Prevalencia de trypanosoma spp. mediante ELISA e inmunofluorescencia indirecta en tres rebaños de búfalos de agua del estado Cojedes, Venezuela / Prevalence of trypanosoma spp. by ELISA and indirect fluorescent antibody test in three water buffaloes herds from the State of Cojedes, Venezuela

Animal trypanosomiasis is a disease caused by parasites of the genus Trypanosome. This malady is widely distributed in many countries, located in tropical and subtropical areas of the world where blood-sucking flies are present. Water buffaloes are important domestic animals used for meat and milk production, and draught power. Buffalo herds are raised in areas where trypanosomiasis is endemic. In Venezuela, the buffalo industry is becoming a very important and common livestock. However, animals imported from non-endemic areas may suffer severe infections. The development of methods which ensure an efficient epidemiological surveillance against this disease is of great relevance. The immunological tests are of great importance for this purpose, because of the low sensitivity of the current parasitological methods, due to the low parasite burden that occur in subclinical and chronic infections caused by trypanosomes. To estimate the serological prevalence of trypanosome in water buffaloes, an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used in buffalo samples of healthy animals from the municipalities of Rómulo Gallegos, Ricaurte and Girardot, in the State of Cojedes, Venezuela. Additionally, samples were also assessed with the indirect fluorescence antibody test (IFAT) and the microhematocrit test (MHCT). A total of 180 blood samples, none of which had an active parasitemia by TMC, were assessed. The prevalence determined by ELISA was 45.56%, which was significantly (P<0.05) higher than that obtained by IFAT (28.89%). The results of the experiments showed a moderate Kappa index of concordance of 0.45 (95% CI: 0.31-0.58); whereas the concordance value for both tests was 73.33%. Both the sensitivity and specificity of ELISA, compared to the IFAT, was 82.69% and 69.53%, respectively. The predictive positive and negative values were 52.44% and 90.82%, respectively. The findings suggest an endemic condition, with moderate infection values caused by Trypanosoma spp. in buffaloes from these regions of Venezuela and show, for the first time, the usefulness of ELISA for epidemiological studies of trypanosomiasis.

Caracterización molecular de Trypanosoma vivax en ovinos naturalmente infectados en dos hatos de los municipios San Fernando y Biruaca estado Apure Venezuela / Molecular characterization of Trypanosoma vivax in naturally-infected sheep from two farms at San Fernando and Biruaca municipalities Apure state Venezuela

Este estudio tuvo como objetivo efectuar una caracterización molecular de Trypanosoma vivax en ovinos de dos hatos en los cuales estos rumiantes, conjuntamente con vacunos y búfalos de agua, comparten la misma área agroecológica, estableciendo el potencial papel de los ovinos como fuente de infección de tripanosomosis por T. vivax para los grandes rumiantes. La técnica de microcentrifugación capilar (TMC) fue usada para establecer el porcentaje de infecciones activas por tripanosomas existente en los animales evaluados. Se empleó un ensayo de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para confirmar la identificación de especie, mientras que un ensayo de PCR-RFLP (polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restricción) permitió evaluar la variabilidad intraespecífica entre los aislados de T. vivax detectados en ovinos vs. aquellos provenientes de bóvidos (vacunos y búfalos de agua), colectados en la misma área de producción. De las 320 muestras de sangre de ovinos colectadas, la TMC detectó positividad en 11 (4,35 por ciento), lo que es de gran relevancia epidemiológica debido a la baja sensibilidad de esta metodología. Los resultados de PCR permitieron caracterizar a T. vivax como la especie presente en todas las infecciones activas detectadas. Todos los animales infectados mostraron un valor de hematocrito inferior (P<0,05) al registrado en animales no infectados (22,435 vs. 31,450). El ensayo de PCR-RFLP permitió observar la existencia de perfiles de restricción similares entre los aislados de T. vivax evaluados, sugiriéndose la ausencia de variación intraespecífica para el marcador molecular en estudio, independientemente del origen de hospedador del que provino la muestra (ovinos, vacunos, búfalos de agua). Estos resultados permiten sugerir que los aislados de T. vivax que infectan ovinos, vacunos y búfalos de agua en el área de estudio pudiesen estar estrechamente relacionados desde un punto de vista genético y, consecuentemente...

