a limiting factor for the quality of the results indicating that this procedure can be carried out in the field and samples be sent in regular mail. Our results suggested that direct PCR of common filter paper impregnated with cattle tissue is a practical and economical alternative for the diagnosis of blackleg.

RESUMO: Carbúnculo sintomático, uma mionecrose aguda causada por Clostridium chauvoei, costuma ser subdiagnosticada, pois o transporte rápido de amostras adequadas para exames laboratoriais é complicado. O objetivo deste estudo foi testar a técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) direta, utilizando papel filtro comum impregnado com amostras de tecido bovino obtidas de animais suspeitos de carbúnculo sintomático. Foram analisadas 25 amostras, pertencentes a onze animais do estado do Rio Grande do Sul, Brasil. A técnica de PCR direta identificou oito animais positivos, corroborando com os resultados da cultura microbiológica. O músculo esquelético foi o tecido mais utilizado neste estudo e quando o animal foi positivo, o patógeno sempre foi detectado neste tecido. O tempo de armazenamento do papel filtro impregnado, à temperatura ambiente, não se mostrou um fator limitante para a qualidade dos resultados, indicando que esse procedimento pode ser realizado no local e as amostras enviadas por correio normal. Nossos resultados sugerem que a PCR direta usando papel filtro comum impregnado com tecido bovino é uma alternativa prática e econômica para o diagnóstico de carbúnculo sintomático.

Low birth weight in a subnormal urban cluster under Family Health Strategy's care / Baixo peso ao nascer em um aglomerado urbano subnormal assistido pela Estratégia de Saúde da Família

Abstract Objectives: to identify the prevalence and to analyze the factors associated with low birth weight in a subnormal urban cluster in Pernambuco under Family Health Strategy's care. Methods: a cross-sectional study with a census sample carried out between July and October in 2015. The variables studied were age and years of maternal schooling, social status, housing, water supply, waste disposal, prenatal care, alcohol consumption and cigarette smoking during pregnancy, along with gender, birth weight and prematurity. Stata 12.1 was utilized in order to understand the factors associated with low birth weight through uni-and-multivariate Poisson analysis, adjusted and gross prevalence ratios, composing a final statistical model considering p value <0.05 for statistical significance. Results: regarding the 294 children the LBW prevalence was 12.2% (CI95% = 8.7-16.5). Children whose mothers reported drinking during pregnancy were 2.78 times more at risk of being born with low birth weight (p<0.001) when compared with children whose mothers did not report this practice in gestation. Conclusions: the study evidenced the relevance maternal habits bears in the newborns' health.

Resumo Objetivos: identificar a prevalência e analisar os fatores associados ao baixo peso ao nascer em um aglomerado urbano subnormal em Pernambuco assistido pela Estratégia de Saúde da Família. Métodos: estudo transversal, com amostra censitária, realizado entre julho e outubro de 2015. As variáveis estudadas foram idade e anos de estudo maternos, classe social, moradia, abastecimento de água, destino dos dejetos, pré-natal, consumo de bebidas alcoólicas e uso de cigarro na gestação, sexo da criança, peso ao nascer e prematuridade. Utilizou-se o Stata 12.1 para analisar os fatores associados ao baixo peso ao nascer através das análises uni e multivariada de Poisson, razões de prevalências brutas e ajustadas compondo um modelo estatístico final e considerando para fins de significação estatística o valor p<0,05. Resultados: das 294 crianças, a prevalência de BPN foi de 12,2% (IC95%= 8,7-16,5). As crianças cujas mães referiram o consumo de bebidas alcoólicas durante a gestação tinham o risco de nascer com baixo peso de 2,78 vezes maior (p<0,001) quando comparadas às crianças cujas mães não referiram essa prática na gestação. Conclusões: o estudo evidenciou a relevância dos hábitos maternos na saúde do recém-nascido.

