ABSTRACT
A infecção pelo Vírus da Hepatite B (HBV) está relacionada a diversas formas de evolução clínica, porém os fatores determinantes do curso clínico da infecção ainda não estão claramente definidos. Diversos estudos têm evidenciado que a variabilidade genética do HBV pode estar associada com diferentes taxas de transmissão, evolução clínica da doença, resposta ao tratamento ou progressão para carcinoma hepatocelular. A prevalência da infecção pelo HBV no Brasil é considerada intermediária, porém algumas regiões apresentam uma elevada endemicidade, apesar disso ainda há poucas informações disponíveis sobre a variabilidade genética das cepas circulantes. O objetivo deste trabalho foi padronizar reações de PCR e seqüenciamento para a caracterização de genomas completos do HBV de diferentes genótipos que circulam no Brasil. Uma amostra previamente determinada como genótipo D foi utilizada para a padronização, posteriormente 30 amostras pertencentes aos diferentes genótipos já caracterizados no Brasil com base na seqüência parcial do gene S foram então caracterizadas. O DNA extraído foi amplificado utilizando-se os primers P1 e P2 (Günther et al., 1995) e a mistura de enzimas ELONGASE, sendo que para amplificar algumas amostras houve a necessidade de realização de reações de nested PCR. Os produtos amplificados foram purificados e seqüenciados utilizando-se o seqüenciador automático ABI model 377. Com esta metodologia, foram caracterizados 19 genomas completos do HBV (4 genótipo A, 1 genótipo B, 5 genótipo C, 3 genótipo D, 5 genótipo F e 1 genótipo H). A análise filogenética demonstrou que os dois subgruposdo genótipo A (A1 e A2) circulam no Brasil, assim como dois subgrupos (Ib e II) do genótipo F. No gene pré-core foi observada a mutação G1896A, principalmente entre as amostras pertencentes ao genótipo C e D; no genepré-S foram identificadas deleções em duas amostras genótipo F; no gene S de algumas amostras foram identificadas mutações relacionadas ao escape ...
Subject(s)
Genome, Viral , Genotype , Hepatitis B virus/genetics , Molecular Epidemiology , Mutation , Polymerase Chain Reaction/methods , Brazil , Public HealthABSTRACT
A infecção pelo Vírus da Hepatite B (HBV) está relacionada a diversas formas de evolução clínica, porém os fatores determinantes do curso clínico da infecção ainda não estão claramente definidos. Diversos estudos têm evidenciado que a variabilidade genética do HBV pode estar associada com diferentes taxas de transmissão, evolução clínica da doença, resposta ao tratamento ou progressão para carcinoma hepatocelular. A prevalência da infecção pelo HBV no Brasil é considerada intermediária, porém algumas regiões apresentam uma elevada endemicidade, apesar disso ainda há poucas informações disponíveis sobre a variabilidade genética das cepas circulantes. O objetivo deste trabalho foi padronizar reações de PCR e seqüenciamento para a caracterização de genomas completos do HBV de diferentes genótipos que circulam no Brasil. Uma amostra previamente determinada como genótipo D foi utilizada para a padronização, posteriormente 30 amostras pertencentes aos diferentes genótipos já caracterizados no Brasil com base na seqüência parcial do gene S foram então caracterizadas. O DNA extraído foi amplificado utilizando-se os primers P1 e P2 (Günther et al., 1995) e a mistura de enzimas ELONGASE, sendo que para amplificar algumas amostras houve a necessidade de realização de reações de nested PCR. Os produtos amplificados foram purificados e seqüenciados utilizando-se o seqüenciador automático ABI model 377. Com esta metodologia, foram caracterizados 19 genomas completos do HBV (4 genótipo A, 1 genótipo B, 5 genótipo C, 3 genótipo D, 5 genótipo F e 1 genótipo H). A análise filogenética demonstrou que os dois subgruposdo genótipo A (A1 e A2) circulam no Brasil, assim como dois subgrupos (Ib e II) do genótipo F. No gene pré-core foi observada a mutação G1896A, principalmente entre as amostras pertencentes ao genótipo C e D; no genepré-S foram identificadas deleções em duas amostras genótipo F; no gene S de algumas amostras foram identificadas mutações relacionadas ao escape d