ABSTRACT
In this study a total of 16 Fusarium verticillioides strains isolated from corn feed samples were characterized by fumonisin (FB) production and random amplified polymorphic DNA (RAPD). All the strains produced FB1 and FB2 with levels ranging from 2.41 to 3996.36 µg/g, and from 1.18 to 1209.91 µg/g, respectively. From the 16 F. verticillioides strains, four were identified as low (3.59 to 1289.84 µg/g), eight as intermediate (>1289.84 to 3772.44 µg/g) and four strains as high (>3772.44 µg/g) fumonisin producers. From the total of 105 loci amplified, 60 (57.14 percent) were polymorphic. RAPD analysis showed very similar patterns among low, moderate and high fumonisin-producing strains. Although RAPD markers were capable of discriminating the different F. verticillioides strains, there was no clear association between these makers and fumonisin production.
Neste estudo, 16 cepas de F. verticillioides isoladas de amostras de ração de milho foram caracterizadas com base na produção de fumonisinas (FB) e em marcadores de polimorfismos de DNA amplificado ao acaso (RAPD). Todas as cepas produziram FB1 e FB2, com níveis variando, respectivamente, de 2,41 a 3996,36 µg/g e 1,18 a 1209,91 µg/g. De acordo com a produção de fumonisinas totais (FB1 + FB2) e a distribuição por análise de quartis, do total de 16 cepas de F. verticillioides, quatro foram identificadas como baixas produtoras de fumonisinas (3,59 a 1289,84 µg/g), oito como intermediárias (>1289,84 a 3772,44 µg/g) e quatro como altas produtoras de fumonisinas (>3772,44 µg/g). Os 10 primers utilizados amplificaram 105 locos, 60 (57,14 por cento) dos quais foram polimórficos. As análises de RAPD mostraram padrões muito similares entre as cepas baixas, médias e altas produtoras de fumonisinas. Embora os marcadores RAPD tenham se mostrado capazes de discriminar as diferentes cepas de F. verticillioides, não foi detectada nenhuma associação entre estes marcadores e a produção de fumonisinas.
ABSTRACT
The common occurrence of multiple papillomavirus infections has been shown in several studies involving the human host. However, investigations with the aim of identifying mixed papillomavirus infections in cattle have been conducted only recently. In the current work we describe a co-infection with two different bovine papillomavirus (BPV) types that was identified in a bovine teat papilloma. The skin wart was obtained from a cow belonging to a Brazilian beef herd. A PCR assay was carried out with the FAP primer pair, which amplifies a partial segment of the L1 gene (approximately 478 bp), and the amplicon was submitted to direct sequencing. Because nucleotide sequences with satisfactory quality scores were not obtained, the amplicon was cloned and further sequencing, involving ten selected clones, was performed. The sequence analysis of the cloned inserts revealed the presence of two different BPV types. BPV-1 (Deltapapillomavirus genus) was detected in six clones, while BPV-6 (Xipapillomavirus genus) was detected in four clones. This finding confirms the presence of BPV co-infection associated with cutaneous papillomatosis in cattle.
Em seres humanos, as infecções múltiplas pelo papilomavírus têm sido demonstradas em vários estudos. Em bovinos, somente recentemente foram conduzidas investigações com o objetivo de avaliar infecções mistas pelo papilomavírus. O presente trabalho teve como objetivo descrever a co-infecção por dois tipos de papilomavírus bovino (BPV) em um papiloma de teto. A amostra clínica foi obtida de uma vaca pertencente a um rebanho de corte localizado na região norte do estado do Paraná, Brasil. Inicialmente, a técnica de PCR foi realizada com o par de oligonucleotídeos iniciadores FAP, que amplificam um segmento do gene L1, sendo que o amplicon gerado foi submetido ao sequenciamento direto. Entretanto, como as sequências obtidas não apresentaram qualidade aceitável, o amplicon foi clonado e dez clones foram selecionados para um novo sequenciamento. A análise das sequências dos insertos revelou a presença de dois diferentes tipos de BPV. O BPV-1 (gênero Deltapapillomavirus) foi detectado em seis clones, enquanto o BPV-6 (gênero Xipapillomavirus) foi detectado em quatro clones. Esse resultado confirma a ocorrência da co-infecção pelo BPV associada a papilomas cutâneos em bovinos.
