Desenvolvimento de uma metodologia de PCR semiquantitativa utilizando plasmídio clonado com parte do gene gB de citomegalovírus / Development of a semi-quantitative PCR method using a plasmid cloned with part of the gB gene of cytomegalovirus

A infecçäo por citomegalovírus é disseminada em nosso meio e costuma acometer, com significante morbimortalidade, indivíduos imunodeprimidos, especialmente, transplantados de medula óssea e de rim bem como pacientes com AIDS. Neste trabalho, descrevemos o desenvolvimento de uma PCR semiquantitativa para detectar e quantificar cargas de CMV, presentes em materiais clínicos. Para tanto, inserimos em plasmídios PCR II (Invitrogen, USA), o fragmento com 296 pares-base do gene da glicoproteína B do CMV. Os plasmídios com inserto foram transfectados em Escherichia coli, multiplicados, verificados quanto à presença do inserto por seqüenciamento nucleotídico, purificados, e quantificados. Os plasmídios com inserto foram titulados em diluições decimais e as mesmas foram submetidas à PCR descrita anteriormente, que foi, também, utilizada nos testes semiquantitativos, permitindo determinar a sensibilidade da técnica, 867 cópias de CMV / mg de DNA. Com base nas densidades das bandas eletroforéticas dos amplicons de amostras clínicas, comparadas às da titulaçäo de plasmídios contendo inserto de glicoproteína B do CMV, obtivemos as cargas virais. A técnica de PCR semiquantitativa, por nós padronizada, tem, como vantagens, o baixo custo e o fácil manuseio após sua padronizaçäo, podendo ser testada na detecçäo da carga de CMV em diferentes tipos de pacientes com suspeita de citomegalovirose

Dengue: inquérito sorológico pós-epidêmico em zona urbana do Estado de Säo Paulo (Brasil) / Dengue fever: a post-epidemic sero-epidemiological survey in an urban setting at a Northwestern county of S. Paulo State, Brazil

Objetivo: Avaliar o tamanho real da epidemia sobre dengue ocorrida na zona urbana do Município de Santa Bárbara D'Oeste, SP, Brasil, de abril a junho de 1995. Métodos: Foi realizado um inquérito soroepidemiológico pós-epidêmico 5 meses após o final da epidemia da dengue. Foram processados 1.113 soros através de amostragem aleatória domiciliar da populaçäo da cidade pesquisada. As taxas de infecçäo em diferentes partes da cidade foram relacionadas com os graus de infestaçäo por Aedes aegipty e com a quantidade de casos notificados durante a epidemia. Resultados e Conclusöes: Foi encontrada variaçäo concomitante e diretamente proporcional entre as taxas de infecçäo pelo vírus da dengue, em diferentes partes da cidade, e os graus de infestaçäo domiciliar por Aedes aegipty, bem como em relaçäo ao número de casos notificados durante a epidemia. Encontrou-se prevalência de 630 por 100 mil habitantes, representando valor 15 vezes superior ao de incidência de casos confirmados laboratorialmente durante a epidemia. Através de comparaçäo retrospectiva com dados de notificaçäo comulsória, observou-se que a vigilância epidemiológica näo detectou a maioria das pessoas soro-reativas. Apesar disso, notificou grande quantidade de casos que näo eram de indivíduos com dengue, tipificando um valor preditivo positivo baixo (15,6 por cento) para o diagnóstico clínico de dengue quando o resultado laboratorial (HAI) é tomado como padräo-ouro

Infecçäo perinatal por citomegalovirus: muito freqüente mas pouco diaagnosticada / Perinatal cytomegalovirus infection: commonly occurring but rarely diagnosed

Objetivo: Avaliar a freqüência da infecçäo d perinatal por citomegalovirus (CMV) em lactentes e descrever a sua apresentaçäo clínica. Casuística e métodos: Foram estudados, prospectivamente, 34 recém-nascidos até o quarto mês de vida. Colheram-se amostras de urina ao nascimento, com 15 dias e mensalmente, bem como amostras de sangue ao nascimento e ao terceiro mês de vida. O diagnóstico laboratorial de citomegalovirose foi realizado pela detecçäo dos CMV na urina por isolamento viral de culturas de células e por detecçäo de DNA viral através da reaçäo de amplificaçäo gênica catalisada pela polimerase (PCR). Em todas as crianças foi excluído o diagnóstico de citomegalovirose congênita. Resultados: A incidência da infecçäo perinatal foi de 38,2 por cento (13/34) e apenas três dessas crianças apresentaram manifestaçöes clínicas. Obsevou-se um caso com quadro respitatório e diarréia, e outros dois pacientes apresentaram esplenomegalia. Conclusöes: Obsevou-se uma elevada taxa de incidência de infecçäo perinatal por CMV. Das crianças infectadas, 23 por cento apresentaram sintomas. Esses resultados estimulam a que se faça a pesquisa dos CMV como parte da investigaçäo etiológica de pneumonites e esplenomegalia em lactentes jovens

