Qualitative and quantitative analysis of rabbit's fat mesenchymal stem cells / Análise quantitativa e qualitativa de células tronco mesênquimais da gordura de coelhos

PURPOSE: To present an experimental model of qualitative and quantitative analysis of mesenchymal stem cells from fat of rabbits obtained by lipectomy. The fat could be a great source for obtaining mesenchymal stem cells and to create conditions for repairing injured tissues by bioengineering. METHODS: New Zealand rabbits (n= 10) adipose panicle (2-3 cm) were removed by lipectomy, fragmented and washed with PBS and enzymatically dissociated with trypsin/EDTA. Lately, these cells were incubated in culture medium DMEM and after 20 days, was performed quantitative analysis of the accession of first and second mesenchymal cells in cell culture bottles. RESULTS: The fat total cells (CTF) were 1.62 x10(6) cells/mL and presented 98 percent of viability. These cells were taken for cultivation and after 20 days were counted 2.88 x10(6) cells/mL MSC. The same was done and after 20 days we quantified 4.28 x10(6) cells/mL MSC. CONCLUSION: The lipectomy of adipose panicule is a very satisfactory method to extract stem cells from fat, quantitatively and qualitatively.

OBJETIVO: Apresentar um modelo experimental de análise qualitativa e quantitativa de células tronco mesênquimais proveniente da gordura de coelhos obtido por lipectomia. A gordura poderia ser uma grande fonte de obtenção de células tronco mesenquimais, criando condições para a reparação de tecidos lesados. MÉTODOS: Foram removidos os panículos adiposos (2-3 cm) da região cervical de Coelhos Nova Zelândia (n = 10) por lipectomia. Os panículos foram fragmentados e lavados com PBS e, posteriormente, dissociados enzimaticamente com tripsina / EDTA. As células extraídas do panículo adiposo foram incubadas em meio de cultura DMEM e após 20 dias, foi realizada uma análise quantitativa da adesão de primeira e segunda passagem das células mesênquimais em garrafas de cultura. RESULTADOS: Foram extraídas 1,62 x106 cel/ mL células totais de gordura (CTG) with 98 por cento de viabilidade. Essas células foram levadas para o cultivo e após 20 dias, foi realizada a primeira passagem (1pd) sendo quantificadas 2,88 x10(6) cel/mL células tronco mesênquimais (CTM). Na segunda passagem (2pd) foi obtido 4,28 x10(6) cel/mL CTM. CONCLUSÃO: A lipectomia do paniculo adiposo é um método muito satisfatório para extrair células tronco a partir de gordura, quantitativamente e qualitativamente.

Comparative study of technique to obtain stem cells from bone marrow collection between the iliac crest and the femoral epiphysis in rabbits / Estudo comparativo da técnica para a obtenção de células tronco pela coleta de medula óssea entre a crista ilíaca e epífise do fêmur em coelhos

PURPOSE: To assess the technique for the collection of rabbit bone marrow stem cells from different regions to be used as an experimental model in regenerative medicine. METHODS: Thirty rabbits were allocated into 2 groups: GROUP A, n=8, animals that underwent bone marrow blood (BMB) harvesting from the iliac crest; and GROUP B: including 22 rabbits that underwent BMB harvesting from the femur epiphysis. After harvesting, mononuclear cells were isolated by density gradient centrifugation (Ficoll - Histopaque). The number of mononuclear cells per ml was counted in a Neubauer chamber and cell viability was checked through Tripan Blue method. RESULTS: Harvesting from the iliac crest yielded an average of 1 ml of BMB and 3,6.10(6) cells/ml over 1 hour of surgery, whereas an average of 3ml of BMB and 11,79.10(6) cells./ml were obtained in 30 min from the femur epiphysis with a reduced animal death rate. CONCLUSION: The analysis for the obtention of a larger number of mononuclear cells/ml from rabbit bone marrow blood was more satisfactory in the femur epiphysis than in the iliac crest.

OBJETIVO: Avaliar a técnica mais promissora para a coleta de células tronco adultas de medula óssea de coelhos para a utilização do mesmo como modelo experimental na medicina regenerativa. MÉTODOS: Foram utilizados 30 coelhos divididos em 2 grupos: GRUPO A, n=8, onde realizamos a coleta de sangue de medula óssea (MO) da crista ilíaca e grupo B, n=22, onde realizamos a coleta de sangue da medula óssea da epífise do fêmur. Após as coletas, realizamos a separação das células mononucleadas através do gradiente de densidade (Ficoll-Hystopaque). Através da câmara de Neubauer realizamos a contagem das células mononucleadas por ml. Testamos a viabilidade celular através do método Tripan Blue. RESULTADOS: Na coleta de sangue de MO na crista ilíaca obtivemos a média de 1 ml durante 1 hora de procedimento cirúrgico, obtendo a quantidade de 3,6 .10(6) células/ml, enquanto que a punção na epífise do fêmur obtivemos a média de 3 ml durante 30 minutos de procedimento cirúrgico obtendo a quantidade de 11,79.10(6) cél./ml diminuindo o óbito dos animais. CONCLUSÃO: A análise para a obtenção de maior número de células mononucleadas/ml de sangue de medula óssea de coelho foi mais satisfatória na região da epífise do fêmur em comparação com a crista ilíaca.