This study was made to achieve a molecular characterization of Trypanosoma vivax in two Venezuelan farms where both small ruminants (mainly ovines) and bovines (cattle and water buffaloes) share the same agroecological area. In addition, it was made to assess the role of sheep as source of T. vivax infection for cattle and buffalo herds. The microhematocrit centrifugation technique (MHC) was used to establish the percentage of current trypanosome infection. A PCR-based assay was used to confirm the species identification while a PCR-RFLP assay was used for studying intra-specific variation among T. vivax from sheep vs. those from other livestock from the same area. From 320 sheep blood samples, MHC detected 11 (4,35 percent) which is of remarkable epidemiological significance due to the low sensitivity of this method. Based on PCR results, T. vivax was characterized as the only species responsible for all sheep infections. All infected animals showed a lower packed cell volume value (P<0,05) when compared with the non-infected (22,435 vs. 31,450). The PCR-RFLP technique revealed similar profiles among T. vivax isolates suggesting a non intra-specific variation within the molecular marker amplified regardless the host (sheep water buffaloes or cattle). Thus, it was suggested that T. vivax infecting sheep, cattle, and buffaloes in the study area could be genetically closely related. These findings show that sheep may play an important role in the epidemiology of livestock trypanosomiasis in this area and they might be incorporated into therapeutic and preventive programs against livestock trypanosomiasis.

Trypanosoma vivax nos tecidos testicular e epididimário de ovinos experimentalmente infectados / Trypanosoma vivax in testicular and epidydimal tissues of experimentally infected sheep

Quatro ovinos machos, com cerca de 12 meses de idade (Ovinos 1-4), foram infectados por via intravenosa com aproximadamente 1,25x10(5) tripomastigotas de Trypanosoma vivax, outros quatro ovinos (Ovinos 5-8) destinaram-se ao grupo controle. Após a infecção, exames clínicos visando avaliar temperatura retal, freqüências cardíaca e respiratória e parasitemia foram realizados diariamente por 30 dias, tempo estabelecido para o término do experimento. A avaliação do hematócrito foi realizada a cada cinco dias. Ao final do período experimental, os animais foram castrados e os testículos e epidídimos submetidos ao exame anatomopatológico. Amostras destes órgãos dos Ovinos 1, 4 e 5 foram tomadas para a realização da reação em cadeia da polimerase (PCR). Os parâmetros clínicos (hipertermia, aumento das freqüências cardíaca e respiratória, aumento de volume dos linfonodos e palidez das mucosas) mantiveram-se para o grupo infectado acima dos valores mostrados pelo grupo controle durante todo o período experimental. A parasitemia foi observada a partir do 3º dia pós-infecção (dpi) com picos nos 6-10os dpi e nos 15-18os dpi. Os Ovinos 1 e 4 apresentaram, a partir do 25º dpi, anemia acentuada. Macroscopicamente, todos os testículos dos animais do grupo infectado apresentaram-se flácidos e com coloração pálida. Microscopicamente, observaram-se degeneração testicular moderada a acentuada, epididimite multifocal e hiperplasia do epitélio epididimário. A análise por PCR de T. vivax nos tecidos testicular e epididimário resultou em 100% de positividade para ovinos infectados experimentalmente. As lesões epididimárias e testiculares associadas à presença do parasita nesses órgãos, detectada por PCR, sugerem a participação do parasita no mecanismo etiopatogênico de danos reprodutivos.(AU)

Four adult sheep (number 1, 2, 3 and 4), all males, were inoculated intravenously with 1ml of blood containing 1.25x10(5) trypomastigotes of Trypanosoma vivax, and Sheep 5, 6, 7 and 8 were used as control. After infection, clinical exams considering rectal temperature, respiratory and cardiac frequencies, and parasitaemia were recorded daily for a 30-day experiment period. Blood samples were obtained for 5-day intervals to hematocrit analysis. At the end of the experimental period, the sheep were orquiectomized. Testes and epididymides from these animals were studied anatomopathologically. Samples from these tissues of Sheep 1, 4 and 5 were taken to polymerase chain reaction (PCR). Clinical parameters remained for the infected group above the values observed in the control group during the experimental period. Parasitaemia was observed on day 3 post-infection, and the highest values occurred between day 6 and 10, and day 15 and 18 post-infection. Sheep 1 and 4 showed severe anemia on day 25 post-infection. All sheep of the infected group showed flabby and palid testes. Histologically, moderate to severe testicular degeneration, multifocal epididymitis and hyperplasia of epididymal epithelium were observed. The result of T. vivax PCR analysis in the testes and epididymal tissues was positive in 100% of the samples of the experimentally infected sheep. Epididymal and testicular lesions associated with the presence of the parasite in these tissues, shown by PCR, suggest the participation of T. vivax in the pathophysiological mechanism of reproductive damage.(AU)

Comportamiento natural de las fases no parasíticas de Rhipicephalus sanguineus (Latreille, 1806) (Acari: Ixodidae): en un bioterio canino de Venezuela / Natural behavior of non parasitic stages of Rhipicephalus sanguineus (Latreille, 1806) (Acari: Ixodidae): in a canine bioterio in Venezuela

