Oxidative and osmotolerant effects in Salvator merianae (Squamata: Teiidae) red blood cells during hibernation

Abstract Hibernation is a natural condition of animals that lives in the temperate zone, although some tropical lizards also experience hibernation annually, such as the lizard native from South America, Salvator merianae, or tegu lizard. Even though physiological and metabolic characteristic associated with hibernation have been extensively studied, possible alterations in the red blood cells (RBC) integrity during this period remains unclear. Dehydration and fasting are natural consequences of hibernating for several months and it could be related to some cellular modifications. In this study, we investigated if the osmotic tolerance of RBCs of tegu lizard under hibernation is different from the cells obtained from animals while normal activity. Additionally, we indirectly investigated if the RBCs membrane of hibernating tegus could be associated with oxidation by quantifying oxidized biomolecules and the activity of antioxidant enzymes. Our findings suggest that RBCs are more fragile during the hibernation period, although we did not find evidence of an oxidative stress scenario associated with the accentuated fragility. Even though we did not exclude the possibility of oxidative damage during hibernation, we suggested that an increased RBCs volume as a consequence of hypoosmotic blood during hibernation could also affect RBCs integrity as noted.

Resumo A hibernação é uma condição natural dos animais que vivem na zona temperada, embora alguns lagartos tropicais também experenciem hibernação anualmente, como é o caso do lagarto nativo da América do Sul, Salvator merianae ou teiú. Embora as características fisiológicas e metabólicas associadas à hibernação tenham sido amplamente estudadas, possíveis alterações na integridade das hemácias durante esse período ainda permanecem obscuras. A desidratação e o jejum são consequências naturais da hibernação por vários meses e podem estar relacionadas a algumas modificações celulares. Neste estudo, investigamos se a tolerância osmótica de hemácias do lagarto teiú sob hibernação são diferentes das células obtidas de animais em atividade normal. Além disso, investigamos indiretamente por meio da quantificação de biomoléculas oxidadas e da atividade de enzimas antioxidantes se a membrana das hemácias dos teiús em hibernação poderia estar associada à oxidação. Nossos resultados sugerem que as hemácias possuem maior fragilidade durante o período de hibernação, embora não tenhamos encontrado evidências de um cenário de estresse oxidativo associado à essa fragilidade acentuada. Embora não tenhamos excluído a possibilidade de dano oxidativo durante a hibernação, sugerimos que um aumento no volume das hemácias como consequência de sangue hipoosmótico durante a hibernação também poderia afetar a integridade de hemácias, tal como foi observado.

Oxidative and osmotolerant effects in Salvator merianae (Squamata: Teiidae) red blood cells during hibernation / Efeitos de oxidação e osmotolerância dos eritrócitos de Salvator merianae (Squamata: Teiidae) durante a hibernação

Abstract Hibernation is a natural condition of animals that lives in the temperate zone, although some tropical lizards also experience hibernation annually, such as the lizard native from South America, Salvator merianae, or "tegu" lizard. Even though physiological and metabolic characteristic associated with hibernation have been extensively studied, possible alterations in the red blood cells (RBC) integrity during this period remains unclear. Dehydration and fasting are natural consequences of hibernating for several months and it could be related to some cellular modifications. In this study, we investigated if the osmotic tolerance of RBCs of tegu lizard under hibernation is different from the cells obtained from animals while normal activity. Additionally, we indirectly investigated if the RBCs membrane of hibernating tegus could be associated with oxidation by quantifying oxidized biomolecules and the activity of antioxidant enzymes. Our findings suggest that RBCs are more fragile during the hibernation period, although we did not find evidence of an oxidative stress scenario associated with the accentuated fragility. Even though we did not exclude the possibility of oxidative damage during hibernation, we suggested that an increased RBCs volume as a consequence of hypoosmotic blood during hibernation could also affect RBCs integrity as noted.

Resumo A hibernação é uma condição natural dos animais que vivem na zona temperada, embora alguns lagartos tropicais também experenciem hibernação anualmente, como é o caso do lagarto nativo da América do Sul, Salvator merianae ou "teiú". Embora as características fisiológicas e metabólicas associadas à hibernação tenham sido amplamente estudadas, possíveis alterações na integridade das hemácias durante esse período ainda permanecem obscuras. A desidratação e o jejum são consequências naturais da hibernação por vários meses e podem estar relacionadas a algumas modificações celulares. Neste estudo, investigamos se a tolerância osmótica de hemácias do lagarto teiú sob hibernação são diferentes das células obtidas de animais em atividade normal. Além disso, investigamos indiretamente por meio da quantificação de biomoléculas oxidadas e da atividade de enzimas antioxidantes se a membrana das hemácias dos teiús em hibernação poderia estar associada à oxidação. Nossos resultados sugerem que as hemácias possuem maior fragilidade durante o período de hibernação, embora não tenhamos encontrado evidências de um cenário de estresse oxidativo associado à essa fragilidade acentuada. Embora não tenhamos excluído a possibilidade de dano oxidativo durante a hibernação, sugerimos que um aumento no volume das hemácias como consequência de sangue hipoosmótico durante a hibernação também poderia afetar a integridade de hemácias, tal como foi observado.