ABSTRACT
Cutaneous papillomatosis is a pathological condition commonly found in cattle and is characterized by the presence of benign proliferative tumors caused by bovine papillomavirus (BPV) infection. While multiple infections with human papillomavirus (HPV) are common in healthy and immunodeficient humans, studies with the aim of identifying mixed infections are still sporadic in veterinary medicine. The aim of this study is to describe the occurrence of multiple BPV infections in cattle affected by cutaneous papillomatosis. Fifteen skin warts were collected from at least two diverse anatomical regions of six bovines with papillomatosis belonging to three cattle herds from the Paraná state in Brazil. The BPV types present in the skin wart samples were determined by a PCR assay performed with the FAP primer pair for partial L1 gene amplification followed by direct sequencing or by cloning and sequencing of the inserts. Sequence analysis of the obtained amplicons allowed the identification of four characterized BPV types (BPV-1, -2, -6, and -8) and three previously described putative new BPV types (BPV/BR-UEL3, BPV/BR-UEL4, and BPV/BR-UEL5). Double infections were identified in four (A, B, D, and E) of the six animals included in this study. In this work, the strategy adopted to evaluate skin warts from diverse anatomical sites of the same animal allowed the identification of multiple infections with two or three different BPV types. The analysis of four animals belonging to a single cattle herd also showed the presence of six different viral types. These results clearly suggest that both multiple papillomaviral infection and a high viral diversity can be as frequent in cattle as in human beings.
A papilomatose cutânea é comumente observada nos rebanhos bovinos e caracterizada pela presença de tumores proliferativos benignos causados pela infecção pelo papilomavírus bovino (BPV). Enquanto a infecção múltipla pelo papilomavírus humano (HPV) é um achado comum tanto em seres humanos saudáveis quanto em pacientes com imunodeficiência, na medicina veterinária esses relatos ainda são escassos. O objetivo desse estudo foi descrever a ocorrência de infecções múltiplas pelo BPV em rebanhos afetados pela papilomatose cutânea. Quinze papilomas foram obtidos, de pelo menos duas regiões anatômicas diferentes, de seis bovinos com papilomatose e provenientes de três rebanhos de corte localizados no estado do Paraná, Brasil. Os tipos virais presentes nas lesões foram identificados por PCR, utilizando o par de oligonucleotídeos iniciadores FAP, seguidos de sequenciamento direto ou clonagem e novo sequenciamento dos insertos. A análise das sequências obtidas permitiu a identificação do BPV-1, -2, -6 e -8, além de supostos novos tipos (BPV/BR-UEL3, BPV/BR-UEL4, e BPV/BR-UEL5), descritos anteriormente. Infecções por dois tipos diferentes de BPV foram identificadas em quatro animais (A, B, D e E) dos seis incluídos nesse estudo. A estratégia adotada neste estudo permitiu a identificação de infecção múltipla por dois ou três diferentes tipos virais do BPV no mesmo animal. Além disso, a avaliação de quatro animais de um mesmo rebanho demonstrou a presença de seis tipos virais circulantes. Esses resultados sugerem que tanto as infecções múltiplas quanto a grande diversidade viral podem ser frequentes nos bovinos, assim como o observado nos humanos. O reconhecimento da multiplicidade e complexidade das infecções pelo BPV pode colaborar para o entendimento dos aspectos epidemiológicos, clínicos e imunológicos da papilomatose cutânea nos rebanhos bovinos.
ABSTRACT
Ochratoxin A is a mycotoxin produced by some fungi species. Among them, Aspergillus carbonarius is considered a powerful producer. Genes involved in the ochratoxin A biosynthesis pathway have been identified in some producer species. However, there are few studies that purpose to identify these genes in A. carbonarius. The use of insertion mutants to identify genes associated with certain properties has been increased in the literature. In this work, the region of T-DNA integration was investigated in one A. carbonarius ochratoxin-defective mutant previously obtained by Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation, in order to find an association between interrupted gene and the biosynthesis of ochratoxin A. The integration occurred in a gene that possibly encodes a splicing coactivator protein. The analysis of the relative expression of the splicing coativator gene from A. carbonarius wild type strain in four different media showed high correlation between the transcript levels and the ochratoxin A production.
A ocratoxina A é uma micotoxina frequentemente encontrada em uma grande variedade de produtos alimentares e apresenta efeitos nefrotóxicos e potencial carcinogênico para animais e humanos. É naturalmente produzida por algumas espécies fúngicas, como Aspergillus carbonarius, que é considerado um potente produtor. Apesar disso, o número de estudos que visam identificar genes que são essenciais para a biossíntese de ocratoxina em A. carbonarius é ainda reduzido. Um mutante de A. carbonarius com baixa produção de ocratoxina A previamente obtido por transformação mediada por Agrobacterium tumefaciens foi investigado com o objetivo de encontrar uma associação entre o gene interrompido e a biossíntese desta micotoxina. Os resultados mostraram a ocorrência de uma junção não exata entre o T-DNA e o DNA genômico do fungo durante o evento de integração. A integração do T-DNA no genoma do mutante T188 provocou deleção de 727 nucleotídeos. Esta deleção inclui uma porção final do gene coativador de splicing e uma região não-codificante entre este gene e o gene F-actina. A expressão relativa do gene coativador de splicing na linhagem selvagem cultivada em quatro diferentes meios mostrou associação entre a quantidade de ocratoxina A e os níveis dos transcritos.
