Producción de biofilm y presencia de genes icaABCD en cepas de Staphylococcus aureus aisladas de leche cruda / Biofilm production and presence of genes icaABCD in Staphylococcus aureus strains isolated from raw milk

En la patogénesis de la mastitis estafilocócica, el biofilm se considera un marcador de virulencia que permite la adherencia del microorganismo al epitelio mamario. Con la finalidad de determinar la producción de biofilm y detectar la presencia de genes icaABCD, se analizaron 30 cepas de S. aureus aisladas de leche cruda obtenida de vacas con mastitis subclínica. El biofilm se determinó por el método cuantitativo sobre microplacas de cultivo celular y los genes icaABCD por reacción en cadena de la polimerasa. En 96,67% de las cepas de S. aureus se observó producción de biofilm. De éstas 43,34% fueron fuertes productoras, 30,00% moderadas productoras, 23,33% débiles productoras y 3,33% no productoras de biofilm. La totalidad de los genes icaADCD se obtuvo en 6,66% de los aislamientos. Todas las cepas, excepto una, presentaron icaA o icaD. En 56,66% de los aislamientos se identificaron genes icaA/icaD. En todas las cepas productoras de biofilm se identificaron genes del operón icaABCD, lo cual evidencia que poseen un factor de virulencia que facilita su persistencia en el tejido mamario. Además, el biofilm constituye una fuente de contaminación microbiana que puede conducir a fallas en los procesos de producción que generen problemas de inocuidad de los alimentos.

In the pathogenesis of staphylococcal mastitis the biofilm is considered a marker of virulence that allows the adhesion of the microorganism to the mammary epithelium. In order to determine the production of biofilm and the presence of icaABCD gene, 30 S. aureus strains isolated from raw milk obtained from cows with subclinical mastitis were analyzed. Biofilm production was determined by the quantitative method on microplates for cell culture and the presence of genes icaABCD by polymerase chain reaction. Biofilm production was observed in 96.67% of strains of S. aureus. These 43.34% were strong producers, 30.00% producing moderate, 23.33% weak producers and 3.33% non producing biofilm. All of the icaABCD genes was obtained at 6.66% of the isolates. All strains, except one, presented icaA or icaD. 56,66% of isolates identified genes icaA/icaD. The icaABCD operon genes were identified in all biofilm-producing strains, which demonstrates that they possess a virulence factor that facilitates its persistence in the breast tissue. In addition, the biofilm is a source of microbial contamination which can lead to failures in production processes that generate problems of food safety.

Leucocidina de Panton Valentine en cepas SAMR aisladas de pacientes del Hospital Universitario de Maracaibo / Panton Valentine leukocidin in MRSA strains isolated from patients at the University Hospital of Maracaibo

Staphylococcus aureus se presenta como un patógeno cada vez más importante, debido al arsenal de factores de virulencia que presenta, sumado a su elevada capacidad de generar resistencia a los antimicrobianos Los objetivos de esta investigación fueron: confirmar la resistencia a meticilina mediante la amplificación del gen mecA y detectar la presencia de los genes que codifican el factor de virulencia leucocidina de Panton Valentine (PVL). Se investigaron estos genes empleando la reacción en cadena de polimerasa (PCR). Todos los aislamientos presentaron el gen mecA, el 50% de estas cepas resultó portador del gen para PVL. El 54,17% de las muestras de pacientes pediátricos, dio positivo para esta leucocidina. El mayor porcentaje de aislamiento se encontró en muestras de piel y tejidos blandos (85,7%).

Staphylococcus aureus is an increasingly important pathogen, due to the arsenal of virulence factors which presents, in addition to its high capacity to generate antimicrobial resistance. The objectives of this research were: confirm methicillin resistance by amplification the mecA gene and the presence of genes that encode Panton Valentine leucocidin (PVL) virulence factor. These genes have been investigated using polymerase chain reaction (PCR). All isolates showed the mecA gene, 50% of these strains were carrying the gene for PVL. 54,17% of the samples from pediatric patients, yield positive for this leukocidin. The highest percentage of isolation was found in samples of skin and soft tissues (85.7%).

Producción de Enterotoxina y Biofilm en Aislamientos Clínicos de Staphylococcus aureus Resistente a Meticilina / Enterotoxin and Biofilm Production in Clinical Isolates of Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus

S. aureus se ha convertido en un problema de salud pública, debido a la dificultad que representa el tratamiento de las infecciones causadas por SARM. El propósito de esta investigación fue determinar la producción de enterotoxinas A, B, C y D y la producción de biofilm en aislamientos de SARM. Se estudiaron 50 cepas aisladas de diferentes tipos de muestras clínicas. La detección de enterotoxinas se realizó por la técnica de aglutinación en fase reversa y la producción de biofilm mediante: agar rojo congo y el método en microplacas de cultivos celulares. La producción de enterotoxina se observó en 9 cepas (18%), siendo la enterotoxina D (64%) la más prevalente, seguida de la B (27%) y la A (9%). Se demostró una asociación significativa entre la producción de enterotoxina y el tipo de muestra de la que provenía la cepa. La producción de biofilm se constató en 30% y 98% de las cepas por los métodos de agar rojo congo y microplacas de cultivos celulares, respectivamente; sólo en 15 cepas (30%) se observó correlación de ambos ensayos, se demostró que el método en microplacas de cultivo celular es más eficaz para detectar la producción de biofilm en S. aureus.