Caffeine intake reduces sedentary time and increases physical activity predisposition in obese police officers

Sedentary time is associated with increased obesity in police officers. Caffeine intake may reduce sedentary time but it has not been extensively investigated. In the present study, the effect of caffeine ingestion on sedentary time was investigated in obese police officers. Fourteen obese police officers ingested either 5 mg/kg of caffeine or cellulose (placebo) for six days. Information on inactivity time, time spent with physical activities, self-reported perception of tiredness, and physical activity disposition was obtained daily during the intervention period. Sedentary and physical activity times were divided into two intraday periods (T1: 08:00 am-02:00 pm and T2: 02:00 pm-08:00 pm). Caffeine intake decreased the sedentary time in both T1 (79.2±2.2%) and T2 (79.1±2.5%), when compared with T2 of the placebo condition (81.1±3.6%, P<0.05). Caffeine intake also increased the time spent on light physical activities in T1 and T2 (17±2 and 18±2%), when compared with T2 of the placebo condition (16±3%, P<0.05). In addition, sedentary time increased and light physical activity time decreased from T1 to T2 in the placebo (P<0.001) but not in the caffeine condition (P=0.81). Caffeine intake had no effect on tiredness (P>0.05), but it increased the self-reported physical activity disposition compared to the placebo condition (4.5±2.7 vs 3.2±2.3 units, P<0.05). Caffeine intake reduced the sedentary time and increased the time spent on light physical activities of obese police officers, which seems to be related to a higher disposition for the practice of physical activity.

Does caffeine ingestion before a short-term sprint interval training promote body fat loss?

We investigated the effect of caffeine ingestion combined with a 2-wk sprint interval training (SIT) on training-induced reductions in body adiposity. Twenty physically-active men ingested either 5 mg/kg of cellulose as a placebo (PLA, n=10) or 5 mg/kg of caffeine (CAF, n=10) 60 min before each SIT session (13×30 s sprint/15 s of rest). Body mass and skinfold thickness were measured pre- and post-training. Energy expenditure was measured at rest, during exercise, and 45 min after exercise in the first SIT session. Body fat was similar between PLA and CAF groups at pre-training (P>0.05). However, there was a significant decrease in body fat after training in the CAF group (−5.9±4.2%, P<0.05) but not in PLA (1.5±8.0%, P>0.05). There was no difference in energy expenditure at rest and during exercise between PLA and CAF groups (P>0.05), but the post-exercise energy expenditure was 18.3±21.4% greater in the CAF than in the PLA group (P<0.05). In conclusion, caffeine ingestion before SIT sessions induced a body fat loss that may be associated with higher post-exercise energy expenditure.

Susceptibility of cariogenic microorganisms to phytoconstituents / Susceptibilidade de microrganismos cariogênicos a fitoconstituintes

Abstract This study aimed to evaluate the in vitro antibacterial activity of the phytochemicals thymol, linalool, and citronellol against Streptococcus mutans, Streptococcus salivarius and Streptococcus oralis. Disk diffusion screening on solid medium and measurement of the diameter of the bacterial growth inhibition halos was the technique utilized. The Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of the substances was determined using serial substance dilutions and microdilution technique in Brain Heart Infusion culture medium. After incubation for 24 hours in an oven at 37 °C, plate reading was completed and confirmed by visual method using 2,3,5 triphenyl tetrazolium chloride dye. The Minimum Bactericidal Concentration (MBC) was determined from MIC subcultures. Assays were performed in triplicate, and chlorhexidine was used as a positive control. The diameters in mm of the growth inhibition halos ranged between 7.3 and 10.7 for S. mutans, 7.3 and 10.0 for S. oralis, and 8.2 and 9.8 for S. salivarius. The MIC and MBC values obtained converged, ranging from maximum values in the presence of Linalool (1,250.0 mg/mL, 2,500.0 mg/mL and 2,500.0 mg/mL, respectively, for S. mutans, S. oralis, and S. salivarius); and minimum values with Thymol (312.5 μg/ml, 156.2 μg/mL and 156.2 μg/ml, respectively for S. mutans, S. oralis, and S. salivarius). All the tested phytochemicals displayed antibacterial activity, thus representing substances with potential applications in preventing tooth decay.

Resumo Este estudo objetivou avaliar a atividade antibacteriana in vitro dos fitoquímicos timol, linalol e citronelol sobre Streptococcus mutans, Streptococcus salivaris e Streptococcus oralis. Utilizou-se a técnica de discos de difusão em meio sólido e medição do diâmetro dos halos de inibição. A concentração inibitória mínima (CIM) das substâncias foi determinada utilizando diluições em série das substâncias e técnica de microdiluição em meio de cultura de Brain Heart Infusion. Após incubação durante 24 horas em estufa a 37 °C, a leitura da placa foi confirmada pelo método visual usando o corante 2,3,5 trifenil cloreto de tetrazólio. A concentração bactericida mínima (CBM) foi determinada a partir de subculturas de MIC. Os ensaios foram realizados em triplicata, e clorexidina foi usada como um controle positivo. Os diâmetros dos halos de inibição do crescimento variaram entre 7,3 e 10,7 por S. mutans, 7,3 e 10,0 por S. oralis, e 8,2 e 9,8 para S. salivaris. Os valores de CIM e CBM obtidos variaram de valores máximos na presença de linalol (1.250,0 mg/mL, 2.500.0 mg/mL e 2.500.0 mg/mL, respectivamente, para o S. mutans, S oralis e S. salivaris); a valores mínimos com timol (312,5 μg/ml, 156,2 μg/mL e 156,2 μg/ml, respectivamente para S. mutans, S. oralis e S. salivaris). Todos os fitoquímicos testados apresentaram atividade antibacteriana, representando, assim, substâncias com potencial de aplicações na prevenção da cárie dentária.