Molecular characterization of virulence genes cctA, nanA, and fliC in Clostridium chauvoei from Rio Grande do Sul and São Paulo State, Brazil / Caracterização molecular dos genes de virulência cctA, nanA e fliC em Clostridium chauvoei isolados no Rio Grande do Sul e São Paulo, Brasil

ABSTRACT: Clostridium chauvoei toxin A (CctA), neuraminidase (NanA), and flagellin (FliC) proteins contribute to the pathogenicity of Clostridium chauvoei, the causative agent of blackleg in cattle. The aim of this study was to analyze the genetic variability of cctA, nanA, and fliC genes in C. chauvoei isolates from the Rio Grande do Sul and São Paulo state- Brazil, during different sampling periods. The presence of these genes was verified through PCR amplification and partial gene sequencing of 17 strains. Alignment of PCR amplicons combined with bioinformatics analysis was used in an attempt to study the variability across C. chauvoei solates. The similarity among the partial sequences of cctA and nanA genes was 100%. The sequencing of fliC revealed three different paralog alleles of flagellin, and two strains were seen to be polymorphic, with amino acid alterations in the predicted protein. Overall, this study indicates that strains of C. chauvoei isolated in Brazil are highly conserved with respect to the virulence factors evaluated.

RESUMO: Toxina A de Clostridium chauvoei (CctA), neuraminidase (NanA) e flagelina (FliC) são proteínas que contribuem para a patogenicidade de Clostridium chauvoei, o agente causador do carbúnculo sintomático em bovinos. O objetivo deste estudo foi analisar a variabilidade genética dos genes cctA, nanA, e fliC em C. chauvoei isolados em diferentes períodos no Rio Grande do Sul e São Paulo. A presença destes genes foi verificada pela amplificação dos produtos da PCR e sequenciamento parcial dos genes de 17 cepas. Os alinhamentos da amplificação dos produtos da PCR combinados com a análise de bioinformática foram utilizados na tentativa de avaliar a variabilidade dos genes entre os isolados de C. chauvoei. A similaridade do sequenciamento parcial dos genes cctA e nanA foi 100%. O sequenciamento do fliC revelou três alelos paralogos diferentes de flagelina e duas cepas mostraram polimorfismos, causando alterações na sequência de aminoácidos. As cepas de C. chauvoei isoladas no Brasil mostraram-se altamente conservadas em relação aos fatores de virulência avaliados neste estudo.

Estilo de vida de gestantes atendidas na atenção primária à saúde de uma capital brasileira / Lifestyle of pregnant women served by the primary health care of a Brazilian capital / Estilo de vida de embarazadas de la atención primaria de salud de una capital brasileña

Objetivo: Avaliar o estilo de vida de usuárias gestantes atendidas no âmbito da atenção primária à saúde da rede pública. Métodos: Trata-se de estudo de natureza descritiva, abordagem quantitativa e corte transversal, realizado em 12 Unidades Básicas de Saúde de Fortaleza (Ceará), no período de dezembro de 2015 a abril de 2016, com 107 gestantes. Utilizou-se o formulário Estilo de Vida Fantástico, que possui 25 itens divididos em nove domínios. As respostas de cada item possuem pontuação que varia de 0 a 4 pontos. A soma de todos os pontos permite classificar o estilo de vida em Excelente (85 a 100 pontos), Muito bom (70 a 84 pontos), Bom (55 a 69 pontos), Regular (35 a 54 pontos) e Necessita melhorar (0 a 34 pontos). Aplicou-se análise estatística descritiva dos dados quantitativos para apresentação de resultados utilizando medidas de tendência central (média) e medidas de dispersão (porcentagem, desvio padrão e valor máximo). Resultados: A média geral obtida (72,26 pontos) enquadrou o grupo na categoria Muito bom. 9% (n=10) das gestantes encontraram-se na categoria Excelente e 6% (n=6) na categoria Regular. Nenhuma gestante teve seu estilo de vida classificado como Necessita melhorar. Atividade física apresentou a menor média, enquanto o álcool obteve a média mais elevada, havendo grande disparidade entre elas. Conclusão: Apesar de o estilo de vida ter sido classificado como adequado, aspectos relevantes para a saúde materno-infantil, como atividade física e nutrição apresentaram pontuações abaixo das esperadas.