S. aureus has become a public health problem, due to the difficulty of treating infections caused by methicillin-resistant S. aureus (MRSA). The purpose of this research was to determine the production of enterotoxins A, B, C and D and the production of biofilm in clinical isolates of MRSA. Fifty MRSA strains isolated from different types of clinical samples were studied. Detection of enterotoxins was carried out using the technique of reversed phase agglutination, while biofilm production was studied through two tests: Congo red agar and the microplate cell culture method. Enterotoxin production was observed in 9 strains (18%); enterotoxin D (64%) was the most prevalent, followed by B (27%) and A (9%). A significant association was shown between enterotoxin production capacity and the type of sample that came from the strain. Biofilm production was found in 30% and 98% of the strains using the Congo red Agar and microplate cell culture methods, respectively. A correlation of both trials was observed in only 15 strains (30%). It was shown that the microplate cell culture method is more effective for detecting biofilm production in S. aureus strains.

Calidad microbiológica y bacterias enteropatógenas en vegetales tipo hoja / Microbiological quality and enteropathogenic bacteria in leaf vegetables

Para analizar la calidad microbiológica en vegetales tipo hoja y la incidencia de bacterias enteropatógenas se analizaron 150 muestras (50 lechugas, 50 cilantros y 50 perejiles) recolectadas en dos supermercados de Maracaibo. Se determinó Coliformes Totales (CT) y Escherichia coli (EC) según la norma COVENIN Nº3276:1997; para la determinación de bacterias enteropatógenas (Salmonella, Aeromonas y Vibrio) se utilizaron medios de enriquecimiento y selectivos. La identificación de especies se realizó empleando pruebas bioquímicas. En 81,33% (122/150) de las muestras se obtuvieron contajes de CT entre 10³-10 5 UFC/g. La recuperación de EC fue de 10,00%. La frecuencia de enteropatógenos fue de 28%, siendo Aeromonas el género más aislado con un 95,91%. La mayor recuperación de enteropatógenos se obtuvo en las muestras de cilantro (40,00%), seguida de perejil (34,00%) y lechuga (20,00%); A. caviae fue la especie más recuperada (59,18%) seguida de A. hydrophila (30,62%). Salmonella spp se recuperó en 2 (4,08%) muestras. La presencia de indicadores entéricos (CT y EC) y de bacterias enteropatógenas sugiere que los vegetales tipo hoja presentan una inadecuada calidad sanitaria y pueden ser fuente de gastroenteritis

To analyze the microbiological quality of leaf vegetables and the incidence of enteropathogenic bacteria, 150 samples (50 lettuce, 50 coriander and 50 parsley) collected in two supermarkets in Maracaibo, were studied. Total coliforms (TC) and Escherichia coli (EC) according to COVENIN guideline N° 3276: 1997, were determined; for the identification of enteropathogenic bacteria (Salmonella, Aeromonas, Vibrio), enrichment and selective media were used. Species identification was made using biochemical tests. In 81.33% (122/150) of the samples obtained, TC counts were between 10³-10 5 CFU/g. EC recovery was 10.00%. The frequency of enteropathogens was 28%, with Aeromonas the most isolated genus (95.91%). Greater recovery of enteropathogens was obtained from coriander (40.00%), followed by the parsley (34.00%) and lettuce samples (20.00%); A. caviae was the most recovered specie (59.18%) followed by A. hydrophila (30,62%). Salmonella spp were recovered in 2 samples (4.08%). The presence of enteric indicators (TC and EC) and enteropathogenic bacteria suggests that the sanitary condition of the leafy vegetables is inadequate and can be a source of gastroenteritis

Diagnóstico molecular y prevalencia de infecciones por Chlamydia trachomatis en pacientes sintomáticas y asintomáticas de una población del estado de Zulia, Venezuela / Molecular diagnosis and Chlamydia trachomatis infections prevalence in symptomatic and asymptomatic patients of a population of the Zulia State, Venezuela

Chlamydia trachomatis es uno de los patógenos de transmisión sexual predominantes en el mundo. Limitaciones técnicas para su diagnóstico dificultan la estimación de su verdadera prevalencia. El objetivo de este trabajo fue investigar la prevalencia de infecciones por C. trachomatis en pacientes sintomáticas y asintomáticas, a través de dos ensayos de amplificación por RPC. Se hizo extracción de ADN de hisopados endocervicales de 105 pacientes y se analizaron por RPC. Se consideraron positivas para C. trachomatis, aquellas muestras en las cuales se detectaron fragmentos en ambas reacciones de RPC. Las tasas de prevalencia fueron de 13,7 por ciento, 7,4 por ciento y 10,4 por ciento para las pacientes sintomáticas, asintomáticas y la población total, respectivamente. La mayor prevalencia se registró en pacientes sintomáticas del grupo etario de 20 a 30 años (19,2 por ciento). La prevalencia de infecciones por C. trachomatis en la población fue relativamente alta y se debe resaltar la importancia de aplicar estrategias diagnósticas, como la reportada en el presente estudio, que permitan detectar el patógeno y brindar a las pacientes terapias adecuadas y oportunas.

One of the world-wide most prevalent sexually transmitted pathogens is Chlamydia trachomatis. Technical limitations in their detection difficult the estimation of it true prevalence. The aim of this study was to investigate C. trachomatis prevalence in symptomatic and asymptomatic patients by two PCR assays. DNA extraction of endocervical swabs from 105 patients were performed and the samples tested by PCR. Positive samples for C. trachomatis were considered if fragments in both PCR reactions were observed. The prevalence rates were 13.7 percent, 7.4 percent and 10.4 percent for the symptomatic, asymptomatic patients and the total population, respectively. Highest prevalence was registered in symptomatic 20 to 30 years old patients. (19.2 percent) Chlamydia trachomatis prevalence in the population was relatively high and is desirable to apply diagnostics strategies as the reported one in this study to detect the pathogen and offer an adequate and opportune treatment to patients.