Airborne fungi in an intensive care unit / Fungos anemófilos em uma unidade de terapia intensiva

Abstract The presence of airborne fungi in Intensive Care Unit (ICUs) is associated with increased nosocomial infections. The aim of this study was the isolation and identification of airborne fungi presented in an ICU from the University Hospital of Pelotas - RS, with the attempt to know the place's environmental microbiota. 40 Petri plates with Sabouraud Dextrose Agar were exposed to an environment of an ICU, where samples were collected in strategic places during morning and afternoon periods for ten days. Seven fungi genera were identified: Penicillium spp. (15.18%), genus with the higher frequency, followed by Aspergillus spp., Cladosporium spp., Fusarium spp., Paecelomyces spp., Curvularia spp., Alternaria spp., Zygomycetes and sterile mycelium. The most predominant fungi genus were Aspergillus spp. (13.92%) in the morning and Cladosporium spp. (13.92%) in the afternoon. Due to their involvement in different diseases, the identified fungi genera can be classified as potential pathogens of inpatients. These results reinforce the need of monitoring the environmental microorganisms with high frequency and efficiently in health institutions.

Resumo A presença de fungos anemófilos nas UTIs está associada com o aumento de infecções nosocomiais. O objetivo deste estudo foi isolar e identificar quais os principais fungos anemófilos presentes em uma Unidade de Terapia Intensiva (UTI) de um Hospital Universitário de Pelotas - RS, na tentativa de conhecer a microbiota ambiental do local. Através de 40 placas de Petri com Agar Sabouraud dextrose expostas no ambiente de UTI foram coletadas amostras por exposição em locais estratégicos durante períodos da manhã e tarde por dez dias. Sete gêneros fúngicos foram identificados: Penicillium spp. (15,18%), o gênero de maior frequência, seguido de Aspergillus spp., Cladosporium spp., Fusarium spp., Paecelomyces spp., Curvularia spp., Alternaria spp., além de Zigomicetos e micélios estéreis. Houve predomínio de Aspergillus spp. (13,92%) pela manhã e Cladosporium spp. (13,92%) a tarde. Por estarem envolvidos em diferentes enfermidades, os gêneros identificados podem ser classificados como patógenos em potencial aos pacientes internados. Estes resultados reforçam a necessidade de um monitoramento dos micro-organismos ambientais com maior freqüência e eficiência nas instituições de saúde.

Antifungal activity of linalool in cases of Candida spp. isolated from individuals with oral candidiasis / Atividade antifúngica do linalol em casos de Candida spp. isolados de indivíduos com candidíase oral

Abstract This study analyzed the antifungal activity of phytoconstituents from linalool on Candida spp. strains, in vitro, isolated from patients with clinical diagnoses of oral candidiasis associated with the use of a dental prosthesis. Biological samples were collected from 12 patients using complete dentures or removable partial dentures and who presented mucous with diffuse erythematous or stippled features, indicating a clinical diagnosis of candidiasis. To identify fungal colonies of the genus Candida, samples were plated onto CHROMagar Candida®. The antifungal activity of linalool, a monoterpene unsaturated constituent of basil oil, was performed using the broth microdilution technique. Then, the minimum inhibitory concentration (MIC), the two subsequent stronger concentrations and the positive controls were subcultured on Sabouraud Dextrose Agar plates to determine the minimum fungicidal concentration (MFC). The experiments were performed in triplicate and nystatin was used as a positive control in all tests. Diagnoses of oral candidiasis were verified in eight patients (66.6%) and the most prevalent fungal species was Candida albicans (37.5%), followed by Candida krusei (25.0%); and Candida tropicalis (4.2%). The best antifungal activity of linalool was observed on Candida tropicalis (MIC = 500 mg/mL), followed by Candida albicans (MIC = 1.000 mg/mL), and Candida krusei (MIC = 2.000 mg/mL).Under the study conditions and based on the results obtained, it can be concluded that the Candida strains tested were susceptible to linalool.

Resumo Este estudo analisou a atividade antifúngica do fitoconstituinte linalol em cepas de Candida ssp, in vitro, isolados de pacientes com o diagnóstico clínico de candidíase oral associado ao uso de prótese dentária. As amostras biológicas foram coletadas de 12 pacientes portadores de próteses totais ou próteses parciais removíveis e que apresentavam características de mucosa eritematosa difusa ou pontilhadas, indicando um diagnóstico clínico de candidíase. Para identificar colônias de fungos do gênero Candida, as amostras foram semeadas em CHROMagar Candida®. A atividade antifúngica do linalol, um componente insaturado monoterpene de óleo de manjericão, foi realizada através da técnica de microdiluição em caldo. Em seguida, a concentração inibitória mínima (MIC), as duas concentrações consecutivas mais fortes e os controles positivos foram subcultivados em placas de Agar Sabouraud Dextrose para determinar a concentração fungicida mínima (MFC). Os experimentos foram realizados em triplicata e a nistatina foi usada como controle positivo em todos os testes. O diagnóstico de candidíase oral foi comprovado em oito pacientes (66,6%) e as espécies de fungos mais prevalentes foram Candida albicans (37,5%), seguido por Candida krusei (25,0%); e Candida tropicalis (4,2%). A melhor atividade antifúngica do linalol foi observada em Candida tropicalis (MIC = 500 mg/ml), seguido por Candida albicans (CIM = 1,000 mg/mL), e Candida krusei (CIM = 2,000 mg/mL). Sob as condições do estudo e com base nos resultados obtidos, pode-se concluir que as estirpes de Candida testadas foram susceptíveis a linalol.