Prevalência e aspectos clínicos da infecçäo congênita por citomegalovirus / Prevalence and clinical aspects of congenital cytomegalovirus infection

Objetivos: Determinar a prevalência da infecçäo congênita por citomegalovirus (CMV), bem como avaliar o palel desse agente como causa de doença congênita r descrever as principais manifestaçöes clínicas dessa doença em crianças atendidas em hospital universitário de Ribeiräo Preto. Casuística e métodos: Para determinaçäo da prevalência da infecçäo congênita, foram estudados 189 recém-nascidos e suas mäes, constituindo um primeiro grupo de estudo. Para avaliaçäo da importância do CMV na etiologia da doença congênita e descriçäo das manifestaçöes clínicas da citomegalovirose congênita, foram incluídos outros 130 recém-nascidos e 74 lactentes com clínica sugestiva de infecçäo congênita, constituindo um segundo grupo. O diagnóstico laboratorial foi realizado pelo isolamento viral na urina em cultura de fibroblastos humanos, pela detecçäo do DNA viral na urina através da reaçäo de amplificaçäo gênica catalizada pela polimerase e pela reaçäo de imunofluorescência para pesquisa de IgM e IgG específicos anti-CMV. Resultados: A prelência da infecçäo congênita foi de 2,6 por cento e 95 por cento das mäes tinham IgG anti-CMV. Todas as crianças infectadas do primeiro grupo eram assintomáticas ao nascimento, porém em uma evidenciaram-se calcificaçöes intracranianas ao exame radiológico. No segundo grupo de estudo, CMV foi detectado na urina 12(5,9 por cento) das crianças com apresentaçäo clínica compatível com doença congênita. Destas, em 10 (83 por cento), o diagnóstico foi relaizado após o período neonatal. Os achados clínicos incluíram hepatoesplenomegalia (75 por cento), icterícia neonatal em hiperbilirrubinemia direta (42 por cento) e anormalidades neurológicas caracterizadas por microcefalia e calcificaçöes intracranianas (42 por cento). Conclusöes: Observou-se uma prevalência de infecçäo congênita por CMV similar à encontrada nos estudos realizados em populaçöes de soroprevalência elevada para CMV. Crianças com citomegalovirose assintomática podem ter acomentimento do SNC, clinicamente imperceptível ao nascimento, e crianças sintomáticas apresentam doença multissistêmica. O diagnóstico diferencial de qualquer recém-nascido com anormalidades, incluindo envolvimento hepático, hematopoético e neurológico, deve incluir pesquisa para citomegalovirose congênita. Os CMV mostraram ser agaentes importantes na etiologia dessas afecçöes, e a grande maioria das crianças sintomáticas foram identificadas após o período neonatal, dificultando um diagnóstico definitivo

Comparaçäo de dois testes de neutralizaçäo, utilizados no diagnóstico sorológico do vesiculovírus Piry / Comparison of two neutralization test for the use in the Piry serologic vesiculovirus diagnose

Realizou-se inquérito sorológico para pesquisar anticorpos neutralizantes contra o vesiculovírus Piry, na cidade de Catolândia, Bahia, Brasil. Duas técnicas de vírus-neutralizaçäo foram comparadas em cultura das células C6/36, com revelaçäo pelo método imunoenzimático (TN-C6/36) e em camundongos recém-nascidos (TN-camundongos), que é considerada a prova maior. Em 204 soros, dos 1.274 colhidos, a concordância das duas técnicas foi de 98,7 por cento (K=0,9853). Com este resultado do TN-C6/36, que também é mais exeqüível, decidiu-se desenvolver o estudo soro-epidemiológico do vesiculovírus Piry, em Catolândia, baseado nesta nova técnica