ABSTRACT
We analyzed the genetic relationships between 51 fungal isolates previously identified as A. niger aggregate, obtained from dried fruit samples from worldwide origin and 7 A. tubingensis obtained from Brazilian coffee beans samples. Greater fungal diversity was found in black sultanas. Aspergillus niger sensu stricto was the most prevalent species. It was found in all fruit substrates of all geographical origins. Based on Random Amplification of Polymorphic DNA (RAPD) and β-tubulin sequences data two groups of A. niger were found. In spite of the small number of isolates from Group IV an association between extrolite patterns and molecular clustering is speculated. A. tubingensis were the second most frequent species and this species were clearly subdivided into two groups. The finding of two groups for A. tubingensis strains could not yet explain the contradictions found in the literature about the capability this species for ochratoxin production, because both of them were formed by only non-ochratoxin-producing strains.
Neste trabalho foi analisada a relação genética entre 51 isolados obtidos de amostras de frutas secas provenientes de diferentes regiões do previamente identificados como pertencentes ao agregado A. niger e 7 isolados de Aspergillus tubingensis obtidos de amostras de café do Brasil. Maior diversidade fúngica foi encontrada em uvas passas escuras. Aspergillus niger sensu stricto foi a espécie mais frequente. Esta espécie foi encontrada em todos os substratos e origens geográficas analisadas. Baseando-se nos dados de Polimorfismo de DNA Amplificado ao Acaso (RAPD) e sequências de nucleotídeos do gene da β-tubulina, dois grupos de A. niger foram observados. Apesar do pequeno número de isolados do grupo IV uma associação entre padrão de extrólitos e agrupamento molecular foi encontrada. A. tubingensis foi a segunda espécie mais frequente e foi claramente subdivida em dois grupos. Como os grupos de A. tubingensis são formados somente por linhagens não produtoras de ocratoxina A, a identificação destes grupos não explica a controvérsia encontrada na literatura sobre a capacidade desta espécie em produzir a referida toxina.
ABSTRACT
Ochratoxin A (OTA) is one of the most abundant food-contaminating mycotoxins. Its occurrence in several agricultural commodities has been considered a worldwide problem. This toxin is mainly produced by Aspergillus species. OTA has nephrotoxic, immunosuppressive, and carcinogenic effects and consequently the contamination with this toxin represents a high risk for human and animal health. In the last 5 years, several investigators have applied molecular methods in order to develop PCR assays for identifying and quantifying OTA-producing fungi in coffee beans samples. The main objective is to allow the detection of microorganisms capable of producing OTA, preferentially prior to ochratoxin production and accumulation. In this contribution several of these attempts will be reviewed and discussed.
Dentre as micotoxinas que contaminam produtos destinados à alimentação humana e animal, a ocratoxina A (OTA) é uma das mais freqüentemente encontrada. A sua ocorrência em vários produtos agrícolas tem sido considerada um problema de amplitude mundial. Esta toxina é produzida principalmente por fungos do gênero Aspergillus. A OTA tem efeitos nefrotóxico, imunossupressor e carcinogênico. A contaminação de alimentos com esta toxina representa risco para a saúde animal e humana. Nos últimos cinco anos, vários investigadores têm desenvolvido métodos moleculares para identificação e quantificação de fungos produtores de OTA em amostras de grãos de café. O objetivo desta revisão é apresentar e discutir as várias estratégias desenvolvidas recentemente para a detecção de fungos potencialmente produtores de OTA.
ABSTRACT
Retroelements are a diversified fraction of eukaryotic genomes, with the Ty1/copia and Ty3/gypsy groups being very common in a large number of plant genomes. We isolated an internal segment of the Ty3/gypsy retroelement of Cestrum strigilatum (Solanaceae) using PCR amplification with degenerate primers for a conserved region of reverse transcriptase. The isolated segment (pCs12) was sequenced and showed similarity with Ty3/gypsy retroelements of monocotyledons and dicotyledons. This segment was used as probe in chromosomes of C. strigilatum and Cestrum intermedium. Diffuse hybridization signals were observed along the chromosomes and more accentuated terminal signals in some chromosome pairs, always associated with nucleolus organizer regions (NORs). The physical relationship between the hybridization sites of pCs12 and pTa71 ribosomal probes was assessed after sequential fluorescence in situ hybridization (FISH). Hybridization signals were also detected in the B chromosomes of these species, indicating an entail among the chromosomes of A complement and B-chromosomes.