Antifungal susceptibility profile of diferent yeasts isolates from wild animals, cow's milk with subclinical mastitis and hospital environment / Perfil de suscetibilidade antifúngica de diferentes leveduras isoladas da microbiota de animais silvestres, leite com mastite subclínica e ambiente hospitalar

Abstract Yeast infections have acquired great importance due to increasing frequency in immunocompromised patients or patients undergoing invasive diagnostic and therapeutic techniques, and also because of its high morbidity and mortality. At the same time, it has been seen an increase in the emergence of new pathogenic species difficult to diagnose and treat. The aim of this study was to determine the in vitro susceptibility of 89 yeasts from different sources against the antifungals amphotericin B, voriconazole, fluconazole and flucytosine, using the VITEK® 2 Compact system. The antifungal susceptibility was performed automatically by the Vitek® 2 Compact system. The origin of the yeasts was: Group 1 - microbiota of wild animals (W) (26/89), 2 - cow's milk with subclinical mastitis (M) (27/89) and 3 - hospital enviorment (H) (36/89). Of the 89 yeasts submitted to the Vitek® 2 test, 25 (20.9%) were resistant to fluconazole, 11 (12.36%) to amphotericin B, 3 (3.37%) to voriconazole, and no sample was resistant to flucytosine. Regarding the minimum inhibitory concentration (MIC), fluconazole showed an MIC between 1 and 64 mg/mL for the three groups, voriconazole had an MIC between 0.12 and 8 mg/mL, amphotericin B had an MIC between 0.25 and 4 mg/mL for group H and group W respectively, between 0.25 and 16 mg/mL for group M and flucytosine had an MIC equal to 1μg/mL for all groups. The yeasts isolated from the H group showed the highest resistance to fluconazole 12/89 (13.49%), followed by group W (7.87%) and group M (5.62%). The more resistant group to voriconazole was followed by the M and H groups, the W group showed no resistance to this antifungal. Group H was the least resistant (2.25%) to amphotericin.

Resumo As infecções por leveduras têm adquirido grande importância, devido ao aumento da sua frequência em pacientes imunocomprometidos ou pacientes submetidos a técnicas diagnosticas e terapêuticas agressivas, e devido sua alta morbidade e mortalidade. Paralelamente tem-se observado um incremento na aparição de novas espécies patógenas difíceis de diagnosticar e tratar. O objetivo desse estudo foi avaliar a suscetibilidade in vitro de 89 leveduras de diferentes origens frente aos antifúngicos Anfotericina B, Voriconazol, Fluconazol e Fluocitocina pelo Sistema Vitek® 2. O antifungigrama foi realizado automaticamente pelo Vitek® 2 Compact. A origem das leveduras foi: Grupo 1- Microbiota de Animais Silvestres (S) (26/89), 2- Leite com mastite bovina subclínica (L) (27/89) e 3- Ambiente Hospitalar (H) (36/89). Das 89 leveduras submetidas à carta Vitek®, 25 (20.09%) foram resistentes ao fluconazol, oito (8.99%) à anfotericina B, três (3.37%) ao voriconazol, e nenhuma amostra mostrou-se resistente a fluocitosina. O grupo três (H) foi mais resistente ao fluconazol que os demais, já o dois (L) foi mais resistente ao voriconazol e a anfotericina B que os outros dois. O fluconazol pode ter apresentado maior número de resistências devido ser um fármaco comumente usado principalmente em humanos. As leveduras isoladas de humanos apresentaram maior número de resistências aos fármacos testados do que as leveduras isoladas de animais silvestres. O que pode ocorrer devido a uma maior exposição dos humanos aos fármacos em relação aos animais que vivem isolados em ambientes selvagens e na maioria dos casos nunca teve contato com fármacos de qualquer origem.

Decellularization of placentas: establishing a protocol

Biological biomaterials for tissue engineering purposes can be produced through tissue and/or organ decellularization. The remaining extracellular matrix (ECM) must be acellular and preserve its proteins and physical features. Placentas are organs of great interest because they are discarded after birth and present large amounts of ECM. Protocols for decellularization are tissue-specific and have not been established for canine placentas yet. This study aimed at analyzing a favorable method for decellularization of maternal and fetal portions of canine placentas. Canine placentas were subjected to ten preliminary tests to analyze the efficacy of parameters such as the type of detergents, freezing temperatures and perfusion. Two protocols were chosen for further analyses using histology, scanning electron microscopy, immunofluorescence and DNA quantification. Sodium dodecyl sulfate (SDS) was the most effective detergent for cell removal. Freezing placentas before decellularization required longer periods of incubation in different detergents. Both perfusion and immersion methods were capable of removing cells. Placentas decellularized using Protocol I (1% SDS, 5 mM EDTA, 50 mM TRIS, and 0.5% antibiotic) preserved the ECM structure better, but Protocol I was less efficient to remove cells and DNA content from the ECM than Protocol II (1% SDS, 5 mM EDTA, 0.05% trypsin, and 0.5% antibiotic).

Effect of cottonseed oil and ferrous sulfate in broiler diets on intestinal morphometry at 42 days of age / Efeito de óleo de semente de algodão e sulfato ferroso em dietas de aves na morfometria intestinal aos 42 dias de idade

The aim of the study was to evaluate the intestinal morphometry of broilers at 42 days of age fed diets containing different levels of cottonseed oil, with and without addition of ferrous sulfate. A total of 560 male Ross chickens were used in a completely randomized design with a 4×2 factorial arrangement and five replications with 14 birds. The cottonseed oil levels tested were 0%, 2%, 4%, and 6%. At 42 days of age, one bird per replicate was collected for morphometric. Analyzed variables were villus height, crypt length and muscle wall thickness. The statistical analysis was performed using SAS, P=0.05. In the duodenum and ileum, there was no significant effect of interaction between the treatments. In the jejunum, only the length of the crypt, the treatment with cottonseed oil 2%, more ferrous sulfate resulted in lower values; however, the same oil content without ferrous sulfate led to a greater length, which was also observed in the treatment with 4% oil plus ferrous sulfate. Inclusion of cottonseed oil in broiler diets at 42 days of age does not impair their intestinal morphology. Supplementation with ferrous sulfate at these levels is unnecessary, since no improvement was observed in the intestinal morphometric.(AU)