El presente estudio determinó la fluctuación poblacional de las fases no parasíticas de Rhipicephalus sanguineus durante octubre 2000 - septiembre 2001. Mensualmente se recolectaron todas las garrapatas presentes en los distintos ambientes identificados dentro de las instalaciones del Bioterio de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad Central deVenezuela, Maracay, estado Aragua, Venezuela. Se recolectaron 16.065 ejemplares de R. sanguineus en diferentes fases de desarrollo: 5.981 larvas, 7.378 ninfas, 796 machos y 1.916 hembras; el mayor número se obtuvo en el interior de las jaulas (13.364), representando las ninfas la fase más abundante, tanto en el interior como en el exterior. El área pared/piso se destacó con el mayor número de ejemplares (6.830), seguida de huecos/grietas (6.068), ambas con predominio de ninfas; el análisis estadístico mostró significancia (P<0,05) solamente para los machos, demostrando que el área influyó en la presencia de esta fase. Las mayores poblaciones de garrapatas se obtuvieron en agosto, septiembre, enero y julio en el interior de las jaulas y en diciembre, en el exterior de las mismas. Se determinó significancia estadística (P<0,05) del ambiente interno sobre la presencia de los estadios larvas, ninfas y machos, no así para las hembras. En el ambiente externo, la presencia de garrapatas fue escasa (21) siendo las hembras la fase más recolectada (12); no hubo diferencias estadísticamente significativas (P>0,05) del ambiente externo sobre la presencia de hembras. Al correlacionar las distintas fases con la temperatura interna, se encontraron diferencias significativas (P<0,05); en relación con la humedad sólo se estableció significancia para la presencia de machos en el área huecos-grietas (P<0,05). Estos resultados confirman la adaptabilidad de R. sanguineus a las edificaciones urbanas y su alta prolificidad en microhábitantes internos y externos, afectados por condiciones ambientales como humedad y temperatura.

This study determined poblational fluctuations of all non-parasitic forms in each developmental stage of Rhipicephalus sanguineus between October 2000 and September 2001. Through monthly sampling, all ticksfound in each identified area of the kennel at the Universidad Central de Venezuela, college of Veterinay Sciences, Maracay, Venezuela. A total of 16,065 specimens of R. sanguineus in all developmental stages were collected: 5,981 larvae, 7,378 nymphs, 796 adult and 1.916 females; the highest was found inside the dog as well outside the dog cage. The area between wall and floor had the highest number of specimens (6,830), followed by the area of holes and cracks (6,068); both showed prevalence of nymphs. Statistical analysis on developmental stage and internal environment was a significative association (P<0.05) only for males, indicating that the area affected the presence this stage. The largest populations of the ticks were found inside the cages in August, September, January and July and outside of them in December. Statistical tests showed significative differences in the internal environment for the presence of larvae, nymph and male stages, but not for female. In the external environment, ticks were scarcely present (21) being the females the most collected specimen (12). There was no significant effect (P<0.05) of external environment on the presence of females. Applying correlation tests between different stages and internal temperature, significant differences were found (P<0.05). Regarding humidity, there was only statistical significant differences for males found in holes and cracks (P<0.05). These results confirm R. sanguineus adaptability to urban buildings and its high rate of reproduction in internal and external microhabitats, both being affected by environmental conditions, such as humidity and temperature.

Efecto de la infección aguda por trypanosoma evansi sobre la reactividad vascular de la aorta de rata / Effect of acute trypanosoma evansi infection on vascular reactivity of rat aorta

La tripanosomiasis animal causada por Trypanosoma evansi y Trypanosoma vivax, afecta la productividad de las explotaciones ganaderas. Se han realizado múltiples investigaciones relacionadas con esta entidad; sin embargo existe escasa información sobre sus efectos en el sistema cardiovascular, limitándose al reporte de cambios en la reactividad vascular al Trypanosoma brucei. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de la infección aguda por Trypanosoma evansi sobre la reactividad vascular de la aorta de rata. Se utilizaron 30 ratas macho Sprague-Dawley, de las cuales 16 ratas se inocularon con T. evansi. Cuando alcanzaron una parasitemia elevada, se anestesiaron, se midió la presión arterial y se obtuvieron muestras de sangre, órganos y segmentos de aorta torácica. Estos últimos se montaron en baños de órgano aislado a 37°C en solución de Krebs, aireada con gas carbógeno (O2 95 por ciento, CO2 5 por ciento) bajo tensión inicial de 1 g. Se evaluó la respuesta a una solución despolarizante de KCl (SDK) 40 mM, Fenilefrina (FE), Serotonina (5HT), Acetilcolina (ACh) y Nitroprusiato de sodio (NP) a través de transductores isométricos acoplados a un polígrafo. Luego de la inoculación se desarrolló un cuadro clínico agudo (3 días), caracterizado por lecucocitosis por neutrofilia. La esplenomegalia asociada a hemorragia y congestión esplénica, fue el hallazgo histopatológico más relevante. La contracción máxima (Cmax) a SDK y 5HT no mostró diferencias significativas; sin embargo; se observó una reducción significativa en la Cmax a FE en el grupo inoculado (721,0 ± 36,99 mg/mg peso seco vs 610,1 ± 45,19 mg/mg peso seco p<0,05). El porcentaje de relajación máxima ante ACh se redujo significativamente en el grupo inoculado (81,12 ± 5,249 por ciento vs 50,61 ± 6,057 por ciento p<0,05), sin observarse cambios en la velocidad de relajación frente a NP. Los resultados permiten sugerir que durante el cuadro agudo de la tripanosomiasis por T. evansi.