ABSTRACT
Extracellular proteases have been shown to be factors of virulence in fungal entomopathogenicity. We examined the production of the cuticle-degrading extracellular proteases chymoelastase (Pr1) and trypsin (Pr2) in isolates of the fungus Metarhizium flavoviride. Fungal growth was in a mineral medium (MM) containing nitrate, and in MM supplemented with either cuticle from Rhammatocerus schistocercoides or with the non-cuticular substrate casein. The substrates used for growth influenced the expression of both analyzed proteases, the highest protease activities of nearly all isolates having been observed in the medium containing insect cuticle, with more Pr1 than Pr2 being produced. There was a natural variability in the production of cuticle-degrading proteases among isolates, although this was less evident for Pr2. Our data support the hypothesis that the production of Pr1 on insect cuticle is a useful characteristic for the analysis of intraspecific variability of M. flavoviride isolates
Subject(s)
Enzymes , Fungi , Virulence , FungiABSTRACT
The RADP (Random amplified polymorphic DNA) technique was used to detect tissue-culture-induced variations in sugarcane. Plants of the Brazilian variety RB83-5486 propagated via rhizomes and via meristem cultures were studied. The polymorphism rate for 98 RAPD loci was 6.93 percent when the plants derived from meristems. Besides, in order to evaluate the influence of the number of subcultures on the generation of somaclonal variation, field-grown RB83-5486 plants derived from 10 meristems were studied after five subcultivations. Although different rates of polymorphism were observed, there was no direct association with the stage of subcultivation. The analysis of plants of two sugarcane varieties cultivated in vitro from meristems showed that variety RB83-5486 was more unstable than variety SP80-185
Subject(s)
Genetic Variation , Nucleic Acid Amplification Techniques , Plants , Cell Culture Techniques , Meristem , PhenotypeABSTRACT
Bandas de dsRNA foram detectadas em três dos doze isolados de Paecilomyces fumosoroseus. A identidade destas bandas foi provada através de tratamentos com RNAse, DNAse e S1 nuclease. A cura do dsRNA para um dos isolados (P92) foi obtida através do isolamento de colônias monospóricas. Linhagens isogênicas, com e sem dsRNA, foram submetidas ao teste de virulência contra a mosca branca Bemisia tabaci biotipo B. Ao contrário do que ocorre para vários fungos fitopatogênicos, os fragmentos de dsRNA näo causaram hipovirulência em P.fumosoroseus.
Subject(s)
Animals , Fungi , RNA, Double-Stranded , Insecta , PaecilomycesABSTRACT
The yeast Candida tsukubaensis is of industrial importance for the production of microbial milk-clotting enzyme. Milk-clotting enzyme is an enzymatic complex capable of coagulating milk for cheese manufacturing. High clotting activity (CA) and low proteolytic activity (PA) are desirable qualities. To study the genetic nature of the CA and PA traits, we analyzed 179 colonies obtained after mutagenic treatment. Analysis of the data obtained for this populations showed that CA and PA are traits controlled by polygenes and that they are correlated (r = 0.3). The existence of a positive correlation indicates that selection for one trait without considering the other may alter one of the traits in an undesirable direction, since the objective of selection would be an increase in clotting activity and a decrease in proteolytic activity. Three cycles of recurrent mutation-selection were carried out to obtain improved strains. The ultraviolet light dose permitting a 5 per cent rate of cell survival was sufficient to generate genetic variability in the three selection cycles. At the end of the third cycle there was an increase of about 98 per cent in clotting activity and a decrease of about 20 per cent in proteolytic activity. Analysis of variance of the selective cycles showed that the linear effects were significant (P < 0.01) for both traits. Estimates of genetic variances and heritabilities of the three selection cycles are presented.
Subject(s)
Candida/genetics , Genetic Variation/radiation effects , Mutation/radiation effects , Selection, Genetic , Ultraviolet Rays/adverse effects , Analysis of Variance , Candida/metabolism , Cheese , Food Technology , Milk/enzymologyABSTRACT
O objetivo deste trabalho foi descrever o ciclo parassexual em Candida sp uma levedura que näo apresenta ciclo sexual. As condiçöes para isolamento e regeneraçäo de protoplastos foram estabelecidas para a linhagem selvagem de Candida sp. O polietileno glicol foi utilizado para induzir a fusäo dos protoplastos isolados a partir das linhagens auxotroficas (pab bio e ura arg). As colonias prototróficas originais após fusäo foram selecionadas por complementaçäo em meio mínimo. A partir de um produto de fusäo nuclear selecionado, foram obtidos vários recombinantes monoauxotróficos, os quais tiveram diametro nuclear similar às linhagens parenterais. este fato sugere que os recombinantes auxotróficos se originaram de perdas cromossomicas do produto de fusäo nuclear