O objetivo de estudo foi avaliar a morfometria intestinal de aves aos 42 dias de vida alimentadas com dietas contendo níveis variados de óleo de semente de algodão com e sem adição de sulfato ferroso. Um total de 560 machos de aves Ross foram usadas em estudo randomizado com amostras 4x2 e 5 replicações com 14 aves. Os níveis de óleo de semente de algodão testados foram 0%, 2%, 4%, e 6%. Aos 42 dias de idade, um pássaro por replica foi coletado para morfometria. As variáveis analisadas foram altura de villus, comprimento de cripta, e espessura de parede muscular. A análise estatística foi realizada com SAS, P=0,05. Não houve efeito significativo de interação entre tratamentos no duodeno ou íleo. No jejuno, apenas o comprimento da cripta, no tratamento com óleo de semente de algodão a 2% com mais sulfato ferroso, apresentou valor mais baixo. No entanto, o mesmo valor de óleo sem sulfato ferroso resultou em maior comprimento, resultado percebido também com 4% de óleo. Inclusão de óleo de semente de algodão em dietas de aves aos 42 dias de idade não causa danos à morfologia intestinal. Suplementação com sulfato ferroso não é necessário, já que não houve melhora em morfometria intestinal.

A eficácia da solução de EDTA na remoção de smear layer e sua relação com o tempo de uso: uma revisão integrativa

O presente trabalho teve como objetivo identificar qual o tempo de aplicação mais frequentemente utilizado do EDTA para remoção eficaz da smear layer no interior dos canais radiculares e quais os fatores que podem influenciar na ação do EDTA. Metodologia: foi realizada uma revisão integrativa de literatura, utilizando-se as bases de dados Scielo, Lilacs, PubMed e Science Direct com os seguintes descritores: EDTA, irrigação final (final rinse), camada de esfregaço (smear layer), tempo de irrigação (time of irrigation), descacificação (decalcification) e microdureza (microhardness). Os critérios de inclusão foram artigos publicados na íntegra, no idioma Inglês e Português, durante o período de janeiro de 2000 a janeiro de 2017. Resultados: após análise baseada nos critérios de inclusão, leitura dos resumos disponíveis e avaliação sobre o questionamento elaborado, foram identificadas no Scielo um total de 507 referências bibliográficas, as quais, três foram selecionadas. Já no Lilacs foram identificados 35 artigos, sendo considerados dois. No PubMed foram identificadas 450 referências, sendo considerada apenas uma. Foram encontrados 282 artigos na Science Direct, sendo selecionados 24. Desta forma, 30 artigos fizeram parte da presente revisão. Conclusão: com base na literatura estudada, verificou-se que e o tempo de uso do EDTA interferiu diretamente na qualidade da remoção da smear layer. Além disso, verificou-se que o EDTA a 17% utilizado por um período de um minuto foi ideal para a remoção da smear layer, enquanto que a aplica- ção de EDTA no tempo superior a sete minutos provocou erosão da dentina peritubular

In vitro susceptibility of nematophagous fungi to antiparasitic drugs: interactions and implications for biological control / Suscetibilidade in vitro de fungos nematófagos à antiparasitários: interações e implicações para o controle biológico

Abstract The fast anthelmintic resistance development has shown a limited efficiency in the control of animal's endoparasitosis and has promoted research using alternative control methods. The use of chemicals in animal anthelmintic treatment, in association with nematophagous fungi used for biological control, is a strategy that has proven to be effective in reducing the nematode population density in farm animals. This study aims to verify the in vitro susceptibility of the nematophagous fungi Arthrobotrys oligospora, Duddingtonia flagrans and Paecilomyces lilacinus against the antiparasitic drugs albendazole, thiabendazole, ivermectin, levamisole and closantel by using the Minimum Inhibitory Concentration (MIC). MICs ranged between 4.0 and 0.031 µg/mL for albendazole, thiabendazole and ivermectin, between 0.937 and 0.117 µg/mL for levamisole, and between 0.625 and 0.034 µg/mL for closantel. The results showed that all antiparasitic drugs had an in vitro inhibitory effect on nematophagous fungi, which could compromise their action as agents of biological control. D. flagrans was the most susceptible species to all drugs.

Resumo O desenvolvimento rápido da resistência anti-helmíntica demonstrou a eficiência limitada no controle de endoparasitoses em animais, e promoveu a investigação em métodos de controles alternativos. O uso de produtos químicos no tratamento anti-helmíntico animal, em associação com fungos nematófagos utilizados para o controlo biológico, é uma estratégia que tem provado ser eficaz na redução da densidade da população de nematódeos em animais agrícolas. Este estudo teve como objetivo verificar a suscetibilidade in vitro dos fungos nematófagos Arthrobotrys oligospora, Duddingtonia flagrans e Paecilomyces lilacinus frente aos antiparasitários albendazol, tiabendazol, ivermectina, levamisol e closantel, usando a concentração inibitória mínima (MIC). Os MICs variaram entre 4,0 e 0,031 μg/mL para albendazol, tiabendazol e ivermectina, entre 0,937 e 0,117 μg/mL para o levamisol, e entre 0,625 e 0,034 μg/mL para closantel. Os resultados mostraram que todos os antiparasitários tiveram um efeito inibidor in vitro sobre os fungos nematófagos, o que poderia comprometer suas atividades como agentes de controle biológico. D. flagrans foi a espécie mais sensível a todas as drogas.