Detección parsitológica y molecular de infecciones naturales por trypanosoma evansy y trypanosoma vivax en búfalos de agua (bubalus bubalis) y chigüires (hydrochoerus hydrochaeris) en los estados Apure Cojedes y Guárico Venezuela / Parasitological and molecular detection of natural infection by trypanosoma evansi and trypanosoma vivax in water buffaloes (bubalus bubalis) and capybaras (hydrochoerus hydrochaeris) in Apure Cojedes and Guarico states Venezuela

Este estudio evaluó la presencia de Trypanosoma evansi y Trypanosoma vivax en búfalos de agua (Bubalus bubalis) y chigüires (Hydrochoerus hydrochaeris) de tres estados de Venezuela por técnicas parasitológicas y moleculares (frotis teñido: FT; microcentrifugación capilar: TMC; reacción en cadena de la Polimerasa: PCR), estableciéndose el porcentaje de infecciones activas. En 316 muestras sanguíneas de búfalos las tasas de detección para FT, TMC y PCR fueron de 20 (6,33 por ciento), 36 (11,39 por ciento) y 60 (18,98 por ciento),respectivamente. Por PCR se caracterizó a T. vivax como la especie responsable de todas las infecciones, no detectándose presencia de T. evansi. En 186 muestras de chigüires FT y TMC identificaron positividad en 36 (19,35 por ciento) y 71 (38,17 por ciento) de estas, respectivamente, con altas parasitemias; en 27 de estas se observaron tripanosomas del Subgénero Megatrypanum. Por PCR se caracterizaron como T. evansi 51 muestras de chigüires, seis con resultados TMC-negativo. No se detectó T. vivax en chigüires. Un análisis de t-student estableció diferencias (p<0.05) entre los valores de hematocrito (Ht) de búfalos positivos y negativos a tripanosomas; mientras que por análisis de varianza se detectó efecto (p< 0.05) del grado de parasitemia sobre el Ht. No hubo ningún efecto (p>0.05) al realizar los mismos análisis para las muestras de chigüires.

Detección diferencial de trypanosoma evansi y trypanosoma vivax mediante un ensayo de reacción en cadena de la polimerasa / Differential detection of trypanosoma evansi and trypanosoma vivax through a polymerase chain reaction assay

El propósito de este trabajo fue optimizar un ensayo de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para efectuar el diagnóstico diferencial de Trypanosoma evansi y Trypanosoma vivax, usando cebadores previamente descritos: 21-mer/22-mer e ILO1264/ILO1265. La especificidad se evaluó efectuando pruebas preliminares sobre muestras de ADN purificado de diversas especies de parásitos y sobre mezclas de éstas. La sensibilidad se valoró empleando diluciones de ADN de aislados de referencia de T. evansi y T. vivax y concentraciones variables de cebadores. El ensayo optimizado mostró una sensibilidad de 10 pg de ADN, con especificidad para el Subgénero Trypanozoon (cebadores 21-mer/22-mer) y especificidad absoluta para T. vivax (cebadores ILO1264/ILO1265). Ambos grupos de cebadores mostraron potencialidad para detectar infecciones mixtas T. evansi/T. vivax. Un análisis de hibridación sobre el patrón de cariotipo de diversos Kinetoplastida, usando la sonda Te-ADN, mostró su carácter repetitivo y la distribución de su secuencia en diferentes cromosomas de T. evansi TE0. La PCR fue evaluada como herramienta diagnóstico de la presencia de tripanosomas en muestras sanguíneas de animales con infecciones experimentales, demostrando alta sensibilidad al detectar positividad hasta 72 horas antes que lo hicieran los métodos parasitológicos. Este ensayo también fue evaluado sobre muestras sanguíneas de búfalos de agua con infecciones naturales, mostrando alta sensibilidad y especificidad al detectar 9/86 muestras como positivas a T. vivax, revelando una tasa de infección activa de 10,47 por ciento; valor tres veces superior a los resultados de la evaluación microscópica de frotis teñidos (3,49 por ciento) y casi dos veces superior (6,98 por ciento) a la técnica parasitológica de microcentrifugación capilar. En ninguna de las muestras de búfalos evaluadas se detectó T. evansi.