Objective: To evaluate the lifestyle of pregnant women cared for within the public primary health care network. Methods: This is a descriptive study with quantitative and cross-sectional approach, carried out in 12 Basic Health Units of Fortaleza (Ceará), in the period from December 2015 to April 2016, with 107 pregnant women. It used the Fantastic Lifestyle form, which comprises 25 items divided into nine domains. The answers to each item have scores ranging from 0 to 4 points. The sum of all points allows lifestyle to be rated into Excellent (85 to 100 points), Very good (70 to 84 points), Good (55 to 69 points), Regular (35 to 54 points,) and Needs improvement (0 to 34 points). Descriptive statistical analysis was applied in order to present the results through measures of central tendency (mean) and measures of spread (percentage, standard deviation, and maximum value). Results: The overall average (72.26 points) ranked the group under the category Very good. Of the pregnant women, 9% (n=10) were found in the category Excellent and 6% (n=6) in the category Regular. No pregnant woman had her lifestyle classified as Needs improvement. Physical activity presented the lowest mean, while alcohol had the highest mean, with great disparity between them. Conclusion: Although the lifestyle was classified as adequate, relevant domains to maternal and child health, such as physical activity and nutrition, showed below-expected scores.

Objetivo: Evaluar el estilo de vida de las usuarias embarazadas que son asistidas en la atención primaria de salud de la red pública. Métodos: Se trata de un estudio descriptivo, de abordaje cuantitativo y corte transversal realizado en 12 Unidades Básicas de Salud de Fortaleza, Ceará en el período entre diciembre de 2015 y abril de 2016 con 107 embarazadas. Se utilizó el formulario Estilo de Vida Fantástico que tiene 25 ítems divididos en nueve dominios. Las respuestas de cada ítem tiene la puntuación entre 0 y 4 puntos. La suma de todos los puntos permite la clasificación del estilo de vida en Excelente (entre 85 y 100 puntos), Muy bueno (entre 70 y 84 puntos), Bueno (entre 55 y 69 puntos), Regular (entre 35 y 54 puntos) y Necesita mejorías (entre 0 y 34 puntos). Se realizó un análisis descriptivo de los datos cuantitativos para la presentación de los resultados utilizándose las medidas de tendencia central (media) y medidas de dispersión (el porcentaje, la desviación típica y el valor máximo). Resultados: La media global (72,26 puntos) ha puesto el grupo en la categoría Muy bueno. El 9% (n=10) de las embarazadas estaban en la categoría Excelente y el 6% (n=6) en la Regular. Ninguna embarazada tuvo su estilo de vida clasificado en Necesita mejoría. La actividad física presentó la media más baja mientras el alcohol tuvo la media más elevada con gran diferencia entre ellos. Conclusión: Aunque el estilo de vida haya sido clasificado como adecuado los aspectos relevantes para la salud materno-infantil como la actividad física y la nutrición presentaron puntuaciones abajo de las que se esperaba.

Acute myonecrosis in horse caused by Clostridium novyi type A

The objective of this study was to describe the first report involving a case of equine acute myonecrosis caused by C. novyi type A with an emphasis on clinical signs, the pathological and bacteriological analysis, and molecular identification of the microorganisms as the key of the definitive diagnosis.

Stability evaluation of propolis topical bases for veterinary use

This study aimed to evaluate and select different dermatological bases incorporated with propolis for veterinary use as well as to analyze the chemical compounds of the propolis hydroalcoholic extract by LC-MS/MS. Thus, formulations were submitted to accelerated stability tests under different temperatures and to mechanical stress, and evaluated for the appearance, color, odor, pH, viscosity, spreadability, and the mean size of the dispersed globules from the internal phase during a period of three months. The creamy gel formulation showed satisfactory results for all the evaluated items with an excellent capability to incorporate the hydroalcoholic extract of propolis associated to the maintenance of its physicochemical properties. The propolis used in this study had been shown to possess antibacterial and antifungal in vitro activity against the main microorganisms responsible for such diseases. Therefore, the propolis creamy gel described here could be a promising formulation for use in the veterinary medicine.