In vitro susceptibility of nematophagous fungi to antiparasitic drugs: interactions and implications for biological control

Abstract The fast anthelmintic resistance development has shown a limited efficiency in the control of animals endoparasitosis and has promoted research using alternative control methods. The use of chemicals in animal anthelmintic treatment, in association with nematophagous fungi used for biological control, is a strategy that has proven to be effective in reducing the nematode population density in farm animals. This study aims to verify the in vitro susceptibility of the nematophagous fungi Arthrobotrys oligospora, Duddingtonia flagrans and Paecilomyces lilacinus against the antiparasitic drugs albendazole, thiabendazole, ivermectin, levamisole and closantel by using the Minimum Inhibitory Concentration (MIC). MICs ranged between 4.0 and 0.031 µg/mL for albendazole, thiabendazole and ivermectin, between 0.937 and 0.117 µg/mL for levamisole, and between 0.625 and 0.034 µg/mL for closantel. The results showed that all antiparasitic drugs had an in vitro inhibitory effect on nematophagous fungi, which could compromise their action as agents of biological control. D. flagrans was the most susceptible species to all drugs.

Resumo O desenvolvimento rápido da resistência anti-helmíntica demonstrou a eficiência limitada no controle de endoparasitoses em animais, e promoveu a investigação em métodos de controles alternativos. O uso de produtos químicos no tratamento anti-helmíntico animal, em associação com fungos nematófagos utilizados para o controlo biológico, é uma estratégia que tem provado ser eficaz na redução da densidade da população de nematódeos em animais agrícolas. Este estudo teve como objetivo verificar a suscetibilidade in vitro dos fungos nematófagos Arthrobotrys oligospora, Duddingtonia flagrans e Paecilomyces lilacinus frente aos antiparasitários albendazol, tiabendazol, ivermectina, levamisol e closantel, usando a concentração inibitória mínima (MIC). Os MICs variaram entre 4,0 e 0,031 g/mL para albendazol, tiabendazol e ivermectina, entre 0,937 e 0,117 g/mL para o levamisol, e entre 0,625 e 0,034 g/mL para closantel. Os resultados mostraram que todos os antiparasitários tiveram um efeito inibidor in vitro sobre os fungos nematófagos, o que poderia comprometer suas atividades como agentes de controle biológico. D. flagrans foi a espécie mais sensível a todas as drogas.

Antifungal susceptibility profile of diferent yeasts isolates from wild animals, cows milk with subclinical mastitis and hospital environment

Abstract Yeast infections have acquired great importance due to increasing frequency in immunocompromised patients or patients undergoing invasive diagnostic and therapeutic techniques, and also because of its high morbidity and mortality. At the same time, it has been seen an increase in the emergence of new pathogenic species difficult to diagnose and treat. The aim of this study was to determine the in vitro susceptibility of 89 yeasts from different sources against the antifungals amphotericin B, voriconazole, fluconazole and flucytosine, using the VITEK® 2 Compact system. The antifungal susceptibility was performed automatically by the Vitek® 2 Compact system. The origin of the yeasts was: Group 1 - microbiota of wild animals (W) (26/89), 2 - cows milk with subclinical mastitis (M) (27/89) and 3 - hospital enviorment (H) (36/89). Of the 89 yeasts submitted to the Vitek® 2 test, 25 (20.9%) were resistant to fluconazole, 11 (12.36%) to amphotericin B, 3 (3.37%) to voriconazole, and no sample was resistant to flucytosine. Regarding the minimum inhibitory concentration (MIC), fluconazole showed an MIC between 1 and 64 mg/mL for the three groups, voriconazole had an MIC between 0.12 and 8 mg/mL, amphotericin B had an MIC between 0.25 and 4 mg/mL for group H and group W respectively, between 0.25 and 16 mg/mL for group M and flucytosine had an MIC equal to 1g/mL for all groups. The yeasts isolated from the H group showed the highest resistance to fluconazole 12/89 (13.49%), followed by group W (7.87%) and group M (5.62%). The more resistant group to voriconazole was followed by the M and H groups, the W group showed no resistance to this antifungal. Group H was the least resistant (2.25%) to amphotericin.

Resumo As infecções por leveduras têm adquirido grande importância, devido ao aumento da sua frequência em pacientes imunocomprometidos ou pacientes submetidos a técnicas diagnosticas e terapêuticas agressivas, e devido sua alta morbidade e mortalidade. Paralelamente tem-se observado um incremento na aparição de novas espécies patógenas difíceis de diagnosticar e tratar. O objetivo desse estudo foi avaliar a suscetibilidade in vitro de 89 leveduras de diferentes origens frente aos antifúngicos Anfotericina B, Voriconazol, Fluconazol e Fluocitocina pelo Sistema Vitek® 2. O antifungigrama foi realizado automaticamente pelo Vitek® 2 Compact. A origem das leveduras foi: Grupo 1- Microbiota de Animais Silvestres (S) (26/89), 2- Leite com mastite bovina subclínica (L) (27/89) e 3- Ambiente Hospitalar (H) (36/89). Das 89 leveduras submetidas à carta Vitek®, 25 (20.09%) foram resistentes ao fluconazol, oito (8.99%) à anfotericina B, três (3.37%) ao voriconazol, e nenhuma amostra mostrou-se resistente a fluocitosina. O grupo três (H) foi mais resistente ao fluconazol que os demais, já o dois (L) foi mais resistente ao voriconazol e a anfotericina B que os outros dois. O fluconazol pode ter apresentado maior número de resistências devido ser um fármaco comumente usado principalmente em humanos. As leveduras isoladas de humanos apresentaram maior número de resistências aos fármacos testados do que as leveduras isoladas de animais silvestres. O que pode ocorrer devido a uma maior exposição dos humanos aos fármacos em relação aos animais que vivem isolados em ambientes selvagens e na maioria dos casos nunca teve contato com fármacos de qualquer origem.

