Analysis of laser therapy effects in Sporothrix schenckii inactivation in vivo

Abstract Introduction Sporotrichosis is a common disease in tropical regions, caused by the fungus Sporothrix schenckii, affecting mainly rural workers and in direct contact with animals. Although treatment by indiscriminate use of oral antifungal drugs gives rise resistant isolates, leading to therapeutic failures and no remission of the disease. To evaluate the effectiveness of red low-power laser photobiomodulation in inactivation of S. schenckii infection induced in rodents. Methods Subcutaneously inoculation (2x103 S. schenckii/ml, 0.2 ml suspension) in the left footpad, in 27 mice divided into: control (n = 6, inoculated, without irradiation): early stage (not inoculated) = 1th biopsy; intermediate (9 weeks of evolution) = 2nd biopsy; final (21 weeks of evolution) = 3th biopsy. Treated (n = 21, inoculated and irradiated): early (13 weeks of evolution, 4 weeks after first irradiation) = 4th biopsy, intermediate (17 weeks of evolution, 8 weeks after first irradiation) = 5th biopsy, final (21 weeks of evolution, 12 weeks after first irradiation) = 6th biopsy. Serial irradiation with biopsies occurred every 30 days during each month, for three months. At the end of testing, the mice were euthanized, and histological analyzes of biopsies were performed. Results Each laser treatment session showed an inactivation of S. schenckii in treated animals compared to controls, with a regression of pseudoepitheliomatous hyperplasia, chronic inflammation, neutrophils, granulomas, giant mononuclear cells and steroid corpuscles. Conclusion The laser photobiomodulation was effective on S. schenckii inactivation, appearing to be an interesting therapeutic option in infections caused by this organism.

In vitro reduction of pathogenic sporothrix schenckii fungus by photodynamic therapy / Terapia fotodinâmica na redução in vitro do fungo patogênico sporothrix schenckii

Sporotrichosis is a disease that affects the lymph vessels, skin and some internal organs. Most cases are presented as asubacute chronic mycosis caused by the Sporothrix schenckii fungus; fairly common in tropical regions. The aim of thisstudy was to evaluate the susceptibility of Sporothrix schenckii yeast cells to the effects of photodynamic inactivation.For this, the viable cells were separated into four groups: irradiated with photosensitizer group (L+F+); irradiated withoutphotosensitizer group (L+F-), without irradiation and with photosensitizer group (L-F+); and without irradiation andwithout photosensitizer group (L-F-). The methylene blue photosensitizer concentration used was 0.1 mg/mL, and theAluminum Gallium Arsenide laser dose was 26.3 J/cm2. Then, counting of colony forming units (CFUs) was performedin each group. The main result was that the irradiated group with photosensitizer (L+F+) was the one that showed nogrowth of CFUs. Thus, it was concluded that Sporothrix schenckii can be inactivated by use of photodynamic therapy

A esporotricose é uma doença que afeta os vasos linfáticos, pele e alguns órgãos internos. A maioria dos casos seapresenta como uma micose subaguda à crônica, provocada por fungos do complexo Sporothrix schenckii, bastantecomuns em regiões tropicais. O objetivo deste estudo foi avaliar a suscetibilidade aos efeitos da inativação fotodinâmicaem células leveduriformes de fungos do complexo Sporothrix schenckii. Para tal, as células viáveis foram separadas emquatro grupos, sendo estes: grupo irradiado com fotossensibilizador (L+F+); grupo irradiado sem fotossensilizador (L+F-),grupo não irradiado com fotossensibilizador (L-F+); e grupo não irradiado sem fotossensibilizador (L-F-). A concentraçãodo fotossensibilizador azul de metileno utilizada foi de 0,1 mg/mL, e a dosagem do laser de Arseneto de Gálio Alumíniofoi de 26,3 J/cm2. Em seguida, foi realizada a contagem das unidades formadoras de colônias (UFCs) em cada grupo.Como principal resultado, verificou-se que o grupo irradiado com fotossensibilizador (L+F+) foi o único que nãoapresentou crescimento de UFCs. Dessa forma, concluiu-se que fungos do complexo Sporothrix schenckii podem serinativados com o uso da terapia fotodinâmica

Clonagem, caracterização e expressão heteróloga de uma calnexina homóloga do fungo patogênico Paracoccidioides brasiliensis / Cloning, characterization and heterologue expression of a calnexin homologue from the pathogenic fungus Paracoccidioides brasiliensis

Descrevemos neste trabalho a clonagem do cDNA de, que codifica uma calnexina homóloga do retículo endoplasmático de Paracoccdiioides brasiliensis. Esta chaperone reconhece especificamente glicoproteínas monoglicosiladas no retículo endoplasmático, sendo assim um componente essencial para o processo de dobramento de glicoproteínas nascentes que serão secretadas. A fase aberta de leitura da PbCnx foi encontrada num fragmento de 1.701 pares de bases (pb) que codifica uma proteína de 567 resíduos de aminoácidos, com massa estimada em 62.680 Da. A seqüência deduzida de aminoácidos compartilha identidade com as sequências descritas das calnexinas de Aspergillus fumigatus, Aspergillus niger e apresenta vinte potenciais sítios de fosforilação e dois de glicosilação. Além disso, esta seqüência deduzida de aminoácidos apresenta um extraordinário grau de conservação, especialmente numa região central, denominada domínio central altamente conservado (hcd) que contém, como uma 'marca', sequências repetidas KPEDWD; estas sequências são consideradas sítios ligantes de cálcio de alta afinidade e são encontradas em todos os membros da família das calnexinas e calreticulinas. A análise das hibridações por Southem e Northem blots, mostraram que a proteína é codificada por um único gene ou gene de poucas cópias. O cDNA que codifica PbCnx foi expresso como proteína recombinante em Escherlchia colí. A proteína recombinante purificada foi reconhecida por soros de paciente com paracoccidioidomicose (forma crônica). Foi gerado também um soro policlonal monoespecífico, a partir da proteína recombinante de fusão, utilizado para a localização celular da proteína, através de microscopia confocal. O padrão de marcação observado por imunofluorescência mostra a proteína intensamente distribuída na região citosólica da célula. Além disso, este soro policlonal reconheceu especificamente a calnexina nativa através de ensaios de immunoblotting do extrato total de células leveduriformes de P. brasilíensis.