Freeze-drying as an alternative method of human sclera preservation / Liofilização como alternativa à preservação de esclera humana

PURPOSE: To compare the effect of preserving sclera samples in either 95 percent ethanol or freeze-dried. METHODS: Ninety-six samples of human sclera were studied. Half of them were freeze-dried and half preserved in 95 percent ethanol. Preservation periods of 18, 45, 90 or 174 days were studied. Automated immunostaining was carried out in the Ventana BenchMarkR LT platform using collagen 1 and fibronectin antibodies. Histological staining was also performed with hematoxilin-eosin and Masson trichrome. Samples were classified according to the degree of collagen fiber parallelism (0-2), intensity of Masson staining (0-2), and the expression of both antibodies (0-3). Friedman and Wilcoxon tests were applied to compare preservation methods and p-values below 0.05 were considered to ensure statistical significance. RESULTS: Relevant results were found in three situations: (i) Friedman's test showed better collagen fiber integrity in the freeze-dried group rehydrated after 174-days as compared to the 90-day group; (ii) Wilcoxon's test showed better collagen fiber integrity in the freeze-dried group after 18 and 174 days as compared to the ethanol group; (iii) the freeze-dried group disclosed higher immunohistochemical expression for COL-1 antibody in the sclera samples rehydrated after 45, 90 and 174 days as compared to the ones rehydrated after 18 days. CONCLUSION: Histological and immunohistochemical analysis showed freeze-drying to be a superior method for sclera preservation as compared to 95 percent ethanol. This technique provides an easy method to manipulate tissue, with longer shelf life, and storage at room temperature.

OBJETIVO: Comparar dois métodos de preservação de esclera humana, liofilização e álcool 95 por cento, em diferentes períodos de tempo. MÉTODOS: Foram avaliados 96 fragmentos de seis escleras humanas. Metade das amostras foi submetida ao processo de liofilização e metade conservada em álcool 95 por cento. Dois fragmentos de cada grupo foram avaliados pelas colorações de hematoxilina-eosina e tricrômio de Masson e submetidos a técnica de imuno-histoquímica para os anticorpos fibronectina e colágeno 1, após 18, 45, 90 e 174 dias de preservação. Os espécimens foram classificados de acordo com o paralelismo (PF:0-2) e integridade (IF:0-1) das fibras de colágeno e expressão imuno-histoquímica para os anticorpos fibronectina (FIB:0-3) e colágeno 1 (COL-1:0-3). A análise estatística foi realizada por meio dos testes de Friedman e Wilcoxon e o valor de p menor que 0,05 foi considerado estatisticamente significante. RESULTADOS: Verificaram-se diferenças significantes em três situações: (i) maior integridade das fibras de colágeno das escleras liofilizadas após 174 dias quando comparado aos 90 dias; (ii) maior expressão imuno-histoquímica para o anticorpo COL-1 nas amostras de escleras liofilizadas após os 18 dias iniciais de preservação; (iii) maior integridade das fibras de colágeno das escleras liofilizadas após 18 e 174 dias quando comparado às escleras preservadas em álcool. CONCLUSÕES: A preservação de tecido escleral por liofilização mostrou-se técnica tão eficaz quanto a preservação em álcool, apresentado vantagem quando considerada a integridade das fibras de colágeno. A liofilização mostra-se benéfica por permitir a estocagem do tecido em temperatura ambiente e com prazo de validade estendido.

Influência da postura na pressão intra-ocular e nos defeitos de campo visual no glaucoma primário de ângulo aberto e glaucoma de pressão normal / Postural influence on intraocular pressure and visual field defects in open angle glaucoma and normal tension glaucoma

OBJETIVO:Avaliar a variação da pressão intra-ocular (PIO) na mudança de posição em pacientes com glaucoma primário de ângulo aberto (GPAA), glaucoma de pressão normal (GPN) e olhos normais (ON), e correlacionar esta variação à gravidade do defeito de campo visual. MÉTODOS: Foram avaliados 32 olhos de 32 pacientes com GPAA, 30 olhos de 30 pacientes com GPN e 20 olhos de 20 ON. A PIO foi aferida às 6h da manhã na posição supina e 5min após com o paciente sentado. Foi avaliada a correlação entre variação da pressão decorrente da mudança de posição e os defeitos de campo visual. Foram utilizados os testes estatísticos não paramétricos de Kruskal-Wallis, Wilcoxon, Mann-Whitney e o teste de correlação linear de Spearman. Foi considerado significativo valor de p < 0,05. RESULTADOS: Foi encontrada diferença significativa entre as pressões intra-oculares na posição supina e assentada nos três grupos (p<0,001). Não houve diferença significativa na variação da PIO com a mudança de posição entre os três grupos (p=0,17). Não houve correlação significativa entre a variação da PIO nas duas posições e o índice MD do campo visual nos grupos GPAA (p=0,81) e GPN (p=0,89). CONCLUSÃO:Os resultados sugerem que existe aumento significativo da PIO com a mudança da posição assentada para supina em pacientes com GPAA, GPN e ON, não havendo, porém, diferença significativa desta variação entre os três grupos. Não foi encontrada correlação significativa entre a variação da PIO e a severidade do campo visual.

PURPOSE: To evaluate intraocular pressure variation due to postural changing of supine to sitting position and, to correlate this variation with visual field defects in primary open angle and normal tension glaucoma patients, as well as normal eyes. METHODS: Thirty-two eyes of 32 POAG patients, 30 eyes of 30 NTG patients and 20 eyes of 20 normal patients were evaluated in the study. Intraocular pressure was measured at 6 o'clock in supine position and 5 minutes after in sitting position for further correlation between intraocular pressure behavior after postural changing and visual field defects Kruskal-Wallis, Wilcoxon, Mann-Whitney and Spearman linear correlation non-parametric tests were used for statistical analysis. Inherent to the methods used, p<0,05 were considered to ensure statistical relevance. RESULTS: Relevant results were observed between intraocular pressure measured in supine and sitting position in all groups, disclosing statistical significance (p<0,001). However, this statistical relevance was not seen when compared among the 3 groups studied (p=0,17). Moreover, visual field defects, expressed by MD index, did not point to have statistical correlation to intraocular pressure variation after postural changing in POAG (P=0,81) and NTG (p=0,89). CONCLUSION: The results suggest there is a significant increase in intraocular pressure due to postural changing in primary open angle and normal tension glaucoma patients, as well as in normal eyes. However, the raise in intraocular pressure neither was significant when compared among the 3 groups nor was consistent with visual field defects.