Airborne fungi in an intensive care unit

Abstract The presence of airborne fungi in Intensive Care Unit (ICUs) is associated with increased nosocomial infections. The aim of this study was the isolation and identification of airborne fungi presented in an ICU from the University Hospital of Pelotas RS, with the attempt to know the places environmental microbiota. 40 Petri plates with Sabouraud Dextrose Agar were exposed to an environment of an ICU, where samples were collected in strategic places during morning and afternoon periods for ten days. Seven fungi genera were identified: Penicillium spp. (15.18%), genus with the higher frequency, followed by Aspergillus spp., Cladosporium spp., Fusarium spp., Paecelomyces spp., Curvularia spp., Alternaria spp., Zygomycetes and sterile mycelium. The most predominant fungi genus were Aspergillus spp. (13.92%) in the morning and Cladosporium spp. (13.92%) in the afternoon. Due to their involvement in different diseases, the identified fungi genera can be classified as potential pathogens of inpatients. These results reinforce the need of monitoring the environmental microorganisms with high frequency and efficiently in health institutions.

Resumo A presença de fungos anemófilos nas UTIs está associada com o aumento de infecções nosocomiais. O objetivo deste estudo foi isolar e identificar quais os principais fungos anemófilos presentes em uma Unidade de Terapia Intensiva (UTI) de um Hospital Universitário de Pelotas RS, na tentativa de conhecer a microbiota ambiental do local. Através de 40 placas de Petri com Agar Sabouraud dextrose expostas no ambiente de UTI foram coletadas amostras por exposição em locais estratégicos durante períodos da manhã e tarde por dez dias. Sete gêneros fúngicos foram identificados: Penicillium spp. (15,18%), o gênero de maior frequência, seguido de Aspergillus spp., Cladosporium spp., Fusarium spp., Paecelomyces spp., Curvularia spp., Alternaria spp., além de Zigomicetos e micélios estéreis. Houve predomínio de Aspergillus spp. (13,92%) pela manhã e Cladosporium spp. (13,92%) a tarde. Por estarem envolvidos em diferentes enfermidades, os gêneros identificados podem ser classificados como patógenos em potencial aos pacientes internados. Estes resultados reforçam a necessidade de um monitoramento dos micro-organismos ambientais com maior freqüência e eficiência nas instituições de saúde.

Antifungal activity of linalool in cases of Candida spp. isolated from individuals with oral candidiasis

Abstract This study analyzed the antifungal activity of phytoconstituents from linalool on Candida spp. strains, in vitro, isolated from patients with clinical diagnoses of oral candidiasis associated with the use of a dental prosthesis. Biological samples were collected from 12 patients using complete dentures or removable partial dentures and who presented mucous with diffuse erythematous or stippled features, indicating a clinical diagnosis of candidiasis. To identify fungal colonies of the genus Candida, samples were plated onto CHROMagar Candida®. The antifungal activity of linalool, a monoterpene unsaturated constituent of basil oil, was performed using the broth microdilution technique. Then, the minimum inhibitory concentration (MIC), the two subsequent stronger concentrations and the positive controls were subcultured on Sabouraud Dextrose Agar plates to determine the minimum fungicidal concentration (MFC). The experiments were performed in triplicate and nystatin was used as a positive control in all tests. Diagnoses of oral candidiasis were verified in eight patients (66.6%) and the most prevalent fungal species was Candida albicans (37.5%), followed by Candida krusei (25.0%); and Candida tropicalis (4.2%). The best antifungal activity of linalool was observed on Candida tropicalis (MIC = 500 mg/mL), followed by Candida albicans (MIC = 1.000 mg/mL), and Candida krusei (MIC = 2.000 mg/mL).Under the study conditions and based on the results obtained, it can be concluded that the Candida strains tested were susceptible to linalool.

Resumo Este estudo analisou a atividade antifúngica do fitoconstituinte linalol em cepas de Candida ssp, in vitro, isolados de pacientes com o diagnóstico clínico de candidíase oral associado ao uso de prótese dentária. As amostras biológicas foram coletadas de 12 pacientes portadores de próteses totais ou próteses parciais removíveis e que apresentavam características de mucosa eritematosa difusa ou pontilhadas, indicando um diagnóstico clínico de candidíase. Para identificar colônias de fungos do gênero Candida, as amostras foram semeadas em CHROMagar Candida®. A atividade antifúngica do linalol, um componente insaturado monoterpene de óleo de manjericão, foi realizada através da técnica de microdiluição em caldo. Em seguida, a concentração inibitória mínima (MIC), as duas concentrações consecutivas mais fortes e os controles positivos foram subcultivados em placas de Agar Sabouraud Dextrose para determinar a concentração fungicida mínima (MFC). Os experimentos foram realizados em triplicata e a nistatina foi usada como controle positivo em todos os testes. O diagnóstico de candidíase oral foi comprovado em oito pacientes (66,6%) e as espécies de fungos mais prevalentes foram Candida albicans (37,5%), seguido por Candida krusei (25,0%); e Candida tropicalis (4,2%). A melhor atividade antifúngica do linalol foi observada em Candida tropicalis (MIC = 500 mg/ml), seguido por Candida albicans (CIM = 1,000 mg/mL), e Candida krusei (CIM = 2,000 mg/mL). Sob as condições do estudo e com base nos resultados obtidos, pode-se concluir que as estirpes de Candida testadas foram susceptíveis a linalol.