Atividade antimicrobiana do oleorresina de copaíba (Copaifera reticulata) frente a Staphylococcus coagulase positiva isolados de casos de otite em cães / Antimicrobial activity of copaiba oil (Copaifera reticulata) against coagulase positive Staphylococcus of canine otitis

The aim of this study was to investigate the antimicrobial activity of the oleoresin Copaifera reticulata Ducke against Staphylococcus coagulase positive (SCP) isolated from otitis externa in dogs. The minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) of the oleoresin were determined by broth microdilution method. In addition, we verified the antimicrobial susceptibility profile of the isolates of SCP by agar diffusion method. Eight classes of antimicrobial were used to calculate the multidrug resistance. The chemical composition of the oleoresin was performed by gas chromatography coupled to the mass spectrometry (GC/MS), and β-caryophyllene, β-bisabolene, and (E)-α-bergamotene were the main compounds found. The copaiba oleoresin showed a MIC90 of 0.164mg/mL and a CBM90 of 1.3mg/mL. The multidrug resistance was found in 27% of the strains tested. The results suggest that copaiba oleoresin has bacteriostatic and bactericidal activity even in multidrug-resistant coagulase-positive strains.

O objetivo do presente trabalho foi investigar o potencial antimicrobiano do oleorresina de Copaifera reticulata Ducke em isolados de Staphylococcus coagulase positiva (SCP) provenientes de casos de otite externa em cães. O método de microdiluição em caldo foi utilizado para determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM) de oleorresina de copaíba. Em adição, foi determinado o perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos dos isolados de SCP pelo método de difusão em ágar. Oito classes de antimicrobianos foram usadas para o cálculo de multirresistência antimicrobiana. A determinação da composição química do oleorresina de copaíba foi realizada por cromatografia em fase gasosa acoplada à espectrometria de massas (GC/MS), sendo que β-cariofileno, β-bisaboleno e (E)-α-bergamoteno foram os compostos majoritários. O oleorresina de copaíba demonstrou CIM90 de 0,164mg/mL e CBM90 de 1,31mg/mL. A multirresistência foi verificada em 27% das cepas testadas. Os resultados sugerem que o oleorresina de copaíba exerceu atividade bacteriostática e bactericida mesmo em cepas multirresistentes de Staphylococcus coagulase-positiva.

Moraxella bovoculi em casos de ceratoconjuntivite infecciosa bovina no Rio Grande do Sul / Moraxella bovoculi in cases of infectious bovine keratoconjunctivitis in Rio Grande do Sul, Brazil

A ceratoconjuntivite infecciosa (CI), embora raramente fatal, resulta em perdas econômicas significativas para os rebanhos bovinos e ovinos. Os principais agentes causadores dessa enfermidade são Moraxella bovis e Moraxella ovis. Em 2007 foi descrita uma nova espécie também responsável pela CI e denominada Moraxella bovoculi, que até o presente momento, não havia sido relatada no Brasil. Assim, objetivou-se com este trabalho caracterizar e distinguir 54 isolados de Moraxella spp. de amostras clínicas oriundas de 34 bovinos e 17 ovinos, encaminhadas ao Laboratório de Bacteriologia da Universidade Federal de Santa Maria no período de 1990 a 2011, visando a identificação de M. bovoculi. A distinção dos isolados foi fundamentada nas características genotípicas, pela amplificação parcial da região intergênica 16S-23S e clivagem dos produtos da amplificação com enzima RsaI. Como resultados, 25 (46%) isolados foram caracterizados como M. bovis, 17 (32%) como M. ovis e 12 (22%) como M. bovoculi. Logo, conclui-se que M. bovoculi encontra-se presente no rebanho bovino do Rio Grande do Sul e, portanto, no Brasil.