Efeitos do oleato de etanolamina na parede venosa, de cäes / Ethanolamine oleate effects on venous dog wall

OBJETIVO: Avaliar a resposta biológica que o oleato de etanolamina possa desencadear na parede de veias superficiais normais de cäes. MÉTODOS: Utilizados 39 cäes, sem raça definida, adultos, machos, com peso variando entre 10 a 18 kg, distribuídos de modo aleatório em três grupos: grupo 1, avaliados após 7 dias, grupo 2, 14 dias e grupo 3, 21 dias. O procedimento foi realizado em duas fases. A primeira constou da injeçäo de 2 ml do oleato de monoetanolamina a 5 por cento, por punçäo única na veia cefálica do membro torácico do cäo. A segunda, realizada 7, 14 e 21 dias após, constou da retirada da peça operatória, tendo sido executada em três tempos diferentes, conforme o grupo a que pertencia o animal. As veias contralaterais foram extraídas como controle. Para estudo histológico utilizaram-se os métodos de hematoxilina-eosina e tricrômio de Masson. RESULTADOS: A trombose venosa e a organizaçäo do trombo ocorreram em todos animais estudados. A recanalizaçäo do trombo näo foi observada de modo estatisticamente significante, até 21 dias de exame. Encontrou-se lesäo de túnica média, que näo foi acompanhada de correspondente processo inflamatório. Na túnica adventícia este processo foi visto nos três períodos de tempo estudados. Depósitos de hemossiderina em fagócitos ocorreram aos 14 e 21 dias de experimento. Extravasamento de esclerosante foi observado somente na primeira semana de estudo. Material hialino fibrinóide foi encontrado aos 21 dias de experimento. CONCLUSÕES: O oleato de etanolamina em contato com a parede interna da veia superficial produziu trombose venosa, a qual se organizou em todos os casos, näo se observando sua recanalizaçäo durante o tempo deste ensaio. Houve lesäo da túnica média venosa em todos animais estudados, sem que houvesse processo inflamatório reativo nesse local. Na túnica adventícia venosa surgiu processo inflamatório, além de sinais de extravasamento do esclerosante, da presença de hemossiderina e de material hialino externos à veia.

Efeitos do etil-cianoacrilato na parede venosa de cäes / Etil-cyanoacrylate effects on venous dog wall

Substâncias químicas têm sido empregadas no tratamento de varizes esofagogástricas na prevençäo de hemorragia digestiva e no seu tratamento pela esclerose ou obliteraçäo venosa, como uma alternativa ao tratamento cirúrgico. O adesivo sintético, etil-cianoacrilato, mostrando rápida polimerizaçäo, baixo custo, disponibilidade comercial e boa fluidez para a injeçäo intravenosa, é útil neste propósito. OBJETIVO: Estudar os efeitos do etil-cianoacrilato na parede venosa de cäes. MÉTODOS: Foram utilizados 42 cäes, sem raça definida, adultos, machos, com peso variando entre 10 a 13 kg, distribuídos de modo aleatório, em três grupos: grupo 1, avaliados após 7 dias, grupo 2 , 14 dias e grupo 3 , 21 dias. O procedimento foi realizado em duas fases. A primeira constou da injeçäo de 1 ml de etil-cianoacrilato, por punçäo única, na veia cefálica do membro torácico do cäo. A segunda, realizada 7, 14 e 21 dias após, constou da retirada da peça operatória, contendo o polímero no seu interior e da veia contralateral, sem o mesmo, como controle. Para estudo histológico utilizou-se o método da hematoxilina-eosina. Variáveis estudadas: obliteraçäo, reaçöes inflamatórias: aguda e crônica, tecido de granulaç o e lesäo de parede das veias. RESULTADOS: A obliteraçäo ocorreu em todos cäes estudados, nos períodos de 7, 14 e 21 dias. A reaçäo inflamatória surgiu no período de 7 dias e foi encontrada em todos animais aos 14 e 21 dias. O tecido de granulaçäo após 21 dias. A lesäo de parede venosa ocorreu em todas veias estudadas. CONCLUSAO: O etil-cianoacrilato em contato com a parede interna de veia superficial provoca obliteraçäo da veia e lesäo da parede venosa de cäes.

Estudo comparativo da resistência à traçao das cicatrizes nas laparotomias longitudinais e transversais em ratos / Comparative study of the tensile strength of scars on logitudinal and transverse laparotomy on mice

Foi realizado estudo experimental com objetivo de investigar as cicatrizes obtidas após laparotomias longitudinais e transversais. Utilizaram-se 60 ratos machos Wistar e realizaram-se 30 laparotomias transversais e 30 longitudinais, com técnicas de diérese e síntese padronizadas. No 7 , 14 , e 21 dias de pós operatório foram sacrificados 10 animais de cada grupo, e deles retirados dois retalhos de parede abdominal ventral: um contendo cicatriz do plano músculo-aponeurótico-peritoneal e o outro, o tecido íntegro simétrico. Após a retirada dos pontos de sutura os retalhos foram expostos a forças crescentes aplicadas perpendicularmente à cicatriz, e no mesmo sentido para os retalhos contendo tecido íntegro, com auxílio de dinamômetro eletrônico. Os resultados foram analisados estatisticamente concluindo-se serem as cicatrizes das laparotomias longitudinais mais resistentes à traçao do que as transversais no 7 e 14 dias de pós-operatório.