Susceptibility of cariogenic microorganisms to phytoconstituents

Abstract This study aimed to evaluate the in vitro antibacterial activity of the phytochemicals thymol, linalool, and citronellol against Streptococcus mutans, Streptococcus salivarius and Streptococcus oralis. Disk diffusion screening on solid medium and measurement of the diameter of the bacterial growth inhibition halos was the technique utilized. The Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of the substances was determined using serial substance dilutions and microdilution technique in Brain Heart Infusion culture medium. After incubation for 24 hours in an oven at 37 °C, plate reading was completed and confirmed by visual method using 2,3,5 triphenyl tetrazolium chloride dye. The Minimum Bactericidal Concentration (MBC) was determined from MIC subcultures. Assays were performed in triplicate, and chlorhexidine was used as a positive control. The diameters in mm of the growth inhibition halos ranged between 7.3 and 10.7 for S. mutans, 7.3 and 10.0 for S. oralis, and 8.2 and 9.8 for S. salivarius. The MIC and MBC values obtained converged, ranging from maximum values in the presence of Linalool (1,250.0 mg/mL, 2,500.0 mg/mL and 2,500.0 mg/mL, respectively, for S. mutans, S. oralis, and S. salivarius); and minimum values with Thymol (312.5 g/ml, 156.2 g/mL and 156.2 g/ml, respectively for S. mutans, S. oralis, and S. salivarius). All the tested phytochemicals displayed antibacterial activity, thus representing substances with potential applications in preventing tooth decay.

Resumo Este estudo objetivou avaliar a atividade antibacteriana in vitro dos fitoquímicos timol, linalol e citronelol sobre Streptococcus mutans, Streptococcus salivaris e Streptococcus oralis. Utilizou-se a técnica de discos de difusão em meio sólido e medição do diâmetro dos halos de inibição. A concentração inibitória mínima (CIM) das substâncias foi determinada utilizando diluições em série das substâncias e técnica de microdiluição em meio de cultura de Brain Heart Infusion. Após incubação durante 24 horas em estufa a 37 °C, a leitura da placa foi confirmada pelo método visual usando o corante 2,3,5 trifenil cloreto de tetrazólio. A concentração bactericida mínima (CBM) foi determinada a partir de subculturas de MIC. Os ensaios foram realizados em triplicata, e clorexidina foi usada como um controle positivo. Os diâmetros dos halos de inibição do crescimento variaram entre 7,3 e 10,7 por S. mutans, 7,3 e 10,0 por S. oralis, e 8,2 e 9,8 para S. salivaris. Os valores de CIM e CBM obtidos variaram de valores máximos na presença de linalol (1.250,0 mg/mL, 2.500.0 mg/mL e 2.500.0 mg/mL, respectivamente, para o S. mutans, S oralis e S. salivaris); a valores mínimos com timol (312,5 g/ml, 156,2 g/mL e 156,2 g/ml, respectivamente para S. mutans, S. oralis e S. salivaris). Todos os fitoquímicos testados apresentaram atividade antibacteriana, representando, assim, substâncias com potencial de aplicações na prevenção da cárie dentária.

Susceptibility of cariogenic microorganisms to phytoconstituents

Abstract This study aimed to evaluate the in vitro antibacterial activity of the phytochemicals thymol, linalool, and citronellol against Streptococcus mutans, Streptococcus salivarius and Streptococcus oralis. Disk diffusion screening on solid medium and measurement of the diameter of the bacterial growth inhibition halos was the technique utilized. The Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of the substances was determined using serial substance dilutions and microdilution technique in Brain Heart Infusion culture medium. After incubation for 24 hours in an oven at 37 °C, plate reading was completed and confirmed by visual method using 2,3,5 triphenyl tetrazolium chloride dye. The Minimum Bactericidal Concentration (MBC) was determined from MIC subcultures. Assays were performed in triplicate, and chlorhexidine was used as a positive control. The diameters in mm of the growth inhibition halos ranged between 7.3 and 10.7 for S. mutans, 7.3 and 10.0 for S. oralis, and 8.2 and 9.8 for S. salivarius. The MIC and MBC values obtained converged, ranging from maximum values in the presence of Linalool (1,250.0 mg/mL, 2,500.0 mg/mL and 2,500.0 mg/mL, respectively, for S. mutans, S. oralis, and S. salivarius); and minimum values with Thymol (312.5 g/ml, 156.2 g/mL and 156.2 g/ml, respectively for S. mutans, S. oralis, and S. salivarius). All the tested phytochemicals displayed antibacterial activity, thus representing substances with potential applications in preventing tooth decay.

Resumo Este estudo objetivou avaliar a atividade antibacteriana in vitro dos fitoquímicos timol, linalol e citronelol sobre Streptococcus mutans, Streptococcus salivaris e Streptococcus oralis. Utilizou-se a técnica de discos de difusão em meio sólido e medição do diâmetro dos halos de inibição. A concentração inibitória mínima (CIM) das substâncias foi determinada utilizando diluições em série das substâncias e técnica de microdiluição em meio de cultura de Brain Heart Infusion. Após incubação durante 24 horas em estufa a 37 °C, a leitura da placa foi confirmada pelo método visual usando o corante 2,3,5 trifenil cloreto de tetrazólio. A concentração bactericida mínima (CBM) foi determinada a partir de subculturas de MIC. Os ensaios foram realizados em triplicata, e clorexidina foi usada como um controle positivo. Os diâmetros dos halos de inibição do crescimento variaram entre 7,3 e 10,7 por S. mutans, 7,3 e 10,0 por S. oralis, e 8,2 e 9,8 para S. salivaris. Os valores de CIM e CBM obtidos variaram de valores máximos na presença de linalol (1.250,0 mg/mL, 2.500.0 mg/mL e 2.500.0 mg/mL, respectivamente, para o S. mutans, S oralis e S. salivaris); a valores mínimos com timol (312,5 g/ml, 156,2 g/mL e 156,2 g/ml, respectivamente para S. mutans, S. oralis e S. salivaris). Todos os fitoquímicos testados apresentaram atividade antibacteriana, representando, assim, substâncias com potencial de aplicações na prevenção da cárie dentária.