Infectious keratoconjunctivitis (IK), although rarely fatal, results in significant economic losses for cattle and sheep farmers. The main causative agents of this disorder are Moraxella bovis and Moraxella ovis. In 2007, a new species also responsible for IK was described. This newly described pathogen, called Moraxella bovoculi, was never reported in Brazil. Therefore, the aim of this study was confirmed the M. bovoculi among the samples analyzed. For this, 54 isolates of Moraxella spp. from clinical samples derived from 34 cattle and 18 sheep, sent to the laboratory of bacteriology from 1991 to 2011 was characterized. Differentiation among the species was based on genotypic characteristics, using partial amplification of 16S-23S intergenic region and cleavage products of amplification with enzyme RsaI. Results showed that 25 isolates (46%) were characterized as M. bovis, 17 (32%) as M. ovis, and 12 (22%) as M. bovoculi. This means that M. bovoculi is present among cattle herds in Rio Grande do Sul and, therefore, in Brazil.

Necrotizing enteritis associated with Clostridium perfringensType B in chinchillas (Chinchilla lanigera) / Enterite necrosante associado a infecção por Clostridium perfringenstipo B em chinchilas (Chinchilla lanigera)

Four 3-4 month-old chinchillas (Chinchilla lanigera) from a commercial flock of 395 chinchillas, were found dead with evidence of previous diarrhea and prolapsed rectum. A fifth 8 month-old chinchilla died 8 hours after being found recumbent, apathetic, diarrheic and with a prolapsed rectum. Two chinchillas were necropsied and observed gross lesions consisted of extensive hemorrhagic enteritis, mild pulmonary edema and enlarged and yellow liver; this latter finding was particularly prominent in the chinchilla presenting longer clinical course. Histologically there was necrotizing enteritis associated with abundant bacterial rods aggregates in the intestinal surface epithelium and within the lamina propria. In the lungs there were small amounts of pink proteinaceous material (edema) in the interstitium and marked vacuolar hepatocellullar degeneration (lipidosis) in the liver. Anaerobic cultures from the intestinal contents of one of the affected chinchillas yielded Clostridium perfringens. Genotyping of this C. perfringens isolate was achieved by multiplex polymerase chain reaction (mPCR) as C. perfringenstype B due to detection of alpha, beta and epsilon-toxin genes. These findings suggest C. perfringens type B as an important cause of sudden or acute death in chinchillas.

Quatro chinchilas (Chinchilla lanigera) com 3-4 meses de idade, pertencentes a um criadouro comercial com 395 chinchilas, foram encontradas mortas com evidências de diarreia prévia e prolapso de reto. Uma quinta chinchila, de oito meses de idade, foi encontrada em decúbito, apática, com diarreia e prolopaso de reto, e morreu após oito horas. Duas chinchilas foram submetidas à necropsia. As lesões macroscópicas consistiam de extensa enterite hemorrágica, moderado edema pulmonar e fígado pálido e aumentado de volume; este achado foi particularmente proeminente na chinchila que apresentou curso clínico mais longo. Histologicamente foi observado enterite necrosante associada a numerosos agregados bacterianos na superfície epitelial com invasão da lâmina própria. Nos pulmões foi observada pequena quantidade de material proteináceo róseo amorfo (edema) no interstício e marcada degeneração hepatocelular vacuolar (lipidose). Cultura anaeróbica do conteúdo intestinal de uma chinchila afetada revelou crescimento de Clostridium perfringens. A genotipificação de C. perfringensisolado, realizada por reação em cadeia de polymerase multiplex(mPCR), revelou C. perfringenstipo B pela detecção das tóxinas alfa, beta e épisilon. Estes achados sugerem que infecção por C. perfringenstipo B é uma importante causa de morte súbita ou aguda em chinchilas.